Félautomata zárt vitrifikációs rendszer (Gavi®) összehasonlítása kézi nyitott üvegesítő rendszerrel (Cryotop®) (Gavi)

Száznyolcvan (n=180) beteget, akiknél több mint 2 többlet 2 PNoocytát mutatnak be üvegezésre, vagy olyan betegeket, akiknél az összes rendelkezésre álló 2PN oocitát szelektíven vitrifikálták, véletlenszerűen (1:1) osztják ki a megtermékenyítési ellenőrzés napján (a petesejt felvételét követő 1. napon) bármelyik eljárást. A vizsgálati csoportban a 2PN petesejteket mélyhűtve tárolják a félautomata GAVI® nyílt üvegezési/melegítési technikával.

A kontrollcsoportban a 2PN oocitákat a kézi Cryotop® nyílt üvegezési/melegítési technikával mélyhűtöttük.

A vizsgálatban való részvétel betegenként egy ciklusra korlátozódik. A vizsgálati populáció IVF- vagy ICSI-kezelésen átesett terméketlen párokból áll.

A tanulmányi idő tantárgyanként minimum 6 hónap lesz, pl. az elsődleges kimenetelű 2PN túlélésről szóló fő vizsgálatot 6 hónappal az utolsó beteg randomizálása után zárják le.

A terhességre és az élve születésre vonatkozó adatokat szükség szerint a fő klinikai vizsgálati jelentés mellékleteiben kell közölni.

A vizsgálat megkezdése előtt minden vizsgálati helyszínen kellően képzett vizsgálókkal kell rendelkeznie.

A vizsgálatot legalább három németországi helyszínen fogják elvégezni. A betegek toborzása versenyképes lesz a tanulmányi központok között.

Azon betegek száma, akiknél a petesejt felszaporodik a vizsgálat időtartama alatt, a besorolás céljából szűrt populációból áll.

Általánosságban elmondható, hogy azok a betegek, akik megfelelnek a felvételi és kizárási kritériumoknak, jogosultak a felvételre és a randomizálásra.

Nincsenek korlátozások a petefészek-stimulációs protokollra és az ovulációt indukáló szer típusára vagy dózisára vonatkozóan (hCG vagy GnRH-agonista). A petesejt felvételét általában transzvaginális ultrahang-vezérelt tüszőszívással végzik 36±2 órával a hCG beadása után.

Az IVF vagy ICSI eljárás a vizsgálóhely szabványos működési eljárása szerint történik.

A megtermékenyítési ellenőrzést a petesejt felvétele (OPU) követő 1. napon, a megtermékenyítés után 17±1 órával végezzük. Felmérik a rendszeresen megtermékenyített petesejtek számát, amely 2 pronukleust és 2 poláris testet tartalmazó petesejteket jelent.

Azokat a betegeket, akiknél az 1. napon ≥ 2 többlet rendszeresen megtermékenyített petesejteket mutatnak be mélyhűtés céljából, és azokat a betegeket, akiknél az összes rendelkezésre álló 2 PN petesejtek elektív mélyhűtéses tartósítását végzik, a két eljárás valamelyikére osztják be.

A véletlenszerű besorolást a megtermékenyítési ellenőrzés napján (az OPU utáni 1. napon) végzik el a labor munkatársai, számozott, átlátszatlan lezárt borítékok felnyitásával. A véletlenszerű sorozatot szoftver generálja, és blokkokat használ. Minden randomizált beteget egy papíralapú randomizációs naplóba jegyeznek be kezdőbetűkkel, DOB-val, vizsgálati számmal, dátummal, vizsgálati csoporttal, a személyzet nevével és aláírásával. A véletlenszerűsítést Center és indikáció szerint rétegezzük (többlet 2PN oocita krioprezerváció vs. az összes rendelkezésre álló 2PN oocita elektív krioprezervációja).

Minden üvegezési és melegítési eljárást a gyártó utasításai szerint kell végrehajtani.

Az üvegezési eljárás időtartama közötti különbségek vizsgálata érdekében rögzítésre kerül az üvegezéshez szükséges készítmények megkezdése és a vitrifikáló készülék(ek) tárolás céljából a folyékony nitrogén tartályba való áthelyezése közötti idő.

A vizsgáló hely krioembriótranszfer politikájától függően egy következő természetes vagy programozott ciklusban az üvegesített/melegített embriókat kicserélik. A helyszínen minden beteg ugyanazon a krioprotokollon esik át az endometrium elkészítéséhez.

A használandó protokollra vonatkozóan nincsenek specifikációk. A felmelegítendő 2 PN oocita számáról a vizsgáló dönt eseti alapon. Az embriótenyésztést minden esetben egyedi mikrocseppekben, tenyészolajjal bevonva végezzük a tervezett embrióátültetés napjáig.

