Blodstrømseffekter på silisiumsubstrater

For pasientsikkerhet vil etterforskerne måle følgende laboratorier:

Blodprøver (rutinesikkerhet og hyppighet). CBC/blodplater: q 1 time, ved HD neste dag ABGs, inkludert laktat: Q 1 time x 6 Na, K, Cl, Bicarb, BUN, Kreatinin, Ca, ionisert Ca, Mg, Phos: Start, slutt, ved HD neste dag Leverfunksjonstest: Start, slutt, ved HD neste dag LDH: Start, slutt, ved HD neste dag Direct Coombs' test: Start, slutt, ved HD neste dag ESR og hsCRP: Start, slutt, ved HD neste dag CPK: Start, slutt PT/PTT: Start, slutt

Etterforskerne vil også forske på blodprøver:

IL-6: Start, slutt, ved HD neste dag Komplement: Start, slutt, ved HD neste dag Haptoglobin: Start, slutt, ved HD neste dag Fri Hg: Start, slutt, ved HD neste dag Fibrinogen, D-dimer: Start , slutt, på HD neste dag

I tillegg vil etterforskerne gjøre materialtesting etter at hver deltakers test er fullført.

Materialstudier etter in vivo testing:

Celle- og proteinadhesjonsstudier:

1. Skanneelektronmikroskopi. SNM vil bli plassert i en løsning som inneholder 2 % glutaraldehyd (Electron Microscopy Sciences, Fort Washington, PA), 3 % sukrose (Sigma Aldrich) og 0,1 M fosfatbufret saltvann (PBS) ved 4°C og pH 7,4. Etter 1 time skylles substratene to ganger med PBS i 30 minutter ved 4°C og vaskes med destillert vann i 5 minutter. Dehydrering oppnås ved å plassere substratene i 50 % etanol i 15 minutter mens konsentrasjonen av etanol økes til 60 %, 70 %, 80 %, 90 % og til slutt 100 %. Dehydrerte prøver blir deretter montert på aluminiumsstubber, sputterbelagt med gull-palladium og undersøkt ved bruk av skanningselektronmikroskopi (SEM; Ultra55 FEGSEM, ZEISS, Peabody, MA).
2. Immunhistokjemi. Blodplateadhesjon og aktivering vurderes ved bruk av immunfluorescensfarging for blodplatemarkøren, CD41 (Abcam, Cambridge, MA), og blodproppmarkør, vevsplasminogenaktivator (t-PA, Abcam, Cambridge, MA). Blodplater fikseres i 4 % paraformaldehyd (Fisher Scientific, Waltham, MA) i 15 minutter etterfulgt av inkubering i 1 % bovint serumalbumin i 30 minutter for å blokkere uspesifikk binding. Blodplater er dobbeltmerket som følger: substrater ble først inkubert med primære antistoffer (t-PA), fortynnet 1:50 i PBS i 60 minutter etterfulgt av Alexa Fluor 546 esel anti-mus antistoff (Invitrogen, Carlsbad, CA) fortynnet 1: 100 i PBS i 60 minutter. Til slutt inkuberes prøvene med anti-human CD41 fluorescein isotiocyanat merket muse monoklonalt antistoff fortynnet 1:300 i PBS i 60 minutter. Bilder vil bli innhentet per replikat ved hjelp av et Nikon Eclipse Ti-E motorisert invertert mikroskop (Nikon Instruments Inc., Melville, NY) for å oppnå totalt 12 bilder per substrat. Den fluorescerende intensiteten til bildene kvantifiseres ved hjelp av ImageJ.