Сравнение полуавтоматической закрытой системы витрификации (Gavi®) с ручной открытой системой витрификации (Cryotop®) (Gavi)

Сто восемьдесят (n = 180) пациенток с более чем 2 избыточными 2 PN-ооцитами для витрификации или пациентки, у которых все доступные 2-PN ооциты выборочно витрифицированы, будут случайным образом распределены (1:1) в день проверки оплодотворения (день 1 после взятия яйцеклетки) для либо процедура. В исследовательской группе ооциты 2PN будут криоконсервированы с использованием полуавтоматической методики открытой витрификации/согревания GAVI®.

В контрольной группе ооциты 2PN будут криоконсервированы с использованием ручной техники открытой витрификации/согревания Cryotop®.

Участие в этом исследовании будет ограничено одним циклом на пациента. Исследуемая популяция состоит из бесплодных пар, проходящих лечение ЭКО или ИКСИ.

Продолжительность исследования будет минимум 6 месяцев на предмет, т.е. основное исследование первичной конечной точки выживаемости при 2PN будет закрыто через 6 месяцев после рандомизации последнего пациента.

Данные о беременности и исходах живорождения будут представлены в приложениях к основному отчету о клиническом исследовании, если это необходимо.

Перед началом исследования во всех исследовательских центрах должны быть достаточно подготовлены исследователи.

Исследование будет проводиться как минимум в трех центрах Германии. Набор пациентов будет конкурентным между исследовательскими центрами.

Количество пациентов, у которых были отобраны ооциты в течение периода проведения исследования, будет состоять из популяции, прошедшей скрининг для включения.

Как правило, пациенты, соответствующие критериям включения и исключения, имеют право на включение и рандомизацию.

Нет ограничений по протоколу стимуляции яичников и типу или дозе агента, вызывающего овуляцию (ХГЧ или агонист ГнРГ). Забор яйцеклетки обычно проводят трансвагинальной аспирацией фолликулов под контролем УЗИ через 36 ± 2 часа после введения ХГЧ.

Процедура ЭКО или ИКСИ проводится в соответствии со стандартной операционной процедурой исследовательского центра.

Проверка оплодотворения проводится на 1-й день после сбора яйцеклеток (OPU) через 17 ± 1 час после осеменения. Оценивают количество регулярно оплодотворенных ооцитов, определяемых как ооциты, имеющие 2 пронуклеуса и 2 полярных тельца.

Пациентки, представляющие ≥ 2 избыточных регулярно оплодотворенных ооцитов для криоконсервации в 1-й день, и пациентки, подвергающиеся плановой криоконсервации всех имеющихся 2 ооцитов ПП, распределяются на одну из двух 2 процедур.

Рандомизация будет проводиться в день проверки оплодотворения (день 1 после OPU) персоналом лаборатории путем вскрытия пронумерованных непрозрачных запечатанных конвертов. Случайная последовательность будет сгенерирована программным обеспечением, и будут использоваться блоки. Все рандомизированные пациенты будут зарегистрированы в бумажном журнале рандомизации с указанием инициалов, даты рождения, номера исследования, даты, исследовательской группы, имени и подписи персонала. Рандомизация будет стратифицирована по Центру и показаниям (излишняя криоконсервация ооцитов 2PN против плановой криоконсервации всех доступных ооцитов 2PN).

Все процедуры витрификации и нагревания будут выполняться в соответствии с инструкциями производителя.

Чтобы исследовать различия в продолжительности процедуры витрификации, будет записан промежуток времени между началом подготовки, необходимой для витрификации, и переносом устройства (устройств) витрификации в резервуар с жидким азотом для хранения.

В зависимости от политики криопереноса эмбрионов в исследовательском центре в последующем естественном или запрограммированном цикле будут заменены витрифицированные/нагретые эмбрионы. В рамках учреждения всем пациенткам будет проведен один и тот же криопротокол для подготовки эндометрия.

Спецификации используемого протокола отсутствуют. Количество 2 ПП ооцитов, подлежащих нагреванию, определяется исследователем в каждом конкретном случае. Культивирование эмбрионов будет проводиться во всех случаях в отдельных микрокаплях, покрытых культуральным маслом, до дня запланированного переноса эмбрионов.

