Fattore di crescita/fattore di crescita insulino-simile (GH/IGF)-1 asse in soggetti obesi in trattamento con orlistat

Soggetti:

Venti donne obese in postmenopausa (età: 53,6±6,2; BMI: 34,1 ± 4,0. I soggetti sono stati reclutati, valutati e monitorati presso l'Unità di Endocrinologia del Dipartimento di Endocrinologia e Oncologia Molecolare e Clinica. Prima di iniziare lo studio, tutti i soggetti sono stati sottoposti a una valutazione di screening iniziale che comprendeva anamnesi, esame fisico, parametri di laboratorio e peso corporeo.

Protocollo di trattamento:

All'ingresso nello studio sono stati ottenuti campioni di plasma per glucosio plasmatico a digiuno, insulina, lipemia (colesterolo totale, HDL e LDL, trigliceridi), GH, IGF-1 e IGFBP-3. I soggetti sono stati randomizzati in due gruppi di trattamento: 10 soggetti hanno ricevuto dieta normo-calorica plus + orlistat (Xenical, Roche, UK) alla dose di 120 mg tid; 10 soggetti hanno ricevuto una dieta normocalorica senza il trattamento aggiuntivo. La durata del follow-up è stata di 10 giorni per ciascun periodo di trattamento, senza alcun wash-out tra i due periodi. Ogni paziente è stato assegnato a ciascun gruppo. I test dinamici eseguiti alla fine di ogni periodo sono stati i seguenti: glucosio e insulina dopo un OGTT; GH dopo GHRH + arginina (GHRH+ARG); lipemia post-prandiale dopo un pasto standard ricco di grassi. Durante il periodo di studio, i soggetti hanno mantenuto il loro normale schema di attività fisica. I soggetti e i ricercatori sono rimasti all'oscuro dei risultati di laboratorio fino alla fine dello studio.

Metodi

Al basale e alla fine di ogni periodo di trattamento, sono stati misurati anche i seguenti parametri:

1. Misurazioni antropometriche, eseguite con i soggetti che indossano solo biancheria intima senza scarpe. L'altezza in piedi è stata misurata al cm più vicino utilizzando uno stadiometro montato a parete. Il peso corporeo è stato determinato con l'approssimazione di 50 g utilizzando una bilancia a bilanciere calibrata. L'indice di massa corporea (BMI) è stato calcolato come peso (kg) diviso per altezza al quadrato (m2) e utilizzato come indice per l'obesità. Le misurazioni della circonferenza della vita, una misura della distribuzione del tessuto adiposo e del rischio di malattie cardiovascolari sono state effettuate a metà tra l'ombelico e lo xifoide.
2. La composizione corporea è stata determinata mediante l'analisi convenzionale dell'impedenza bioelettrica (BIA) e mediante l'analisi del vettore di impedenza (BIVA). La resistenza (R) e la reattanza (Xc) sono state misurate da un singolo ricercatore con un analizzatore di impedenza bioelettrica a frequenza singola di 50 kHz (BIA 101 RJL, Akern Bioresearch, Firenze, Italia) secondo la tecnica tetrapolare standard. Tutte le valutazioni sono state eseguite dallo stesso operatore cieco rispetto al trattamento dei soggetti.
3. I campioni di sangue sono stati prelevati tra le 08:00 e le 09:00 dalla vena antecubitale dopo un digiuno notturno, con il paziente in posizione di riposo. I campioni di sangue per la determinazione ormonale sono stati prontamente centrifugati e il siero separato e conservato a -20°C fino al dosaggio. I livelli di glucosio nel sangue sono stati determinati con il metodo della glucosio ossidasi immediatamente dopo l'OGTT. L'OGTT è stato eseguito utilizzando 75 g di destrosio. I campioni di sangue sono stati prelevati a 0, 30, 60, 90, 20, 150 e 180 minuti per le misurazioni della glicemia e dell'insulina. La normale risposta glicemica all'OGTT è stata definita secondo i criteri del Comitato di esperti per la diagnosi e la classificazione del diabete mellito. Le concentrazioni di colesterolo totale e HDL e di trigliceridi sono state dosate nel plasma mediante metodi colorimetrici enzimatici (Roche Molecular Biochemicals) su un autoanalizzatore Cobas Mira (ABX Diagnostics). Il colesterolo LDL è stato calcolato utilizzando la formula di Friedewald. Le variazioni del profilo lipidico sono state analizzate anche calcolando il rapporto colesterolo totale/HDL. Le concentrazioni plasmatiche di NEFA sono state analizzate con il metodo colorimetrico enzimatico (Wako Chemicals). L'insulina sierica e il c-peptide sono stati misurati mediante un test immunologico enzimatico chemiluminescente in fase solida utilizzando kit disponibili in commercio (Immunolite Diagnostic Products Co, Los Angeles, CA, USA). La sensibilità del test era di 0,1 e 0,3 ng/mL. I coefficienti di variazione intra e interanalisi (CV) erano 2,2 e 5,8%, rispettivamente per l'insulina e 6,3 e 8,8%, rispettivamente per il c-peptide.

È stato eseguito il GHRH (1-29, Geref, Serono, Roma, Italia) + ARG (arginina cloridrato, Salf, Bergamo, Italia). La risposta del GH dopo ARG+GHRH è stata classificata come carente (GHD) quando il picco del GH era <4,2 µg/L e sufficiente (GHS) quando il picco del GH era >4,2 µg/L. I livelli sierici di GH sono stati misurati mediante test immunoradiometrico (IRMA) utilizzando kit disponibili in commercio (HGH-CTK-IRMA, Sorin, Saluggia, Italia). La sensibilità del test è stata di 0,02 µg/L. I coefficienti di variazione intra e interanalisi (CV) erano rispettivamente del 4,5 e del 7,9%. Livelli circolanti di IGF-I misurati da IRMA dopo l'estrazione di etanolo utilizzando Diagnostic System Laboratories Inc. (Webster, Texas, USA). Gli intervalli normali nelle donne di 31-40, 41-50 e 51-60 anni erano rispettivamente di 100-390, 96-288, 90-250 µg/l. La sensibilità del test è stata di 0,8 µg/l. I CV intra-dosaggio erano 3,4, 3,0 e 1,5% rispettivamente per i punti basso, medio e alto della curva standard. I CV inter-test erano 8,2, 1,5 e 3,7% per i punti basso, medio e alto della curva standard. Ai fini di questo studio, i livelli di IGF-I sono stati classificati come normali quando superiori a -2 DS e carenti quando erano inferiori a -2 DS. Il test IGFBP-3 aveva una sensibilità di 0•04 ng/l; il range normale per una popolazione femminile adulta della stessa fascia di età della nostra popolazione di studio era 2,7-5,6 mg/L. I valori per la massa molecolare di IGF-I e IGFBP-3 utilizzati per il calcolo erano rispettivamente di 7,649 kDa e 28,5 kDa.25 La lipemia post-prandiale è stata valutata al mattino, dopo ≥ 12 h di digiuno, e nelle 8 h successive al pasto standard (a 2, 4, 6 e 8) h. Il pasto standard consisteva in un gateau di patate (una torta fatta di purè di patate, latte intero, uova, formaggio, prosciutto e burro) che veniva consumato in 15-20 min. Il pasto, che ha fornito 4090 kJ, era composto da 34% di carboidrati, 51% di grassi (34% di grassi saturi) e 15% di proteine.