Seminář TEX101 jako prediktor obnovy spermatogeneze u azoospermických mužů s hmatatelnou varikokélou

Pacienti mužského pohlaví (40) případy navštěvující andrologickou ambulanci fakultních nemocnic KASR EL-AINI, všichni pacienti s azoospermií, věk:18-43 let, stěžující si převážně na neplodnost nebo náhodně objevenou azoospermii při předmanželské kontrole nebo chronické bolesti varlat způsobené dlouhotrvající varikokélou. Neplodná neobstrukční azoospermie (NOA) (n=40) podrobená varikokelektomii a pacienti hodnoceni 3 měsíce po varikokelektomii analýzou spermatu, poté podle výsledků rozdělena populace do 2 skupin: Skupina A (respondenti): Pacienti s pozitivní analýzou spermatu na

spermií 3 měsíce po varikokelektomii.

Skupina B (neodpovídající): Pacienti bez spermií v analýze spermatu

za 3 a/nebo 6 měsíců po varikokelektomii.

Metoda odhadu lidského TEX101 v spermatu:

Odebrané vzorky spermatu o objemu 1 ml byly centrifugovány po dobu 20 minut při 1000 xg při 4 °C, poté byl odebrán supernatant každého vzorku pro odhad TEX101. Lidský TEX101 (Testis exprimovaný 101) byl testován komerčně dostupnou soupravou ELISA dodávanou Wuhan Fine Biotech Co., Ltd. Čína.

Princip postupu:

Tato souprava byla založena na technice sendvičového enzymového imuno-sorbentního testu. Protilátka anti-TEX101 byla předem potažena na 96jamkovou destičku. Protilátka konjugovaná s biotinem byla použita jako detekční protilátky. Následně byly do jamek přidány standardy, testovací vzorky a detekční protilátka konjugovaná s biotinem a promyty promývacím pufrem.

Byl přidán HRP-Streptavidin a nenavázané konjugáty byly promyty promývacím pufrem. Substráty TMB byly použity k vizualizaci enzymatické reakce HRP. TMB byl katalyzován HRP za vzniku modrého produktu, který se po přidání kyselého zastavovacího roztoku změnil na žlutý. Intenzita žluté je úměrná cílovému množství vzorku zachyceného v destičce.