Srovnání poloautomatického uzavřeného vitrifikačního systému (Gavi®) s manuálním otevřeným vitrifikačním systémem (Cryotop®) (Gavi)

Sto osmdesát (n=180) pacientek s více než 2 nadbytečnými 2 PNoocyty pro vitrifikaci nebo pacientek, které mají všechny dostupné 2PN oocyty selektivně vitrifikované, bude náhodně přiděleno (1:1) v den kontroly oplodnění (den 1 po odběru vajíčka) buď postup. Ve studijní skupině budou 2PN oocyty kryokonzervovány za použití poloautomatické techniky otevřené vitrifikace/ohřívání GAVI®.

V kontrolní skupině budou kryokonzervovány 2PN oocyty za použití manuální techniky otevřené vitrifikace/zahřívání Cryotop®.

Účast v této studii bude omezena na jeden cyklus na pacienta. Studovaná populace se skládá z neplodných párů podstupujících léčbu IVF nebo ICSI.

Délka studia bude minimálně 6 měsíců na předmět, např. hlavní studie o přežití primárního výsledku 2PN bude uzavřena 6 měsíců po randomizaci posledního pacienta.

Údaje o výsledku těhotenství a porodu živě budou uvedeny v dodatcích ke zprávě o hlavní klinické studii, je-li to vhodné.

Před zahájením studie budou mít všechna místa studie dostatečně vyškolené zkoušející.

Studie bude provedena nejméně na třech místech v Německu. Nábor pacientů bude mezi studijními centry konkurenční.

Počet pacientek, u kterých došlo k odběru oocytů během časového rámce provádění studie, se bude skládat z populace, u které byl proveden screening pro zařazení.

Obecně platí, že pacienti splňující kritéria pro zařazení a vyloučení jsou způsobilí pro zařazení a randomizaci.

Neexistují žádná omezení týkající se protokolu ovariální stimulace a typu nebo dávky látky indukující ovulaci (agonista hCG nebo GnRH). Odběr vajíčka se obvykle provádí transvaginální ultrazvukovou aspirací folikulů 36±2 hodiny po podání hCG.

Postup IVF nebo ICSI se provádí podle standardního pracovního postupu vyšetřujícího pracoviště.

Kontrola oplodnění se provádí 1. den po odběru vajíčka (OPU) 17±1 hodin po inseminaci. Hodnotí se počet pravidelně oplodněných oocytů, definovaných jako oocyt se 2 pronukley a 2 polárními tělísky.

Pacientky s ≥ 2 přebytečnými pravidelně oplodněnými oocyty pro kryoperaci v den 1 a pacientky podstupující elektivní kryokonzervaci všech 2 dostupných PN oocytů jsou přiděleny k jedné ze dvou 2 procedur.

Randomizaci provedou v den kontroly oplodnění (1. den po OPU) pracovníci laboratoře otevřením očíslovaných, neprůhledných zapečetěných obálek. Náhodná sekvence bude vygenerována softwarem a budou použity bloky. Všichni randomizovaní pacienti budou zapsáni do papírového randomizačního deníku s iniciálami, datem narození, číslem studie, datem, studijní skupinou, jménem a podpisem personálu. Randomizace bude stratifikována podle centra a podle indikace (kryokonzervace 2PN oocytů vs. elektivní kryoprezervace všech dostupných 2PN oocytů).

Veškeré vitrifikační a ohřívací postupy budou prováděny podle pokynů výrobce.

Za účelem prozkoumání rozdílů v trvání vitrifikačního postupu bude zaznamenáno časové rozpětí mezi zahájením přípravy potřebných pro vitrifikaci a přenesením vitrifikačního zařízení (zařízení) do nádrže na kapalný dusík ke skladování.

V závislosti na politice kryo transferu embryí výzkumného pracoviště budou v následném přirozeném nebo naprogramovaném cyklu vitrifikovaná/zahřátá embrya nahrazena. Na místě podstoupí všechny pacientky stejný kryoprotokol pro přípravu endometria.

Neexistují žádné specifikace protokolu, který se má použít. O počtu 2 PN oocytů, které se mají zahřát, rozhodne zkoušející případ od případu. Kultivace embryí bude ve všech případech prováděna v jednotlivých mikrokapkách pokrytých kultivačním olejem až do dne plánovaného embryotransferu.

