Porównanie półautomatycznego systemu zamkniętej witryfikacji (Gavi®) z ręcznym systemem otwartej witryfikacji (Cryotop®) (Gavi)

Sto osiemdziesięciu (n=180) pacjentek z ponad 2 nadmiarowymi 2 PNoocytami do witryfikacji lub pacjentkami, u których wszystkie dostępne oocyty 2PN zostały poddane elektywnej witryfikacji, zostanie losowo przydzielonych (1:1) w dniu kontroli zapłodnienia (dzień 1 po pobraniu komórki jajowej) do dowolna procedura. W grupie badanej oocyty 2PN będą kriokonserwowane z wykorzystaniem półautomatycznej techniki otwartego witryfikacji/ogrzewania GAVI®.

W grupie kontrolnej oocyty 2PN będą kriokonserwowane przy użyciu ręcznej techniki otwartego witryfikacji/ogrzewania Cryotop®.

Udział w tym badaniu będzie ograniczony do jednego cyklu na pacjenta. Badana populacja składa się z niepłodnych par poddawanych leczeniu IVF lub ICSI.

Czas trwania badania będzie wynosił co najmniej 6 miesięcy na przedmiot, np. główne badanie dotyczące pierwotnego wyniku przeżycia 2PN zostanie zamknięte 6 miesięcy po randomizacji ostatniego pacjenta.

Dane dotyczące ciąży i wyników żywych urodzeń zostaną przedstawione w odpowiednich dodatkach do raportu z głównego badania klinicznego.

Przed rozpoczęciem badania we wszystkich ośrodkach badawczych zostaną odpowiednio przeszkoleni badacze.

Badanie zostanie przeprowadzone w co najmniej trzech ośrodkach na terenie Niemiec. Rekrutacja pacjentów będzie konkurencyjna między ośrodkami badawczymi.

Liczba pacjentów, u których pobrano komórki jajowe w ramach czasowych prowadzenia badania, będzie składać się z populacji poddanej badaniu przesiewowemu pod kątem włączenia.

Ogólnie rzecz biorąc, pacjenci spełniający kryteria włączenia i wyłączenia kwalifikują się do włączenia i randomizacji.

Nie ma ograniczeń co do protokołu stymulacji jajników oraz rodzaju lub dawki środka indukującego owulację (hCG lub agonista GnRH). Pobranie komórki jajowej jest zwykle wykonywane przez przezpochwową aspirację pęcherzyka pod kontrolą USG 36 ± 2 godziny po podaniu hCG.

Procedurę IVF lub ICSI przeprowadza się zgodnie ze standardową procedurą operacyjną ośrodka badawczego.

Kontrolę zapłodnienia przeprowadza się pierwszego dnia po pobraniu komórki jajowej (OPU) 17 ± 1 godziny po inseminacji. Ocenia się liczbę prawidłowo zapłodnionych oocytów, definiowaną jako oocyt posiadający 2 przedjądrza i 2 ciałka kierunkowe.

Pacjentki zgłaszające ≥ 2 nadwyżki regularnie zapłodnionych oocytów do kriokonserwacji w dniu 1 oraz pacjentki poddawane planowej kriokonserwacji wszystkich dostępnych 2 oocytów PN są przydzielane do jednej z dwóch procedur.

Randomizacja zostanie przeprowadzona w dniu kontroli zapłodnienia (dzień 1 po OPU) przez personel laboratorium poprzez otwarcie ponumerowanych, nieprzejrzystych zapieczętowanych kopert. Losowa sekwencja zostanie wygenerowana programowo, a użyte zostaną bloki. Wszyscy randomizowani pacjenci zostaną zarejestrowani w papierowym dzienniku randomizacji z inicjałami, datą urodzenia, numerem badania, datą, grupą badaną, nazwiskiem i podpisem personelu. Randomizacja zostanie podzielona na warstwy według ośrodka i wskazania (nadwyżka kriokonserwacji oocytów 2PN w porównaniu z kriokonserwacją elektywną wszystkich dostępnych oocytów 2PN).

Wszystkie procedury witryfikacji i ogrzewania będą wykonywane zgodnie z instrukcjami producenta.

W celu zbadania różnic w czasie trwania procedury witryfikacji, rejestrowany będzie czas pomiędzy rozpoczęciem przygotowań do witryfikacji a przeniesieniem urządzenia (urządzeń) do witryfikacji do zbiornika z ciekłym azotem w celu przechowywania.

W zależności od polityki kriotransferu zarodków ośrodka badawczego, w następnym naturalnym lub zaprogramowanym cyklu zeszklone/ocieplone zarodki zostaną zastąpione. W obrębie ośrodka wszystkie pacjentki zostaną poddane temu samemu krioprotokołowi przygotowania endometrium.

