Microfluídica e transcriptômica em pacientes pós-transplante de órgãos sólidos

Os dois objetivos específicos do estudo de pesquisa são os seguintes: 1) Prova de conceito com duas partes. Em primeiro lugar, o plano de estudo é provar que as células T que estão muito comumente envolvidas na resposta imune: populações CD2, CD3, CD4 e CD8 podem ser capturadas. Essas células serão capturadas, lisadas e sua genômica de mRNA será mapeada. A segunda parte da prova de conceito envolverá a exposição das populações CD2, CD3, CD4 e CD8 ex vivo a várias concentrações séricas de tacrolimus - o principal medicamento imunossupressor fundamental no transplante de órgãos sólidos. A exposição dos três tipos de células às várias concentrações de tacrolimus demonstrará que existem testes que podem detectar transcritos de mRNA correspondentes a estados de imunossupressão insuficiente, ideal e excessiva. A produção quantificada de IL2 dos três tipos de células sob as várias condições imunossupressoras será então medida. Com essas 2 partes do primeiro objetivo específico do estudo, será demonstrada uma técnica que pode isolar rápida e facilmente as populações celulares de interesse dos pacientes transplantados e pode capturar como essas populações celulares respondem à imunossupressão em várias concentrações. 2) O segundo objetivo específico do estudo de pesquisa é executar esse perfil genômico em receptores de transplante renal. Para esta parte do estudo, haverá duas coortes. Uma coorte identificada como o grupo "prospectivo" e uma coorte rotulada como o grupo "evento". Para a coorte prospectiva, o sangue será obtido dos pacientes em momentos específicos. Especificamente, amostras de sangue serão obtidas no ambiente pré-transplante quando os pacientes se apresentarem ao hospital para o transplante, depois no dia 0, 1, 2, 3 e 7 pós-transplante renal (+/- 1 dia) e no dia 14, 21 e 28 (+/- 3 dias). Amostras de sangue serão obtidas novamente nos meses 2, 3, 6, 9 e 12 (+/- 1 semana). Para o segundo grupo, as amostras de sangue serão obtidas no momento dos "eventos", como rejeição, infecção, etc., e aplicarão a mesma série de testes ao sangue. Para este grupo, as coletas de sangue serão feitas no tempo 0 (+/-1 dia), depois em uma semana (+/-2 dias) e em um, dois e três meses (+/-1 semana) pós-tempo 0. Serão coletadas cinco amostras de sangue por paciente. Para todos os pacientes, haverá uma comparação das informações clínicas padrão coletadas sobre o paciente - função do enxerto, rejeição, infecção, níveis de imunossupressão - com os resultados de nossa transcriptômica. A culminação do projeto envolverá a revelação de como a genômica dos tipos específicos de células T pode refletir com mais precisão o verdadeiro estado imunossuprimido de um paciente, correspondendo aos fenótipos clínicos imunossupressores alto, ótimo e baixo e, assim, permitir que os médicos de transplante administrem de maneira mais inteligente e precisa os imunossupressores medicamentos.

Este estudo envolverá a obtenção de amostras de sangue nos pacientes transplantados renais no momento em que, de outra forma, eles teriam sangue coletado para atendimento clínico padrão. O consentimento será obtido para o teste em seu sangue, mas os pacientes não sofrerão nenhuma dor adicional ou inconveniência do teste. Em coordenação com os equipamentos e suprimentos atualmente usados ​​pela pesquisa do departamento de trauma e cuidados intensivos, os investigadores organizarão a coleta e o funcionamento dos laboratórios de maneira eficiente e minimamente dispendiosa.