O dni přenosu embryí a počtu embryí určených k přenosu rozhodne zkoušející případ od případu.

Aby bylo možné prozkoumat míru přežití, zahřáté 2PN-ooytes budou hodnoceny okamžitě a 2 hodiny po zahřátí. Přežití bude potvrzeno přítomností neporušené oolemy a pravidelné cytoplazmy 2 hodiny po proceduře zahřívání a/nebo když je pozorováno embryonální štěpení.

Za účelem prozkoumání potenciálních rozdílů ve vývoji a kvalitě vitrifikovaných/zahřátých embryí bude štěpení a morfologie hodnoceno následovně:

den 2 (44±1 hodin po inseminaci): počet buněk, velikost blastomer, stupeň fragmentace

den 3 (68±1 hodin po inseminaci): počet buněk, velikost blastomer, stupeň fragmentace

den 5 (116±1 hodina po inseminaci): stadium blastocysty (stupeň expanze), morfologie ICM (vnitřní buněčná hmota), morfologie TE (trofektoderm)

6. den (140±1 hodin po inseminaci): stadium blastocysty (stupeň expanze), morfologie ICM (vnitřní buněčná hmota), morfologie TE (trofektoderm)

Pacientky, které otěhotní, podstoupí ultrazvukové vyšetření k potvrzení klinického těhotenství v 6.–7. týdnu těhotenství. Následné údaje ohledně potvrzení probíhajícího těhotenství budou získány telefonicky. Živý porod včetně souvisejících údajů bude získán dotazníkem, který pacient vyplní a vrátí na kliniku zkoušejícího.

Analýzy budou provedeny podle záměru léčby (ITT) a podle protokolu (PP), podle potřeby. Populace ITT je randomizovaná populace pacientů. Populace PP je populace pacientů podstupujících pokus o rozmrazení.

Zdrojovými daty budou papírové formuláře kazuistik (CRF).

• identifikační číslo studie
• datum narození (pacientka)
• věk žena (let)
• věk muž (let)
• typ stimulačního protokolu (protokol antagonisty/agonisty, krátký/dlouhý protokol)
• typ použitého gonadotropinu (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• celková dávka gonadotropinů
• typ inseminace oocytů (IVF, ICSI)
• Datum a čas spuštění
• Typ a dávka spouštěcího léku
• Datum a čas odběru vajíčka
• Datum randomizace
• studijní skupina
• datum a čas IVF/ICSI
• datum a čas kontroly oplodnění (hodnocení 2PN)
• počet oplodněných oocytů (2PN oocyty)
• důvod pro vitrifikaci (přebytek vs. volitelný)
• datum a čas vitrifikace (začátek/konec)
• délka vitrifikační procedury (minuty)
• datum a čas ohřevu (začátek/konec)
• délka zahřívací procedury (minuty)
• počet zahřátých 2PN-oocytů
• počet vitálních 2PN-oocytů
• počet embryí nejvyšší kvality v den 2, den 3, den 5 a den 6 (v závislosti na dni přenosu embryí)
• počet přenesených embryí
• počet revitrifikovaných embryí
• výsledek cyklu (žádné těhotenství, pozitivní hCG test)
• průběh těhotenství (potrat, přerušení těhotenství, mizející dvojče atd.)
• Násobnost (singleton, twin, triplet)
• výsledek těhotenství (klinické těhotenství, probíhající těhotenství, živý porod)

Popisná statistika bude provedena analýzou mediánu, průměru, n, standardní odchylky, rozsahů a 95% intervalů spolehlivosti (CI). Rozdíly mezi rameny budou shrnuty jako absolutní rozdíl s 95% CI. Pro primární výsledek bude vytvořen lineární model, který zohlední léčebnou skupinu, místo studie a randomizační vrstvu výhradně pro populaci podle protokolu.

Pro sekundární výsledky budou provedeny analýzy ITT a/nebo PP. Žádná korekce na násobnost se neplánuje. Parametrické a neparametrické testy budou použity pro normálně rozdělené a nenormálně rozdělené proměnné, v tomto pořadí, k porovnání sekundárních výsledků mezi skupinami.

Údaje o pacientech budou vkládány do počítačové databáze pseudonymizovaným způsobem. Správu a analýzu dat provede hlavní řešitel.