Mikrofluidika a transkriptomika u pacientů po transplantaci pevných orgánů

Dva konkrétní cíle výzkumné studie jsou následující: 1) Důkaz konceptu se dvěma částmi. Za prvé, studijní plán má prokázat, že T buňky, které se velmi běžně účastní imunitní odpovědi: populace CD2, CD3, CD4 a CD8, lze zachytit. Tyto buňky budou zachyceny, lyžovány a bude zmapována jejich mRNA genomika. Druhá část důkazu konceptu bude zahrnovat vystavení populací CD2, CD3, CD4 a CD8 ex vivo různým sérovým koncentracím takrolimu – hlavní základní imunosupresivní medikace při transplantaci solidních orgánů. Expozice tří typů buněk různým koncentracím takrolimu prokáže, že existuje testování, které dokáže detekovat transkripty mRNA odpovídající stavům se sníženou, optimální a přehnanou imunosupresí. Poté bude měřena kvantifikovaná produkce IL2 tří typů buněk za různých imunosupresivních podmínek. Pomocí těchto dvou částí prvního specifického cíle studie bude prokázána technika, která může snadno a snadno izolovat požadované buněčné populace od pacientů po transplantaci a dokáže zachytit, jak tyto buněčné populace reagují na imunosupresi v různých koncentracích. 2) Druhým specifickým cílem výzkumné studie je provedení tohoto genomového profilování na příjemcích transplantovaných ledvin. Pro tuto část studie budou dvě kohorty. Kohorta označená jako „perspektivní“ skupina a kohorta označená jako skupina „událost“. U prospektivní kohorty bude krev pacientům odebrána v konkrétních časových bodech. Konkrétně vzorky krve budou odebrány v předtransplantačním prostředí, když se pacienti dostaví do nemocnice k transplantaci, poté v den po transplantaci ledviny 0, 1, 2, 3 a 7 (+/- 1 den) a v den 14, 21 a 28 (+/-3 dny). Vzorky krve budou znovu odebrány ve 2., 3., 6., 9. a 12. měsíci (+/- 1 týden). U druhé skupiny budou odebrány vzorky krve v době „událostí“, jako je odmítnutí, infekce atd., a na jejich krev se aplikuje stejná série testů. U této skupiny budou odběry krve provedeny v čase 0 (+/-1 den), poté za jeden týden (+/-2 dny) a jeden, dva a tři měsíce (+/-1 týden) po čase 0. Každému pacientovi bude odebráno pět vzorků krve. U všech pacientů bude provedeno srovnání standardně shromážděných klinických informací o pacientovi – funkce štěpu, rejekce, infekce, úrovně imunosuprese – s výsledky naší transkriptomiky. Vyvrcholením projektu bude odhalení, jak může genomika specifických typů T buněk přesněji odrážet skutečný imunosupresivní stav pacienta tím, že odpovídá vysoce, optimálním a nízko imunosupresivním klinickým fenotypům, a tak umožnit transplantačním lékařům inteligentněji a přesněji podávat imunosupresiva. léky.

Tato studie bude zahrnovat odběr vzorků krve pacientům po transplantaci ledviny v době, kdy by jim jinak byla odebrána krev pro standardní klinickou péči. Bude získán souhlas s testováním jejich krve, ale pacienti nebudou trpět žádnou další bolestí nebo nepříjemnostmi při testování. V koordinaci s vybavením a materiálem, který v současné době používá výzkum oddělení traumatologie a intenzivní péče, vyšetřovatelé zorganizují sběr a provoz laboratoří časově efektivním a minimálně nákladným způsobem.