Comparación de un sistema de vitrificación cerrado semiautomatizado (Gavi®) con un sistema de vitrificación abierto manual (Cryotop®) (Gavi)

Ciento ochenta (n=180) pacientes que presenten más de 2 ovocitos 2 PN excedentes para vitrificación o pacientes que tengan todos los ovocitos 2PN disponibles vitrificados de forma selectiva se asignarán al azar (1:1) el día del control de fertilización (día 1 después de la recogida del óvulo) para cualquiera de los dos procedimientos. En el grupo de estudio, los ovocitos 2PN se crioconservarán utilizando la técnica de calentamiento/vitrificación abierta semiautomática GAVI®.

En el grupo de control, los ovocitos 2PN se crioconservarán utilizando la técnica manual de vitrificación abierta/calentamiento Cryotop®.

La participación en este estudio estará limitada a un ciclo por paciente. La población de estudio consiste en parejas infértiles que se someten a un tratamiento de FIV o ICSI.

La duración del estudio será como mínimo de 6 meses por sujeto, p. el estudio principal sobre el resultado primario 2PN supervivencia se cerrará 6 meses después de la aleatorización del último paciente.

Los datos sobre el resultado del embarazo y los nacidos vivos se informarán en anexos al informe principal del estudio clínico, según corresponda.

Antes del inicio del estudio, todos los sitios del estudio tendrán investigadores suficientemente capacitados.

El estudio se llevará a cabo en al menos tres sitios dentro de Alemania. El reclutamiento de pacientes será competitivo entre los centros del estudio.

El número de pacientes a las que se les extrajo un ovocito durante el período de tiempo de la realización del estudio consistirá en la población examinada para su inclusión.

En general, los pacientes que cumplen con los criterios de inclusión y exclusión son elegibles para la inclusión y aleatorización.

No hay restricciones sobre el protocolo de estimulación ovárica y el tipo o la dosis del agente de inducción de la ovulación (hCG o agonista de GnRH). La extracción de óvulos generalmente se realiza mediante aspiración transvaginal de folículos guiada por ultrasonido 36 ± 2 horas después de la administración de hCG.

El procedimiento de FIV o ICSI se realiza de acuerdo con el procedimiento operativo estándar del sitio del investigador.

El control de fertilización se realiza el día 1 después de la recogida del óvulo (OPU) 17±1 horas después de la inseminación. Se valora el número de ovocitos regularmente fecundados, definidos como ovocitos que presentan 2 pronúcleos y 2 cuerpos polares.

Las pacientes que presentan ≥ 2 ovocitos excedentes fecundados regularmente para la crioconservación el día 1 y las pacientes que se someten a la crioconservación electiva de todos los 2 ovocitos PN disponibles se asignan a uno de los dos 2 procedimientos.

La aleatorización se realizará el día del control de la fertilización (día 1 después de la OPU) por parte del personal del laboratorio abriendo sobres sellados, opacos y numerados. La secuencia aleatoria será generada por software y se utilizarán bloques. Todos los pacientes aleatorizados se registrarán en un registro de aleatorización en papel con iniciales, fecha de nacimiento, número de estudio, fecha, grupo de estudio, nombre y firma del personal. La aleatorización se estratificará por centro y por indicación (criopreservación de ovocitos 2PN excedentes frente a criopreservación electiva de todos los ovocitos 2PN disponibles).

Todos los procedimientos de vitrificación y calentamiento se realizarán de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Para investigar las diferencias en la duración del procedimiento de vitrificación, se registrará el lapso de tiempo entre el inicio de los preparativos necesarios para la vitrificación y la transferencia de los dispositivos de vitrificación al tanque de nitrógeno líquido para su almacenamiento.

Dependiendo de la política de transferencia de crioembriones del sitio del investigador, en un ciclo natural o programado posterior se reemplazarán los embriones vitrificados/calentados. Dentro del sitio, todas las pacientes se someterán al mismo crioprotocolo para la preparación del endometrio.

No hay especificaciones sobre el protocolo a utilizar. El investigador decidirá caso por caso el número de 2 ovocitos PN a calentar. El cultivo de embriones se realizará en todos los casos en microgotas individuales cubiertas con aceite de cultivo hasta el día de la transferencia embrionaria programada.

