Vergleich eines halbautomatischen geschlossenen Vitrifikationssystems (Gavi®) mit einem manuellen offenen Vitrifikationssystem (Cryotop®) (Gavi)

Einhundertachtzig (n=180) Patientinnen, die mehr als 2 überschüssige 2PN-Oozyten zur Vitrifikation vorlegen, oder Patientinnen, bei denen alle verfügbaren 2PN-Oozyten elektiv vitrifiziert wurden, werden am Tag der Befruchtungskontrolle (Tag 1 nach der Eizellenentnahme) nach dem Zufallsprinzip (1:1) zugeteilt beide Verfahren. In der Studiengruppe werden 2PN-Oozyten unter Verwendung der halbautomatischen GAVI®-Technik zur offenen Vitrifikation/Erwärmung kryokonserviert.

In der Kontrollgruppe werden 2PN-Oozyten unter Verwendung der manuellen offenen Cryotop®-Vitrifikations-/Erwärmungstechnik kryokonserviert.

Die Teilnahme an dieser Studie ist auf einen Zyklus pro Patient begrenzt. Die Studienpopulation besteht aus unfruchtbaren Paaren, die sich einer IVF- oder ICSI-Behandlung unterziehen.

Die Studiendauer beträgt mindestens 6 Monate pro Fach, z.B. die Hauptstudie zum primären Endpunkt 2PN-Überleben wird 6 Monate nach der Randomisierung des letzten Patienten abgeschlossen.

Daten zu Schwangerschaft und Lebendgeburten werden gegebenenfalls in Nachträgen zum Hauptbericht über die klinische Studie gemeldet.

Vor Beginn der Studie verfügen alle Studienzentren über ausreichend geschulte Prüfärzte.

Die Studie wird an mindestens drei Standorten in Deutschland durchgeführt. Die Patientenrekrutierung wird zwischen den Studienzentren kompetitiv sein.

Die Anzahl der Patientinnen, bei denen während des Zeitrahmens der Studiendurchführung eine Oozytenentnahme durchgeführt wurde, besteht aus der Population, die auf Aufnahme untersucht wurde.

Im Allgemeinen kommen Patienten, die die Einschluss- und Ausschlusskriterien erfüllen, für die Aufnahme und Randomisierung in Frage.

Es gibt keine Einschränkungen hinsichtlich des ovariellen Stimulationsprotokolls und der Art oder Dosis des Ovulationsinduktionsmittels (hCG oder GnRH-Agonist). Die Entnahme der Eizellen erfolgt in der Regel 36 ± 2 Stunden nach der hCG-Verabreichung durch transvaginale, ultraschallgesteuerte Follikelpunktion.

Das IVF- oder ICSI-Verfahren wird gemäß der Standardarbeitsanweisung des Prüfzentrums durchgeführt.

Die Befruchtungsprüfung wird am Tag 1 nach der Eizellentnahme (OPU) 17±1 Stunden nach der Befruchtung durchgeführt. Bewertet wird die Anzahl der regelmäßig befruchteten Eizellen, definiert als Eizelle mit 2 Vorkernen und 2 Polkörperchen.

Patientinnen, die an Tag 1 ≥ 2 überschüssige regulär befruchtete Oozyten zur Kryokonservierung vorlegen, und Patientinnen, die sich einer elektiven Kryokonservierung aller verfügbaren 2 PN-Oozyten unterziehen, werden einem der beiden 2 Verfahren zugeteilt.

Die Randomisierung wird am Tag der Befruchtungsprüfung (Tag 1 nach der OPU) durch das Laborpersonal durchgeführt, indem ein nummerierter, undurchsichtiger, versiegelter Umschlag geöffnet wird. Die zufällige Sequenz wird softwaregeneriert und es werden Blöcke verwendet. Alle randomisierten Patienten werden in einem papierbasierten Randomisierungsprotokoll mit Initialen, Geburtsdatum, Studiennummer, Datum, Studiengruppe, Name und Unterschrift des Personals protokolliert. Die Randomisierung wird nach Zentrum und Indikation stratifiziert (überschüssige 2PN-Oozyten-Kryokonservierung vs. elektive Kryokonservierung aller verfügbaren 2PN-Oozyten).

Alle Vitrifikations- und Erwärmungsverfahren werden gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt.

Um die Unterschiede in der Dauer des Vitrifikationsverfahrens zu untersuchen, wird die Zeitspanne zwischen dem Beginn der Vorbereitungen für die Vitrifikation und dem Überführen der Vitrifikationsvorrichtung(en) in den Flüssigstickstofftank zur Lagerung aufgezeichnet.

Abhängig von der Kryo-Embryonen-Transferrichtlinie des Prüfzentrums werden in einem nachfolgenden natürlichen oder programmierten Zyklus vitrifizierte/erwärmte Embryonen ersetzt. Innerhalb des Standorts werden alle Patientinnen demselben Kryoprotokoll zur Vorbereitung des Endometriums unterzogen.

Es gibt keine Vorgaben zum zu verwendenden Protokoll. Die Anzahl der zu erwärmenden 2 PN-Oozyten wird von Fall zu Fall vom Prüfarzt festgelegt. Die Embryokultur wird in jedem Fall bis zum Tag des geplanten Embryotransfers in einzelnen Mikrotröpfchen durchgeführt, die mit Kulturöl bedeckt sind.

