Cambios en el ADN que afectan el metabolismo de la vitamina D en pacientes con cáncer colorrectal que reciben suplementos de vitamina D

OBJETIVOS:

• Identificar polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) de CYP24 utilizando ADN genómico de células mononucleares de sangre periférica de pacientes con cáncer colorrectal que reciben suplementos de colecalciferol.
• Evaluar los efectos de estos SNP de CYP24 en los metabolitos de la vitamina D_3 sérica inicial (25-D_3, 24,25-D_3 y 1,25-D_3) y los niveles de hormona paratiroidea (PTH).
• Evaluar los efectos de estos SNP de CYP24 sobre los metabolitos séricos de vitamina D_3 y los niveles de PTH durante el tratamiento con colecalciferol.
• Examinar el empalme de CYP24, la expresión de proteínas y la actividad enzimática al inicio y durante el tratamiento con colecalciferol.
• Determinar la relación, si existe, entre los parámetros farmacocinéticos del colecalciferol sérico y los SNP de CYP24, las variantes de corte y empalme y la actividad enzimática.

ESQUEMA: Los pacientes reciben colecalciferol oral 2000 UI una vez al día durante 1 año. A los pacientes que no respondan a la suplementación con vitamina D (nivel sérico de 25-D_3 < 32 ng/ml) a los 6 meses se les aumentará la dosis de colecalciferol a 4000 UI una vez al día.

Se recolecta sangre al inicio del estudio y los días 14, 30, 60, 90, 180, 270 y 360. Las células mononucleares de sangre periférica para el genotipado de CYP24, la expresión de proteínas, la actividad enzimática y las variantes de empalme se analizan mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), western blot, cromatografía líquida de alta resolución y PCR con transcriptasa inversa, respectivamente. El suero se analiza para los niveles de metabolitos de vitamina D_3 (mediante radioinmunoensayo), calcio (para controlar la hipercalcemia) y ensayos de hormona paratiroidea (para medir el efecto de la vitamina D).