Nie ma żadnych specyfikacji dotyczących protokołu, który ma być używany. O liczbie 2 oocytów PN do ogrzania decyduje badacz indywidualnie dla każdego przypadku. Hodowla zarodków będzie prowadzona we wszystkich przypadkach w pojedynczych mikrokroplach pokrytych olejem hodowlanym do dnia planowanego transferu zarodków.

O dniu transferu zarodków i liczbie zarodków do przeniesienia decyduje badacz indywidualnie dla każdego przypadku.

W celu zbadania przeżywalności, ogrzane ooity 2PN zostaną ocenione natychmiast i 2 godziny po procedurze ogrzewania. Przeżycie zostanie potwierdzone przez obecność nienaruszonej oolemmy i regularnej cytoplazmy 2 godziny po procedurze ogrzewania i/lub po zaobserwowaniu rozszczepienia zarodka.

W celu zbadania potencjalnych różnic w rozwoju i jakości zeszklonych/ocieplonych zarodków, podział i morfologia zostaną ocenione w następujący sposób:

dzień 2 (44 ± 1 godzina po inseminacji): liczba komórek, wielkość blastomerów, stopień fragmentacji

dzień 3 (68±1 godzina po inseminacji): liczba komórek, wielkość blastomerów, stopień fragmentacji

dzień 5 (116 ± 1 godzina po inseminacji): stadium blastocysty (stopień ekspansji), morfologia ICM (masa komórek wewnętrznych), morfologia TE (trofektodermy)

dzień 6 (140±1 godzina po inseminacji): stadium blastocysty (stopień ekspansji), morfologia ICM (masa komórek wewnętrznych), morfologia TE (trofektodermy)

Pacjentki, które zajdą w ciążę, zostaną poddane badaniu ultrasonograficznemu w celu potwierdzenia klinicznej ciąży w 6-7 tygodniu ciąży. Dalsze dane dotyczące potwierdzenia trwającej ciąży będą uzyskiwane telefonicznie. Urodzenie żywe, w tym powiązane dane, zostaną uzyskane za pomocą kwestionariusza, który pacjent ma wypełnić i odesłać do kliniki badacza.

Analizy zostaną przeprowadzone zgodnie z zamiarem leczenia (ITT) i zgodnie z protokołem (PP), odpowiednio. Populacja ITT jest randomizowaną populacją pacjentów. Populacja PP to populacja pacjentów poddawanych próbie rozmrożenia.

Danymi źródłowymi będą papierowe formularze opisów przypadków (CRF).

• numer identyfikacyjny badania
• data urodzenia (pacjentka)
• wiek kobieta (lata)
• wiek mężczyzna (lata)
• rodzaj protokołu stymulacji (protokół antagonista/agonista, protokół krótki/długi)
• rodzaj zastosowanej gonadotropiny (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• całkowita dawka gonadotropin
• rodzaj inseminacji oocytów (IVF, ICSI)
• Data i godzina wyzwalania
• Rodzaj i dawka leku wyzwalającego
• Data i godzina pobrania komórki jajowej
• Data randomizacji
• kółko naukowe
• data i godzina IVF/ICSI
• data i godzina kontroli zapłodnienia (ocena 2PN)
• liczba zapłodnionych oocytów (oocyty 2PN)
• powód witryfikacji (nadwyżka vs. planowy)
• data i godzina witryfikacji (początek/koniec)
• czas trwania procedury witryfikacji (minuty)
• data i czas grzania (początek/koniec)
• czas trwania procedury rozgrzewającej (minuty)
• liczba ocieplonych 2PN-oocytów
• liczba żywotnych komórek jajowych 2PN
• liczba zarodków najwyższej jakości w 2, 3, 5 i 6 dniu (w zależności od dnia transferu zarodków)
• liczba przeniesionych zarodków
• liczba rewitryfikowanych zarodków
• wynik cyklu (brak ciąży, pozytywny test hCG)
• przebieg ciąży (aborcja, przerwanie ciąży, zanik bliźniaka itp.)
• Wielość (singleton, twin, triplet)
• wynik ciąży (ciąża kliniczna, ciąża w toku, poród żywy)

Statystyki opisowe zostaną wykonane poprzez analizę mediany, średniej, n, odchylenia standardowego, zakresów i 95% przedziałów ufności (CI). Różnice między ramionami zostaną podsumowane jako różnica bezwzględna z 95% przedziałem ufności. W przypadku głównego wyniku zostanie skonstruowany model liniowy uwzględniający grupę leczoną, miejsce badania i warstwę randomizacji wyłącznie dla populacji zgodnej z protokołem.

W przypadku drugorzędowych wyników zostaną przeprowadzone analizy ITT i/lub PP. Nie planuje się korekty na krotność. Testy parametryczne i nieparametryczne zostaną użyte odpowiednio dla zmiennych o rozkładzie normalnym i nienormalnym, aby porównać drugorzędne wyniki między grupami.

Dane pacjenta zostaną wprowadzone do komputerowej bazy danych w sposób pseudonimizowany. Zarządzanie danymi i analiza będą przeprowadzane przez głównego badacza.