Comparaison d'un système de vitrification fermé semi-automatisé (Gavi®) avec un système de vitrification ouvert manuel (Cryotop®) (Gavi)

Cent quatre-vingts (n = 180) patientes présentant plus de 2 surplus de 2 PNoocytes pour vitrification ou patientes ayant tous les ovocytes 2PN disponibles vitrifiés électivement seront réparties au hasard (1: 1) le jour du contrôle de fécondation (jour 1 après le prélèvement de l'ovule) pour l'une ou l'autre procédure. Dans le groupe d'étude, les ovocytes 2PN seront cryoconservés en utilisant la technique semi-automatisée de vitrification/réchauffement ouvert GAVI®.

Dans le groupe témoin, les ovocytes 2PN seront cryoconservés en utilisant la technique manuelle de vitrification/réchauffement ouvert Cryotop®.

La participation à cette étude sera limitée à un cycle par patient. La population étudiée est constituée de couples infertiles sous traitement FIV ou ICSI.

La durée de l'étude sera d'au moins 6 mois par sujet, par ex. l'étude principale sur le critère principal de survie 2PN sera clôturée 6 mois après la randomisation du dernier patient.

Les données sur les grossesses et les naissances vivantes seront rapportées dans des addenda au rapport principal de l'étude clinique, le cas échéant.

Avant le début de l'étude, tous les sites d'étude auront des enquêteurs suffisamment formés.

L'étude sera réalisée dans au moins trois sites en Allemagne. Le recrutement des patients sera compétitif entre les centres d'étude.

Le nombre de patientes ayant subi une collecte d'ovocytes pendant la durée de la conduite de l'étude sera constituée de la population sélectionnée pour l'inclusion.

En général, les patients répondant aux critères d'inclusion et d'exclusion sont éligibles à l'inclusion et à la randomisation.

Il n'y a aucune restriction sur le protocole de stimulation ovarienne et le type ou la dose d'agent d'induction de l'ovulation (hCG ou agoniste de la GnRH). Le prélèvement d'ovules est généralement effectué par aspiration folliculaire guidée par échographie transvaginale 36 ± 2 heures après l'administration d'hCG.

La procédure de FIV ou d'ICSI est effectuée conformément à la procédure opératoire standard du site investigateur.

Le contrôle de la fécondation est effectué le jour 1 après le prélèvement des ovules (OPU) 17 ± 1 heures après l'insémination. Le nombre d'ovocytes régulièrement fécondés, définis comme des ovocytes présentant 2 pronoyaux et 2 globules polaires, est évalué.

Les patientes présentant ≥ 2 ovocytes fécondés régulièrement en surplus pour la cryoconservation au jour 1 et les patientes subissant une cryoconservation élective de tous les 2 ovocytes PN disponibles sont affectées à l'une des deux 2 procédures.

La randomisation sera effectuée le jour de la vérification de la fécondation (jour 1 après l'OPU) par le personnel du laboratoire en ouvrant des enveloppes scellées numérotées et opaques. La séquence aléatoire sera générée par logiciel et des blocs seront utilisés. Tous les patients randomisés seront enregistrés dans un journal de randomisation sur papier avec les initiales, la date de naissance, le numéro de l'étude, la date, le groupe d'étude, le nom et la signature du personnel. La randomisation sera stratifiée par centre et par indication (cryoconservation d'ovocytes 2PN excédentaires vs cryoconservation élective de tous les ovocytes 2PN disponibles).

Toutes les procédures de vitrification et de réchauffement seront effectuées conformément aux instructions du fabricant.

Afin d'étudier les différences de durée de la procédure de vitrification, le laps de temps entre le début des préparations nécessaires à la vitrification et le transfert du ou des dispositifs de vitrification dans le réservoir d'azote liquide pour le stockage sera enregistré.

En fonction de la politique de cryotransfert d'embryons du site investigateur, lors d'un cycle ultérieur naturel ou programmé, les embryons vitrifiés/réchauffés seront remplacés. Au sein du site, toutes les patientes subiront le même cryoprotocole pour la préparation de l'endomètre.

Il n'y a pas de spécifications sur le protocole à utiliser. Le nombre d'ovocytes 2 PN à réchauffer sera décidé par l'investigateur au cas par cas. La culture embryonnaire sera réalisée dans tous les cas en microgouttelettes individuelles recouvertes d'huile de culture jusqu'au jour du transfert embryonnaire programmé.

