Wachstumsfaktor/Insulinähnlicher Wachstumsfaktor (GH/IGF)-1-Achse bei übergewichtigen Probanden in Behandlung mit Orlistat

Fächer:

Zwanzig fettleibige postmenopausale Frauen (Alter: 53,6 ± 6,2; BMI: 34,1±4,0. Die Probanden wurden in der Abteilung für Endokrinologie der Abteilung für Molekulare und Klinische Endokrinologie und Onkologie rekrutiert, bewertet und überwacht. Vor Beginn der Studie wurden alle Probanden einem ersten Screening unterzogen, das eine Anamnese, eine körperliche Untersuchung, Laborparameter und das Körpergewicht umfasste.

Behandlungsprotokoll:

Bei Studieneintritt wurden Plasmaproben für Nüchtern-Plasmaglukose, Insulin, Lipämie (Gesamt-, HDL- und LDL-Cholesterin, Triglyceride), GH, IGF-1 und IGFBP-3 entnommen. Die Probanden wurden in zwei Behandlungsgruppen randomisiert: 10 Probanden erhielten eine normokalorische Diät plus + Orlistat (Xenical, Roche, UK) in einer Dosis von 120 mg dreimal täglich; 10 Probanden erhielten eine normokalorische Diät ohne die zusätzliche Behandlung. Die Dauer der Nachbeobachtung betrug 10 Tage für jede Behandlungsperiode, ohne Auswaschen zwischen den beiden Perioden. Jeder Patient wurde jeder Gruppe zugeordnet. Am Ende jeder Periode wurden die folgenden dynamischen Tests durchgeführt: Glukose und Insulin nach einem OGTT; GH nach GHRH + Arginin (GHRH+ARG); postprandiale Lipämie nach einer fettreichen Standardmahlzeit. Während des Studienzeitraums behielten die Probanden ihr übliches Bewegungsmuster bei. Die Probanden und Forscher waren sich der Laborergebnisse bis zum Ende der Studie nicht bewusst.

Methoden

Zu Studienbeginn und am Ende jeder Behandlungsperiode wurden außerdem die folgenden Parameter gemessen:

1. Anthropometrische Messungen, durchgeführt mit den Probanden, die nur Unterwäsche ohne Schuhe trugen. Die Stehhöhe wurde mit einem wandmontierten Stadiometer auf den nächsten cm genau gemessen. Das Körpergewicht wurde mit einer geeichten Schwebebalkenwaage auf 50 g genau bestimmt. Der Body-Mass-Index (BMI) wurde als Gewicht (kg) dividiert durch die Körpergröße zum Quadrat (m2) berechnet und als Index für Fettleibigkeit verwendet. Messungen des Taillenumfangs, ein Maß für die Verteilung des Fettgewebes und das Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen wurden in der Mitte zwischen Nabel und Xiphoid durchgeführt.
2. Die Körperzusammensetzung wurde durch herkömmliche bioelektrische Impedanzanalyse (BIA) und durch Impedanzvektoranalyse (BIVA) bestimmt. Widerstand (R) und Reaktanz (Xc) wurden von einem einzelnen Untersucher mit einem bioelektrischen Impedanzanalysator mit einer Frequenz von 50 kHz (BIA 101 RJL, Akern Bioresearch, Firenze, Italien) gemäß der standardmäßigen tetrapolaren Technik gemessen. Alle Bewertungen wurden von demselben Bediener blind in Bezug auf die Behandlung der Subjekte durchgeführt.
3. Blutproben wurden zwischen 08:00 Uhr und 09:00 Uhr aus der antecubitalen Vene nach Fasten über Nacht entnommen, wobei sich der Patient in der Ruheposition befand. Blutproben für die Hormonbestimmung wurden unverzüglich zentrifugiert und das Serum abgetrennt und bis zum Assay bei –20°C gelagert. Die Blutglukosespiegel wurden unmittelbar nach dem OGTT durch das Glukoseoxidaseverfahren bestimmt. Der OGTT wurde unter Verwendung von 75 g Dextrose durchgeführt. Blutproben wurden nach 0, 30, 60, 90, 20, 150 und 180 Minuten für Plasmaglukose- und Insulinmessungen entnommen. Die normale glykämische Reaktion auf den OGTT wurde gemäß den Kriterien des Expertenausschusses für die Diagnose und Klassifikation von Diabetes mellitus definiert. Gesamt- und HDL-Cholesterin sowie Triglyceridkonzentrationen wurden im Plasma durch enzymatische kolorimetrische Verfahren (Roche Molecular Biochemicals) auf einem Autoanalysator Cobas Mira (ABX Diagnostics) untersucht. LDL-Cholesterin wurde nach der Friedewald-Formel berechnet. Änderungen im Lipidprofil wurden auch durch Berechnung des Gesamt/HDL-Cholesterinverhältnisses analysiert. Plasma-NEFA-Konzentrationen wurden durch das enzymatische kolorimetrische Verfahren (Wako Chemicals) analysiert. Seruminsulin und c-Peptid wurden durch einen Festphasen-Chemilumineszenz-Enzymimmunoassay unter Verwendung von im Handel erhältlichen Kits (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA, USA) gemessen. Die Sensitivität des Assays betrug 0,1 und 0,3 ng/ml. Die Intra- und Interassay-Variationskoeffizienten (VK) betrugen 2,2 bzw. 5,8 % für Insulin und 6,3 bzw. 8,8 % für c-Peptid.

