Účinky průtoku krve na křemíkové substráty

Pro bezpečnost pacientů budou vyšetřovatelé měřit následující laboratoře:

Krevní testy (rutinní bezpečnost a frekvence). CBC/trombocyty: q 1 h, při HD další den ABG, včetně laktátu: Q 1 h x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Kreatinin, Ca, ionizovaný Ca, Mg, Phos: Začátek, konec, při HD další den Test jaterních funkcí: Začátek, konec, na HD další den LDH: Začátek, konec, na HD další den Přímý Coombsův test: Začátek, konec, na HD další den ESR a hsCRP: Začátek, konec, na HD další den CPK: Začátek, konec PT/PTT: Začátek, konec

Vyšetřovatelé budou také provádět výzkumné krevní testy:

IL-6: Začátek, konec, následující den při HD Doplněk: Začátek, konec, další den při HD Haptoglobin: Začátek, konec, další den při HD Volná Hg: Začátek, konec, druhý den při HD Fibrinogen, D-dimer: Začátek , konec, v HD další den

Kromě toho vyšetřovatelé provedou testování materiálu po dokončení testu každého účastníka.

Materiálové studie po testování in vivo:

Studie buněčné a proteinové adheze:

1. Rastrovací elektronová mikroskopie. SNM bude umístěn do roztoku obsahujícího 2 % glutaraldehydu (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3 % sacharózy (Sigma Aldrich) a 0,1 M fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem (PBS) při 4 °C a pH 7,4. Po 1 hodině se substráty dvakrát promyjí PBS po dobu 30 minut při 4 °C a promývají se destilovanou vodou po dobu 5 minut. Dehydratace se dosáhne umístěním substrátů do 50% ethanolu na 15 minut za současného zvýšení koncentrace ethanolu na 60 %, 70 %, 80 %, 90 % a nakonec 100 %. Dehydratované vzorky se poté namontují na hliníkové nástavce, napráší se zlatem-palladiem a vyšetřují se pomocí rastrovací elektronové mikroskopie (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Imunohistochemie. Adheze a aktivace krevních destiček se hodnotí pomocí imunofluorescenčního barvení pro marker krevních destiček, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) a marker krevní sraženiny, tkáňový aktivátor plasminogenu (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Krevní destičky se fixují ve 4% paraformaldehydu (Fisher Scientific, Waltham, MA) po dobu 15 minut a poté následuje inkubace v 1% hovězím sérovém albuminu po dobu 30 minut, aby se zablokovala nespecifická vazba. Krevní destičky jsou dvojitě značeny následovně: substráty byly nejprve inkubovány s primárními protilátkami (t-PA), zředěny 1:50 v PBS po dobu 60 minut a poté oslí anti-myší protilátkou Alexa Fluor 546 (Invitrogen, Carlsbad, CA) zředěnou 1: 100 v PBS po dobu 60 minut. Nakonec se vzorky inkubují s myší monoklonální protilátkou značenou fluorescein isothiokyanátem proti lidskému CD41 zředěnou 1:300 v PBS po dobu 60 minut. Snímky budou získány na replikát pomocí motorizovaného inverzního mikroskopu Nikon Eclipse Ti-E (Nikon Instruments Inc., Melville, NY), aby bylo získáno celkem 12 snímků na substrát. Fluorescenční intenzita snímků je kvantifikována pomocí ImageJ.