El día de la transferencia de embriones y el número de embriones a transferir serán decididos por el investigador caso por caso.

Para investigar la tasa de supervivencia, se evaluarán los ooytes 2PN calentados inmediatamente y 2 horas después del procedimiento de calentamiento. La supervivencia se confirmará por la presencia de un oolema intacto y un citoplasma regular 2 horas después del procedimiento de calentamiento y/o cuando se observe la escisión embrionaria.

Para investigar las posibles diferencias en el desarrollo y la calidad de los embriones vitrificados/calentados, la escisión y la morfología se evaluarán de la siguiente manera:

día 2 (44±1 horas después de la inseminación): número de células, tamaño de blastómeros, grado de fragmentación

día 3 (68±1 horas después de la inseminación): número de células, tamaño de blastómeros, grado de fragmentación

día 5 (116±1 horas después de la inseminación): estadio de blastocisto (grado de expansión), morfología ICM (masa celular interna), morfología TE (trofectodermo)

día 6 (140±1 horas después de la inseminación): estadio de blastocisto (grado de expansión), morfología ICM (masa celular interna), morfología TE (trofectodermo)

Las pacientes que conciben se someterán a un examen de ultrasonido para confirmar el embarazo clínico a las 6-7 semanas de gestación. Los datos de seguimiento con respecto a la confirmación del embarazo en curso se obtendrán por teléfono. Los nacidos vivos, incluidos los datos relacionados, se obtendrán mediante un cuestionario que deberá completar el paciente y devolverlo a la clínica del investigador.

Los análisis se realizarán por intención de tratar (ITT) y por protocolo (PP), según corresponda. La población ITT es la población de pacientes aleatorizados. La población PP es la población de pacientes sometidos a un intento de descongelación.

Los datos de origen serán formularios de informes de casos (CRF) en papel.

• número de identificación del estudio
• fecha de nacimiento (paciente mujer)
• edad mujer (años)
• edad hombre (años)
• tipo de protocolo de estimulación (protocolo antagonista/agonista, protocolo corto/largo)
• tipo de gonadotropina utilizada (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• dosis total de gonadotropinas
• tipo de inseminación de ovocitos (FIV, ICSI)
• Fecha y hora de disparo
• Tipo y dosis del medicamento desencadenante
• Fecha y hora de recogida de óvulos
• Fecha de aleatorización
• grupo de estudio
• fecha y hora de FIV/ICSI
• control de fecha y hora de fertilización (evaluación 2PN)
• número de ovocitos fecundados (ovocitos 2PN)
• motivo de la vitrificación (excedente frente a electiva)
• fecha y hora de vitrificación (inicio/fin)
• duración del procedimiento de vitrificación (minutos)
• fecha y hora de calentamiento (inicio/fin)
• duración del procedimiento de calentamiento (minutos)
• número de ovocitos 2PN calentados
• número de ovocitos 2PN vitales
• número de embriones de máxima calidad el día 2, día 3, día 5 y día 6 (según el día de la transferencia de embriones)
• número de embriones transferidos
• número de embriones revitrificados
• resultado del ciclo (sin embarazo, prueba de hCG positiva)
• curso del embarazo (aborto, terminación, desaparición de gemelos, etc.)
• Multiplicidad (único, gemelo, triplete)
• resultado del embarazo (embarazo clínico, embarazo en curso, nacido vivo)

Se realizará estadística descriptiva analizando mediana, media, n, desviación estándar, rangos e intervalos de confianza (IC) del 95%. Las diferencias entre los brazos se resumirán como diferencia absoluta con un IC del 95 %. Para el resultado primario, se construirá un modelo lineal que tenga en cuenta el grupo de tratamiento, el sitio de estudio y el estrato de aleatorización exclusivamente para la población por protocolo.

Para los resultados secundarios, se realizarán análisis ITT y/o PP. No se prevé ninguna corrección por multiplicidad. Se utilizarán pruebas paramétricas y no paramétricas para variables normalmente distribuidas y no normalmente distribuidas, respectivamente, para comparar resultados secundarios entre grupos.

Los datos del paciente se introducirán en una base de datos informática de forma seudonimizada. El manejo y análisis de datos será realizado por el Investigador Principal.