Die GHRH (1-29, Geref, Serono, Rom, Italien) + ARG (Argininhydrochlorid, Salf, Bergamo, Italien) wurde durchgeführt. Die GH-Reaktion nach ARG+GHRH wurde als mangelhaft (GHD) eingestuft, wenn der GH-Peak < 4,2 µg/l war, und als ausreichend (GHS), wenn der GH-Peak > 4,2 µg/l war. Serum-GH-Spiegel wurden durch immunoradiometrischen Assay (IRMA) unter Verwendung von im Handel erhältlichen Kits (HGH-CTK-IRMA, Sorin, Saluggia, Italien) gemessen. Die Sensitivität des Assays betrug 0,02 µg/L. Die Intra- und Interassay-Variationskoeffizienten (VK) betrugen 4,5 bzw. 7,9 %. Zirkulierende IGF-I-Spiegel, gemessen durch IRMA nach Ethanolextraktion unter Verwendung von Diagnostic System Laboratories Inc. (Webster, Texas, USA). Die normalen Bereiche bei 31-40, 41-50 und 51-60 Jahre alten Frauen waren 100-390, 96-288 bzw. 90-250 µg/l. Die Sensitivität des Assays betrug 0,8 µg/l. Die Intra-Assay-VK betrugen 3,4, 3,0 bzw. 1,5 % für niedrige, mittlere bzw. hohe Punkte der Standardkurve. Die Inter-Assay-VK betrugen 8,2, 1,5 und 3,7 % für niedrige, mittlere und hohe Punkte der Standardkurve. Für die Zwecke dieser Studie wurden IGF-I-Spiegel als normal eingestuft, wenn sie höher als -2 SD waren, und als mangelhaft, wenn sie niedriger als -2 SD waren. Der IGFBP-3-Assay hatte eine Sensitivität von 0,04 ng/l; der normale Bereich für eine erwachsene weibliche Population im gleichen Altersbereich unserer Studienpopulation lag bei 2,7–5,6 mg/L. Die für die Berechnung verwendeten Werte für die Molekülmasse von IGF-I und IGFBP-3 betrugen 7,649 kDa bzw. 28,5 kDa.25 Die postprandiale Lipämie wurde morgens, nach ≥ 12 h Fasten und über die 8 h nach der Standardmahlzeit (um 2, 4, 6 und 8 h) bewertet. Die Standardmahlzeit bestand aus einer Kartoffeltorte (ein Kuchen aus Kartoffelpüree, Vollmilch, Ei, Käse, Schinken und Butter), die in 15-20 Minuten verzehrt wurde. Die Mahlzeit, die 4090 kJ lieferte, bestand aus 34 % Kohlenhydraten, 51 % Fett (34 % gesättigte Fettsäuren) und 15 % Protein.