Cirkulující miRNA.

Primární cíle:

1. Identifikovat panel miRNA detekovatelných v oběhu, které jsou změněny u pacientů s rakovinou prsu
2. Identifikovat specifické kombinace miRNA („signatury“), které se spojují s vnitřními podtypy rakoviny prsu, a tím by mohly pomoci při prognóze a plánování léčby u jednotlivých pacientů.

Sekundární cíl:

1. Zjistit, zda lze systémovou analýzu miRNA použít jako biomarker pro monitorování odpovědi na chemoterapii, v neoadjuvantním prostředí a u pacientek, u kterých se objevila recidiva karcinomu prsu a jsou léčeni předem chemoterapií a/nebo hormonální terapií.

   Jedná se o prospektivní kohortovou studii, která zahrnuje tři studijní kohorty:

   Kohorta 1: Všechny nově diagnostikované pacientky s karcinomem prsu, které mají podstoupit neoadjuvantní chemoterapii.

   Kohorta 2: Všechny pacientky s karcinomem prsu s metastatickým onemocněním, recidivou nebo progresí onemocnění, které zahajují úvodní chemoterapii +/- hormonální terapii.

   Kohorta 3: Všechny pacientky s rakovinou prsu s metastatickým onemocněním, které zahajují pouze hormonální léčbu.

   Krevní vzorek

   Odběr vzorků krve – kohorta 1:

   - Vzorek krve 1: při prezentaci před zahájením neoadjuvantní léčby.

   - Vzorek krve 2: uprostřed chemoterapie (po 2. cyklu, pokud jsou zařazeni do režimu 4 cyklů, nebo po 4. cyklu, pokud jim je předepsán režim 8 týdnů).

   - Vzorek krve 3: po chemoterapii (před operací podle potřeby).

   - Odběr krve 4: 2 až 4 týdny po operaci nebo 2 až 4 týdny po 3. odběru krve, pokud pacienti nepodstoupí operaci.

   - Vzorek krve 5: jednou během sledování 12 až 18 měsíců po operaci nebo 12 až 18 měsíců po 3. odběru krve, pokud pacienti nepodstoupí operaci.

   Odběr vzorků krve – kohorta 2:

   - Vzorek krve před léčbou: při prezentaci před zahájením léčby.

   - Na vzorcích krve ve studii: odebírá se v měsíčních (± 1 týdenních) intervalech po dobu 6 měsíců od data odběru krve před léčbou, bez ohledu na to, zda je pacient na léčbě nebo ukončené léčbě.

   Na vzorku krve ve studii 1: 1 měsíc (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   Na vzorku krve ve studii 2: 2 měsíce (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   Na vzorku krve ve studii 3: 3 měsíce (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   Na vzorku krve ve studii 4: 4 měsíce (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   Na vzorku krve ve studii 5: 5 měsíců (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   Na vzorku krve ve studii 6: 6 měsíců (± 1 týden) od data odběru krve před léčbou

   - Vzorek krve na konci studie: jednou během sledování 12 až 18 měsíců od data odběru krve před léčbou nebo v době progrese onemocnění.

   Odběr vzorků krve – kohorta 3:

   - Vzorek krve před léčbou: při prezentaci před zahájením léčby.

   - Na vzorcích krve ve studii: odebrané v následujících časových bodech bez ohledu na to, zda je pacient léčen nebo ukončen.

   Na vzorku krve ve studii 1: 3 měsíce (± 2 týdny) od data odběru krve před léčbou U vzorku krve ve studii 2: 6 měsíců (± 2 týdny) od data vzorku krve před léčbou U vzorku krve ve studii 3: 12 měsíců (± 2 týdny) od data odběru krve před léčbou

   - Vzorek krve na konci studie: 18 měsíců (± 2 týdny) od data odběru krve před léčbou nebo v době progrese onemocnění.

   Vzorky krve budou zpracovány pro analýzu miRNA, která zahrnuje:

1. Lýza pomocí Trizolu 2. Izolace RNA 3. Hodnocení koncentrace a integrity RNA pomocí spektrofotometrie Nanodrop 4. Syntéza cDNA (pomocí miRNA specifických primerů kmenové smyčky) 5. PCR amplifikace a relativní kvantifikace (pomocí miRNA specifických sond)