IVM potilaille, joilla on alhainen munasarjavaste. Parantaako se IVF-tuloksia ja parantaako se seuraavaa IVF-sykliä?

IVM-hoito potilailla, joilla on alhainen munasarjavaste. Parantaako se IVF-tulosta vai voiko se aktivoida munasarjarakkuloita ja lisätä onnistumismahdollisuuksia seuraavassa IVF-syklissä?

Tieteellinen tausta:

Huono munasarjavaste (POR) on yksi suurimmista koeputkihedelmöityksen terapeuttisista haasteista. Heikosti reagoivien potilaiden esiintyvyys vaihtelee kirjallisuudessa 9 ja 24 % välillä, mutta synnytysiän nousun vuoksi sen odotetaan olevan yksi tärkeimmistä hedelmättömyyden syistä. Epäonnistuminen vastaamaan asianmukaisesti standardiprotokolliin ja rekrytoimaan riittäviä follikkeleja johtaa munasolutuotannon vähenemiseen, syklin peruuntumiseen ja kaiken kaikkiaan se liittyy merkittävästi vähentyneeseen raskauden todennäköisyyteen. Useita POR:n hoitomenetelmiä on tutkittu; Yksittäistä tehokasta strategiaa ei kuitenkaan ole vielä laadittu. Aikaisemmin on osoitettu, että munasarjojen aivokuoren mekaaninen manipulointi, kuten munasarjojen kiilaresektio tai munasarjojen "poraus" diatermialla tai laserilla, indusoi follikkelien kasvua munasarjojen monirakkulatautipotilaalla (PCOS).

Äskettäin ilmoitettiin elävänä syntymästä munasarjojen aivokuoren fragmentoitumisen ja Hippo-signalointireitin in vitro -häiriön ja Akt-signaloinnin aktivoinnin jälkeen. Käsitellyt munasarjafragmentit siirrettiin takaisin potilaaseen ja follikkelien kasvun, kypsien munasolujen talteenoton, koeputkihedelmöityksen ja alkionsiirron jälkeen; terve vauva syntyi. Virtahepo-signalointireitti on välttämätön optimaalisen elimen koon ylläpitämiseksi, ja se säilyy kaikissa metazoa-eläimissä [6-8]. Tässä tutkimuksessa osoitettiin, että munasarjojen fragmentoituminen lisäsi aktiinin polymeroitumista ja häiritsi Hippo-signalointia alentamalla fosforyloitujen Yes-assosioituneiden proteiinien (pYAP) tasoja yhdessä YAP:n lisääntyneen tuman lokalisoitumisen kanssa, mikä johti lisääntyneeseen CCN-kasvutekijägeenien ja BIRC-apoptoosin estäjien ilmentymiseen. Erittynyt CCN2 ja siihen liittyvät tekijät edistävät follikkelien kasvua

Geenit, jotka osallistuvat munasarjojen pirstoutumiseen, virtahepo-signalointiin ja follikkelien kasvuun, ovat tärkeitä munasarjojen fysiologialle ja patofysiologialle. Munasarjan fragmentoituminen johti muutoksiin solujen välisessä jännityksessä ja helpotti G-aktiinin muuttumista F-aktiiniksi. Myöhempi Hippo-signaloinnin katkeaminen vähensi pYAP:n suhteita YAP:n kokonaismäärään, mikä johti alavirran CCN-kasvutekijöiden ja BIRC-apoptoosin estäjien lisääntyneeseen ilmentymiseen

In vitro -kypsymistä (IVM) on harjoitettu kliinisissä olosuhteissa yli vuosikymmenen ajan. Sitä on ehdotettu vaihtoehdoksi tavanomaiselle IVF:lle munasarjojen hyperstimulaatio-oireyhtymän (OHSS) riskin minimoimiseksi PCOS-potilailla. Äskettäin IVM:ää on ehdotettu menetelmäksi potilaille, jotka saavat syöpähoitoa, erityisesti naisille, jotka tarvitsevat nopeaa hedelmällisyyden säilyttämistä [9] tai joilla on estrogeeniherkän syövän uusiutumisen riski. Vaikka IVM:ää on sovellettu IVF-vasteesta heikosti saaneilla epäselvillä tuloksilla, useat tutkijat ovat osoittaneet IVM:n hyötyjä naisilla, joilla on alhainen munasarjavaste.

