Blodflödeseffekter på kiselsubstrat

För patientsäkerheten kommer utredarna att mäta följande laboratorier:

Blodprov (rutinsäkerhet och frekvens). CBC/trombocyter: q 1 timme, vid HD nästa dag ABGs, inklusive laktat: Q 1 tim x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Kreatinin, Ca, joniserad Ca, Mg, Phos: Start, slut, vid HD nästa dag Leverfunktionstest: Start, slut, vid HD nästa dag LDH: Start, slut, vid HD nästa dag Direct Coombs' test: Start, slut, vid HD nästa dag ESR och hsCRP: Start, slut, vid HD nästa dag CPK: Start, slut PT/PTT: Start, slut

Utredarna kommer också att göra forskningsblodtest:

IL-6: Start, slut, vid HD nästa dag Komplement: Start, slut, vid HD nästa dag Haptoglobin: Start, slut, vid HD nästa dag Fri Hg: Start, slut, vid HD nästa dag Fibrinogen, D-dimer: Start , slut, på HD nästa dag

Dessutom kommer utredarna att göra materialtester efter att varje deltagares test är klart.

Materialstudier efter in vivo-testning:

Cell- och proteinvidhäftningsstudier:

1. Svepelektronmikroskopi. SNM kommer att placeras i en lösning innehållande 2 % glutaraldehyd (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3 % sackaros (Sigma Aldrich) och 0,1 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4°C och pH 7,4. Efter 1 timme sköljs substraten två gånger med PBS under 30 minuter vid 4°C och tvättas med destillerat vatten i 5 minuter. Dehydrering uppnås genom att placera substraten i 50 % etanol i 15 minuter samtidigt som koncentrationen av etanol ökar till 60 %, 70 %, 80 %, 90 % och slutligen 100 %. Dehydratiserade prover monteras sedan på aluminiumstubbar, sputterbelagda med guld-palladium och undersöks med användning av svepelektronmikroskopi (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunhistokemi. Trombocytvidhäftning och aktivering utvärderas med användning av immunfluorescensfärgning för trombocytmarkören, CD41 (Abcam, Cambridge, MA) och blodproppsmarkör, vävnadsplasminogenaktivator (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Blodplättar fixeras i 4 % paraformaldehyd (Fisher Scientific, Waltham, MA) under 15 minuter följt av inkubation i 1 % bovint serumalbumin under 30 minuter för att blockera ospecifik bindning. Trombocyter är dubbelmärkta enligt följande: substrat inkuberades först med primära antikroppar (t-PA), späddes 1:50 i PBS under 60 minuter följt av Alexa Fluor 546 åsna-anti-mus-antikropp (Invitrogen, Carlsbad, CA) utspädd 1: 100 i PBS under 60 minuter. Slutligen inkuberas proverna med anti-human CD41 fluorescein isotiocyanat märkt monoklonal musantikropp utspädd 1:300 i PBS under 60 minuter. Bilder kommer att förvärvas per replikat med hjälp av ett Nikon Eclipse Ti-E motoriserat inverterat mikroskop (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) för att erhålla totalt 12 bilder per substrat. Den fluorescerande intensiteten av bilderna kvantifieras med ImageJ.