День переноса эмбрионов и количество переносимых эмбрионов определяются исследователем в каждом конкретном случае.

Чтобы исследовать выживаемость, подогретые 2PN-ооциты будут оцениваться сразу и через 2 часа после процедуры нагревания. Выживание будет подтверждено наличием интактной оолеммы и регулярной цитоплазмы через 2 часа после процедуры нагревания и/или при наблюдении эмбрионального дробления.

Для изучения потенциальных различий в развитии и качестве витрифицированных/нагретых эмбрионов дробление и морфология будут оцениваться следующим образом:

день 2 (44 ± 1 час после осеменения): количество клеток, размер бластомера, степень фрагментации

3-й день (68 ± 1 час после осеменения): количество клеток, размер бластомера, степень фрагментации

день 5 (116 ± 1 час после осеменения): стадия бластоцисты (степень расширения), морфология ICM (внутренняя клеточная масса), морфология TE (трофэктодерма).

6-й день (140 ± 1 час после осеменения): стадия бластоцисты (степень расширения), морфология ICM (внутренняя клеточная масса), морфология TE (трофэктодерма).

Пациентки, которые забеременели, проходят ультразвуковое исследование для подтверждения клинической беременности на 6-7 неделе беременности. Последующие данные относительно подтверждения текущей беременности будут получены по телефону. Живорождение, включая соответствующие данные, будет получено с помощью анкеты, которую пациент заполнит и вернет в клинику исследователя.

Анализы будут проводиться по назначению лечения (ITT) и по протоколу (PP), в зависимости от обстоятельств. ITT-популяция представляет собой рандомизированную популяцию пациентов. Популяция PP — это популяция пациентов, подвергающихся попытке оттаивания.

Исходными данными будут бумажные формы истории болезни (CRF).

• идентификационный номер исследования
• дата рождения (пациент женского пола)
• возраст женщины (лет)
• возраст мужчины (лет)
• тип протокола стимуляции (протокол антагониста/агониста, короткий/длинный протокол)
• тип используемого гонадотропина (нФСГ, рФСГ, ЧМГ, смесь, Элонва)
• общая доза гонадотропинов
• вид инсеминации ооцитов (ЭКО, ИКСИ)
• Дата и время срабатывания
• Тип и доза триггерного препарата
• Дата и время забора яйцеклеток
• Дата рандомизации
• исследовательская группа
• дата и время ЭКО/ИКСИ
• дата и время проверки оплодотворения (оценка 2PN)
• количество оплодотворенных ооцитов (ооциты 2PN)
• причина витрификации (избыточная или факультативная)
• дата и время витрификации (начало/окончание)
• продолжительность процедуры витрификации (минут)
• дата и время прогрева (начало/окончание)
• продолжительность процедуры прогревания (минут)
• количество согретых 2PN-ооцитов
• количество жизнеспособных 2PN-ооцитов
• количество эмбрионов высшего качества на 2-й, 3-й, 5-й и 6-й день (в зависимости от дня переноса эмбрионов)
• количество перенесенных эмбрионов
• количество ревитрифицированных эмбрионов
• исход цикла (нет беременности, положительный тест на ХГЧ)
• течение беременности (аборт, прерывание, исчезновение двойни и др.)
• Множественность (одиночный, двойной, тройной)
• исход беременности (клиническая беременность, продолжающаяся беременность, живорождение)

Описательная статистика будет выполняться путем анализа медианы, среднего, n, стандартного отклонения, диапазонов и 95% доверительных интервалов (ДИ). Различия между группами будут суммированы как абсолютные различия с 95% ДИ. Для основного результата будет построена линейная модель с учетом группы лечения, места исследования и страты рандомизации исключительно для популяции по протоколу.

Для вторичных результатов будут выполнены анализы ITT и/или PP. Поправка на кратность не планируется. Параметрические и непараметрические тесты будут использоваться для нормально распределенных и ненормально распределенных переменных, соответственно, для сравнения вторичных результатов между группами.

Данные пациента будут внесены в компьютерную базу данных в псевдонимизированном виде. Управление данными и их анализ будет осуществляться Главным исследователем.