Le jour du transfert d'embryons et le nombre d'embryons à transférer seront décidés par l'investigateur au cas par cas.

Afin d'étudier le taux de survie, les ooytes 2PN réchauffés seront évalués immédiatement et 2 heures après la procédure de réchauffement. La survie sera confirmée par la présence d'un oolemme intact et d'un cytoplasme régulier 2 heures après la procédure de réchauffement et/ou lorsqu'un clivage embryonnaire est observé.

Afin d'étudier les différences potentielles dans le développement et la qualité des embryons vitrifiés/réchauffés, le clivage et la morphologie seront évalués comme suit :

jour 2 (44±1 heures post insémination) : nombre de cellules, taille des blastomères, degré de fragmentation

jour 3 (68±1 heures post insémination) : nombre de cellules, taille des blastomères, degré de fragmentation

jour 5 (116±1 heures post insémination) : stade blastocyste (degré d'expansion), morphologie ICM (masse cellulaire interne), morphologie TE (trophectoderme)

jour 6 (140 ± 1 heures après insémination) : stade blastocyste (degré d'expansion), morphologie ICM (masse cellulaire interne), morphologie TE (trophectoderme)

Les patientes qui conçoivent subiront une échographie pour confirmer la grossesse clinique à 6-7 semaines de gestation. Les données de suivi concernant la confirmation de la grossesse en cours seront obtenues par téléphone. La naissance vivante, y compris les données connexes, sera obtenue par un questionnaire à remplir par le patient et à renvoyer à la clinique de l'investigateur.

Les analyses seront effectuées en intention de traiter (ITT) et selon le protocole (PP), selon le cas. La population ITT est la population de patients randomisée. La population PP est la population des patients subissant une tentative de décongélation.

Les données sources seront des formulaires de déclaration de cas (CRF) sur papier.

• numéro d'identification de l'étude
• date de naissance (patiente)
• âge femme (années)
• âge masculin (ans)
• type de protocole de stimulation (protocole Antagoniste/Agoniste, protocole court/long)
• type de gonadotrophine utilisé (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• dose totale de gonadotrophines
• type d'insémination ovocytaire (FIV, ICSI)
• Date et heure du déclenchement
• Type et dose de médicament déclencheur
• Date et heure du prélèvement des ovules
• Date de randomisation
• groupe d'étude
• date et heure de la FIV/ICSI
• date et heure du contrôle de fécondation (bilan 2PN)
• nombre d'ovocytes fécondés (ovocytes 2PN)
• raison de la vitrification (surplus vs élective)
• date et heure de vitrification (début/fin)
• durée de la procédure de vitrification (minutes)
• date et heure du réchauffement (début/fin)
• durée de la procédure de réchauffement (minutes)
• nombre d'ovocytes 2PN réchauffés
• nombre d'ovocytes 2PN vitaux
• nombre d'embryons de qualité supérieure au jour 2, au jour 3, au jour 5 et au jour 6 (selon le jour du transfert d'embryons)
• nombre d'embryons transférés
• nombre d'embryons revitrifiés
• résultat du cycle (pas de grossesse, test hCG positif)
• déroulement de la grossesse (avortement, interruption de grossesse, jumeau disparu, etc.)
• Multiplicité (singleton, twin, triplet)
• issue de la grossesse (grossesse clinique, grossesse en cours, naissance vivante)

Des statistiques descriptives seront réalisées en analysant la médiane, la moyenne, n, l'écart type, les plages et les intervalles de confiance (IC) à 95 %. Les différences entre les bras seront résumées en différence absolue avec un IC à 95 %. Pour le critère de jugement principal, un modèle linéaire sera construit en tenant compte du groupe de traitement, du site d'étude et de la strate de randomisation exclusivement pour la population per protocole.

Pour les résultats secondaires, des analyses ITT et/ou PP seront effectuées. Aucune correction de multiplicité n'est prévue. Des tests paramétriques et non paramétriques seront utilisés pour les variables normalement distribuées et non normalement distribuées, respectivement, afin de comparer les résultats secondaires entre les groupes.

Les données du patient seront saisies dans une base de données informatique de manière pseudonymisée. La gestion et l'analyse des données seront effectuées par le chercheur principal.