Az embrióátültetés napjáról és az áthelyezendő embriók számáról eseti alapon a vizsgáló dönt.

A túlélési arány vizsgálata érdekében a felmelegített 2PN-ooyákat azonnal és 2 órával a melegítési eljárás után értékeljük. A túlélést az érintetlen olemma és a szabályos citoplazma jelenléte igazolja 2 órával a melegítési eljárás után, és/vagy ha embrionális hasítás figyelhető meg.

Az üvegezett/melegített embriók fejlődésében és minőségében mutatkozó lehetséges különbségek vizsgálata érdekében a hasítást és a morfológiát az alábbiak szerint értékeljük:

2. nap (44±1 óra termékenyítés után): sejtszám, blasztomer mérete, fragmentáció foka

3. nap (68±1 óra termékenyítés után): sejtszám, blasztomer mérete, fragmentáció foka

5. nap (116±1 óra megtermékenyítés után): blasztociszta stádium (tágulási fokozat), ICM (belső sejttömeg) morfológia, TE (trofektoderma) morfológia

6. nap (140±1 óra termékenyítés után): blasztociszta stádium (tágulási fokozat), ICM (belső sejttömeg) morfológia, TE (trofektoderma) morfológia

A teherbeesett betegeket a terhesség 6-7 hetében ultrahangos vizsgálatnak vetik alá a klinikai terhesség megerősítésére. A folyamatban lévő terhesség megerősítésére vonatkozó nyomon követési adatokat telefonon kérik. Az élveszületést, beleértve a kapcsolódó adatokat is, egy kérdőív fogja megszerezni, amelyet a páciens tölt ki, és visszaküldi a vizsgáló klinikájára.

Az elemzéseket kezelési szándékonként (ITT) és protokollonként (PP) kell elvégezni. Az ITT populáció a randomizált betegpopuláció. A PP-populáció azoknak a betegeknek a populációja, akiknél felengedési kísérletet hajtanak végre.

A forrásadatok papíralapú esetjelentési űrlapok (CRF).

• tanulmány azonosító száma
• születési dátum (nőbeteg)
• kor nő (év)
• kor férfi (év)
• stimulációs protokoll típusa (Antagonista/Agonista protokoll, rövid/hosszú protokoll)
• használt gonadotropin típusa (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• a gonadotropinok teljes dózisa
• petesejtek inszemináció típusa (IVF, ICSI)
• A kioldás dátuma és ideje
• A kiváltó gyógyszer típusa és dózisa
• A petesejt felvételének dátuma és időpontja
• A véletlenszerű besorolás dátuma
• tanulócsoport
• az IVF/ICSI dátuma és ideje
• a megtermékenyítési ellenőrzés dátuma és időpontja (2PN értékelés)
• a megtermékenyített petesejtek száma (2PN oociták)
• üvegesedés oka (felesleg vs. választható)
• az üvegezés dátuma és időpontja (kezdete/vége)
• üvegezési eljárás időtartama (perc)
• a felmelegedés dátuma és ideje (kezdete/vége)
• a melegítési eljárás időtartama (perc)
• felmelegített 2PN-petesejtek száma
• a létfontosságú 2PN-petesejtek száma
• kiváló minőségű embriók száma a 2., 3., 5. és 6. napon (az embrióátültetés napjától függően)
• az átvitt embriók száma
• revitrifikált embriók száma
• ciklus kimenetele (nincs terhesség, pozitív hCG teszt)
• a terhesség lefolyása (abortusz, megszakítás, eltűnő iker, stb.)
• Multiplicitás (egyes, iker, hármas)
• terhesség kimenetele (klinikai terhesség, folyamatban lévő terhesség, élve születés)

A leíró statisztikát a medián, az átlag, az n, a szórás, a tartományok és a 95%-os konfidencia intervallumok (CI) elemzésével végezzük. A karok közötti különbségeket abszolút különbségként 95%-os CI-vel összegezzük. Az elsődleges eredményhez egy lineáris modellt hoznak létre, amely figyelembe veszi a kezelési csoportot, a vizsgálati helyet és a randomizációs réteget, kizárólag a protokollonkénti populációra vonatkozóan.

A másodlagos eredményekhez ITT és/vagy PP elemzéseket kell végezni. Nem terveznek korrekciót a multiplicitás miatt. Paraméteres és nem paraméteres teszteket használunk a normál eloszlású, illetve nem normál eloszlású változókhoz a csoportok másodlagos eredményeinek összehasonlítására.

A betegadatok álnéven bekerülnek egy számítógépes adatbázisba. Az adatkezelést és -elemzést a vezető kutató végzi.