IVM:ää varten munasolut otetaan halkaisijaltaan jopa 4-5 mm:n munasarjarakkuloista ultraääniohjauksessa yhden luumenin ohuemmalla imuneulalla. Aspiraatiopaine on pienempi kuin tavallisessa IVF:ssä. Siksi tarvitaan useita neulanpistoja, koska käytetään alhaisempia aspiraatiopaineita ja veriset aspiraatiot voivat tukkia ohuen neulan luumenin. Koska epäkypsät oosyytit ovat suljettuina tiiviisti pakattuihin cumulus-soluihin, follikkelien seinämän kyrettiä tarvitaan kumuluksen oosyyttikompleksin poistamiseksi. Kaikki johtaa siihen, että IVM-toimenpiteen aikana tapahtuu lisääntynyttä munasarjakuoren mekaanista stimulaatiota, minkä seurauksena virtahepo-signalointireitti katkeaa.

Hypoteesi ja tavoitteet Tavoitteenamme on selvittää, voiko IVM:n aiheuttama munasarjakuoren mekaaninen manipulointi ja laukeaminen aiheuttaa munasarjojen follikkelien aktivaatiota ja värväystä edellä mainituilla mekanismeilla. Siten stimulaatio seuraavassa säännöllisessä IVF-syklissä johtaa parantuneeseen munasarjavasteeseen ja lisääntyneeseen munasolusaantoon.

Materiaalit ja menetelmät Potilaat Prospektiivinen kohorttitutkimus POR-potilailla. 25 POR-potilasta valitaan bolognan kriteerien perusteella ja kaikilla potilailla on vähintään yksi dokumentoitu POR-sykli.

IVM-protokolla POR-potilaita hoidetaan IVM-syklissä IVF-yksikköprotokollamme mukaisesti käyttämällä FSH-primingiä. Lyhyesti sanottuna lähtötilanteen arviointi, joka sisälsi hormonaalisen profiilin ja ultraäänitutkimuksen, suoritettiin kuukautiskierron päivänä 3. Päivänä 3 lisättiin 150 IU/päivä rekombinantti-FSH:ta 3 päivän ajan. Toinen arviointi suoritettiin kuukautiskierron päivänä 6. 10 000 IU hCG:n (Pregnyl; Organon, Oss, Holland) injektio annettiin ihonalaisesti, kun kohdun limakalvon paksuus on ≥6 mm ja johtava follikkeli on vähintään 12 mm. Munasolujen haku suoritetaan ultraääniohjauksessa 19G:n yksiluumenisella aspiraationeulalla (Cook; Queensland, Australia) alennetun imupaineen ollessa 7,5 kPa. Follikulaarinen neste kerätään viljelyputkiin, jotka sisältävät follikkelien huuhtelupuskuria (Cook) ja 2 IU/ml hepariinia. Tiivistettyjen oosyyttikompleksien tunnistamisen vaikeuden vuoksi kaikki aspiraatit suodatettiin ylimääräisten munasolujen tunnistamiseksi.

In vitro munasolun kypsyminen Idurakkuloita ja M1-oosyyttejä viljellään IVM-elatusaineessa (Sage; CT, USA), jota on täydennetty 75 IU:lla FSH:ta ja 75 IU:lla luteinisoivaa hormonia (LH; Ferring, Keil, Saksa), ja niiden kypsyys tarkistetaan 24–48 tunnin välillä. kulttuurin jälkeen. Kypsät munasolut poistettiin granulosasoluista ja hedelmöitettiin intrasytoplasmisella siittiöinjektiolla (ICSI). ICSI:n jälkeen munasolut siirretään IVF-elatusaineeseen. Hedelmöityminen arvioidaan 18 tuntia ICSI:n jälkeen tutkimalla munasoluista kahden erillisen esituman (2PN) ilmaantumista ja kahden polaarisen kappaleen ekstruusiota.

IVF-protokolla IVM-hoidon jälkeen, jos potilas ei tullut raskaaksi, hänelle tarjotaan perinteistä IVF-hoitoa käyttäen samaa kontrolloitua munasarjojen hyperstimulaatioprotokollaa kuin edellisessä IVF-hoidossa (ennen IVM-sykliä). Jokainen potilas toimii omana kontrollinaan.

Tulosmittaukset Tulosmittauksiin sisältyvät kontrolloidut munasarjojen hyperstimulaatiomuuttujat, talteen otettujen munasolujen määrä, kypsät munasolut imemispäivänä, hedelmöitysaste, alkioiden laatu ja siirrettyjen alkioiden määrä.