Wpływ przepływu krwi na podłoża krzemowe

Dla bezpieczeństwa pacjentów badacze przeprowadzą pomiary w następujących laboratoriach:

Badania krwi (rutynowe bezpieczeństwo i częstotliwość). CBC/płytki krwi: co 1 godz., przy HD następnego dnia ABG, w tym mleczan: co 1 godz. x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, kreatynina, Ca, zjonizowany Ca, Mg, Phos: początek, koniec, przy HD następny dzień Test czynności wątroby: początek, koniec, HD następnego dnia LDH: początek, koniec, HD następnego dnia Bezpośredni test Coombsa: początek, koniec, HD następnego dnia OB i hsCRP: początek, koniec, HD następnego dnia CPK: Początek, koniec PT/PTT: początek, koniec

Badacze będą również przeprowadzać badania krwi:

IL-6: Początek, koniec, HD następnego dnia Dopełnienie: Początek, koniec, HD następnego dnia Haptoglobina: Początek, koniec, HD następnego dnia Wolna Hg: Początek, koniec, HD następnego dnia Fibrynogen, D-dimer: Start , koniec, następnego dnia o HD

Ponadto badacze przeprowadzą testy materiałów po zakończeniu testu każdego uczestnika.

Badania materiałowe po testach in vivo:

Badania adhezji komórek i białek:

1. Skaningowa mikroskopia elektronowa. SNM zostanie umieszczony w roztworze zawierającym 2% aldehydu glutarowego (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3% sacharozy (Sigma Aldrich) i 0,1 M soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) w temperaturze 4°C i pH 7,4. Po 1 godzinie podłoża przemywa się dwukrotnie PBS przez 30 minut w temperaturze 4°C i przemywa wodą destylowaną przez 5 minut. Odwodnienie uzyskuje się poprzez umieszczenie substratów w 50% etanolu na 15 minut, jednocześnie zwiększając stężenie etanolu do 60%, 70%, 80%, 90% i ostatecznie 100%. Odwodnione próbki są następnie mocowane na aluminiowych trzpieniach, powlekane przez napylanie jonowe złotem-palladem i badane za pomocą skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunohistochemia. Adhezję i aktywację płytek ocenia się stosując barwienie immunofluorescencyjne dla markera płytek, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) i markera skrzepu krwi, tkankowego aktywatora plazminogenu (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Płytki krwi utrwala się w 4% paraformaldehydzie (Fisher Scientific, Waltham, MA) przez 15 minut, a następnie inkubuje w 1% albuminie surowicy bydlęcej przez 30 minut w celu zablokowania niespecyficznego wiązania. Płytki krwi są podwójnie znakowane w następujący sposób: substraty najpierw inkubowano z przeciwciałami pierwszorzędowymi (t-PA), rozcieńczonymi 1:50 w PBS przez 60 minut, a następnie z osłym przeciwciałem przeciwmysim Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) rozcieńczonym 1: 100 w PBS przez 60 minut. Na koniec próbki inkubuje się z mysim przeciwciałem monoklonalnym znakowanym izotiocyjanianem fluoresceiny przeciwko ludzkiemu CD41, rozcieńczonym 1:300 w PBS przez 60 minut. Obrazy będą pozyskiwane na powtórzenie przy użyciu zmotoryzowanego mikroskopu odwróconego Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY), aby uzyskać łącznie 12 obrazów na podłoże. Intensywność fluorescencji obrazów określa się ilościowo za pomocą ImageJ.