Effets du flux sanguin sur les substrats de silicium

Pour la sécurité des patients, les enquêteurs mesureront les laboratoires suivants :

Tests sanguins (sécurité et fréquence de routine). NFS/plaquettes : q 1 h, à HD le lendemain ABG, y compris lactate : Q 1 h x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Créatinine, Ca, Ca ionisé, Mg, Phos : Début, fin, à HD suivant jour Test de la fonction hépatique : début, fin, à HD le lendemain LDH : début, fin, à HD le lendemain Test direct de Coombs : début, fin, à HD le lendemain ESR et hsCRP : début, fin, à HD le lendemain CPK : Début, fin PT/PTT : Début, fin

Les enquêteurs effectueront également des tests sanguins de recherche :

IL-6 : Début, fin, à l'HD le lendemain Complément : Début, fin, à l'HD le lendemain Haptoglobine : Début, fin, à l'HD le lendemain Hg libre : Début, fin, à l'HD le lendemain Fibrinogène, D-dimères : Début , fin, en HD le lendemain

De plus, les enquêteurs effectueront des tests matériels une fois le test de chaque participant terminé.

Études matériaux après tests in vivo :

Études d'adhésion cellulaire et protéique :

1. La microscopie électronique à balayage. Le SNM sera placé dans une solution contenant 2 % de glutaraldéhyde (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3 % de saccharose (Sigma Aldrich) et 0,1 M de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à 4 °C et pH 7,4. Après 1 heure, les substrats sont rincés deux fois avec du PBS pendant 30 minutes à 4°C et lavés avec de l'eau distillée pendant 5 minutes. La déshydratation est obtenue en plaçant les substrats dans de l'éthanol à 50 % pendant 15 minutes tout en augmentant la concentration d'éthanol à 60 %, 70 %, 80 %, 90 % et enfin 100 %. Les échantillons déshydratés sont ensuite montés sur des talons en aluminium, recouverts d'or-palladium et examinés à l'aide de la microscopie électronique à balayage (SEM ; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunohistochimie. L'adhésion et l'activation des plaquettes sont évaluées à l'aide d'une coloration par immunofluorescence pour le marqueur plaquettaire, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) et le marqueur de caillot sanguin, activateur tissulaire du plasminogène (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Les plaquettes sont fixées dans du paraformaldéhyde à 4 % (Fisher Scientific, Waltham, MA) pendant 15 minutes puis incubées dans de l'albumine de sérum bovin à 1 % pendant 30 minutes pour bloquer la liaison non spécifique. Les plaquettes sont doublement marquées comme suit : les substrats ont d'abord été incubés avec des anticorps primaires (t-PA), dilués à 1:50 dans du PBS pendant 60 minutes, puis avec l'anticorps anti-souris d'âne Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) dilué à 1 : 100 dans du PBS pendant 60 minutes. Enfin, les échantillons sont incubés avec un anticorps monoclonal de souris anti-CD41 humain marqué à l'isothiocyanate de fluorescéine dilué à 1:300 dans du PBS pendant 60 minutes. Les images seront acquises par répétition à l'aide d'un microscope inversé motorisé Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) pour obtenir un total de 12 images par substrat. L'intensité fluorescente des images est quantifiée à l'aide d'ImageJ.