Über den Tag des Embryotransfers und die Anzahl der zu transferierenden Embryonen entscheidet der Prüfarzt von Fall zu Fall.

Um die Überlebensrate zu untersuchen, werden erwärmte 2PN-Ooytes sofort und 2 Stunden nach dem Erwärmungsverfahren bewertet. Das Überleben wird durch das Vorhandensein eines intakten Oolemmas und eines regelmäßigen Zytoplasmas 2 Stunden nach dem Erwärmungsverfahren und/oder wenn embryonale Spaltung beobachtet wird, bestätigt.

Um mögliche Unterschiede in der Entwicklung und Qualität von vitrifizierten/erwärmten Embryonen zu untersuchen, werden Teilung und Morphologie wie folgt bewertet:

Tag 2 (44 ± 1 Stunden nach der Befruchtung): Zellzahl, Blastomergröße, Fragmentierungsgrad

Tag 3 (68 ± 1 Stunden nach der Befruchtung): Zellzahl, Blastomerengröße, Fragmentierungsgrad

Tag 5 (116 ± 1 Stunden nach der Befruchtung): Blastozystenstadium (Ausdehnungsgrad), ICM (innere Zellmasse)-Morphologie, TE (Trophektoderm)-Morphologie

Tag 6 (140 ± 1 Stunden nach der Befruchtung): Blastozystenstadium (Ausdehnungsgrad), ICM (innere Zellmasse)-Morphologie, TE (Trophektoderm)-Morphologie

Patientinnen, die schwanger werden, werden einer Ultraschalluntersuchung unterzogen, um die klinische Schwangerschaft in der 6. bis 7. Schwangerschaftswoche zu bestätigen. Nachsorgedaten zur Bestätigung einer bestehenden Schwangerschaft werden telefonisch eingeholt. Die Lebendgeburt einschließlich der zugehörigen Daten wird durch einen Fragebogen erfasst, der von der Patientin ausgefüllt und an die Klinik des Prüfarztes zurückgesendet wird.

Die Analysen werden je nach Bedarf pro Intention-to-treat (ITT) und pro Protokoll (PP) durchgeführt. Die ITT-Population ist die randomisierte Patientenpopulation. Die PP-Population ist die Population von Patienten, die sich einem Auftauversuch unterziehen.

Quelldaten werden papierbasierte Fallberichtsformulare (CRF) sein.

• Studien-ID-Nummer
• Geburtsdatum (weibliche Patientin)
• Alter weiblich (Jahre)
• Alter männlich (Jahre)
• Art des Stimulationsprotokolls (Antagonist/Agonist-Protokoll, kurzes/langes Protokoll)
• Art des verwendeten Gonadotropins (uFSH, rFSH, HMG, Mix, Elonva)
• Gesamtdosis von Gonadotropinen
• Art der Eizellenbefruchtung (IVF, ICSI)
• Datum und Uhrzeit des Triggers
• Art und Dosis des auslösenden Medikaments
• Datum und Uhrzeit der Eizellentnahme
• Datum der Randomisierung
• Studiengruppe
• Datum und Uhrzeit der IVF/ICSI
• Datum und Uhrzeit der Befruchtungskontrolle (2PN-Beurteilung)
• Anzahl befruchteter Eizellen (2PN Eizellen)
• Grund für die Verglasung (Überschuss vs. Wahlpflicht)
• Datum und Uhrzeit der Verglasung (Beginn/Ende)
• Dauer des Verglasungsvorgangs (Minuten)
• Datum und Uhrzeit der Erwärmung (Beginn/Ende)
• Dauer des Erwärmungsvorgangs (Minuten)
• Anzahl erwärmter 2PN-Eizellen
• Anzahl vitaler 2PN-Eizellen
• Anzahl Embryonen von höchster Qualität an Tag 2, Tag 3, Tag 5 und Tag 6 (je nach Tag des Embryotransfers)
• Anzahl übertragener Embryonen
• Anzahl der wiederbelebten Embryonen
• Zyklusausgang (keine Schwangerschaft, positiver hCG-Test)
• Schwangerschaftsverlauf (Abtreibung, Schwangerschaftsabbruch, verschwindender Zwilling etc.)
• Multiplizität (Einling, Zwilling, Drilling)
• Schwangerschaftsausgang (klinische Schwangerschaft, laufende Schwangerschaft, Lebendgeburt)

Deskriptive Statistiken werden durch Analysieren von Median, Mittelwert, n, Standardabweichung, Spannweiten und 95 %-Konfidenzintervallen (KI) durchgeführt. Die Unterschiede zwischen den Armen werden als absolute Differenz mit 95 % KI zusammengefasst. Für das primäre Ergebnis wird ein lineares Modell erstellt, das Behandlungsgruppe, Studienort und Randomisierungsschicht ausschließlich für die Per-Protocol-Population berücksichtigt.

Für sekundäre Endpunkte werden ITT- und/oder PP-Analysen durchgeführt. Eine Multiplizitätskorrektur ist nicht vorgesehen. Parametrische und nicht-parametrische Tests werden für normalverteilte bzw. nicht-normalverteilte Variablen verwendet, um sekundäre Ergebnisse zwischen Gruppen zu vergleichen.

Die Patientendaten werden pseudonymisiert in eine Computerdatenbank eingegeben. Die Datenverwaltung und -analyse wird vom Hauptprüfarzt durchgeführt.