Seminal TEX101 som en prediktor för återhämtning av spermatogenes hos azoosperma män med påtaglig varcocele

Manliga patienter (40) fall som besökte polikliniken för Andrologi vid KASR EL-AINI universitetssjukhus, alla patienter med azoospermi, ålder: 18-43 år, klagade huvudsakligen över infertilitet eller av misstag upptäckt azoospermi under föräktenskaplig kontroll eller kronisk testikelsmärta orsakad av långvarig varicocele. Infertil icke-obstruktiv azoospermi (NOA) (n=40) utsatts för varicocelectomy och patienter utvärderade 3 månader efter varicocelectomy genom spermaanalys, därefter enligt resultat populationen indelad i 2 grupper: Grupp A (Responders): Patienter med positiv spermaanalys för

spermier 3 månader efter varicocelektomi.

Grupp B (Icke-svarare): Patienter utan spermier i spermaanalys

inom 3 och/eller 6 månader efter varicocelektomi.

Metod för uppskattning av human TEX101 i sperma:

Ett 1 ml uppsamlat spermaprov centrifugerades i 20 minuter vid 1000xg vid 4°C, sedan samlades supernatanten av varje prov för uppskattning av TEX101. Human TEX101 (Testis uttryckt 101) analyserades med kommersiellt tillgängligt ELISA-kit från Wuhan Fine Biotech Co., Ltd. Kina.

Principen för förfarandet:

Detta kit var baserat på en sandwich-enzymkopplad immun-sorbent-analysteknik. Anti-TEX101-antikropp var förbelagd på 96-brunnars platta. Den biotinkonjugerade antikroppen användes som detektionsantikroppar. Standarderna, testproverna och den biotinkonjugerade detektionsantikroppen tillsattes därefter till brunnarna och tvättades med tvättbuffert.

HRP-Streptavidin tillsattes och obundna konjugat tvättades bort med tvättbuffert. TMB-substrat användes för att visualisera HRP-enzymatisk reaktion. TMB katalyserades av HRP för att producera en blå färgprodukt som ändrades till gul efter tillsats av sur stopplösning. Intensiteten av gult är proportionell mot målmängden prov som fångats på plattan.