Confronto di un sistema di vetrificazione chiuso semiautomatico (Gavi®) con un sistema di vetrificazione aperto manuale (Cryotop®) (Gavi)

Centottanta (n=180) pazienti che presentano più di 2 PNoocytes in eccesso 2 per la vitrificazione o pazienti che hanno tutti gli ovociti 2PN disponibili vetrificati elettivamente saranno assegnati in modo casuale (1:1) il giorno del controllo della fecondazione (giorno 1 dopo il prelievo degli ovuli) a entrambe le procedure. Nel gruppo di studio, gli ovociti 2PN saranno crioconservati utilizzando la tecnica semi-automatizzata di vitrificazione/riscaldamento aperto GAVI®.

Nel gruppo di controllo, gli ovociti 2PN saranno crioconservati utilizzando la tecnica manuale di vitrificazione/riscaldamento aperto Cryotop®.

La partecipazione a questo studio sarà limitata a un ciclo per paziente. La popolazione in studio è costituita da coppie infertili sottoposte a trattamento di fecondazione in vitro o ICSI.

La durata dello studio sarà di almeno 6 mesi per soggetto, ad es. lo studio principale sull'outcome primario 2PN survival verrà chiuso 6 mesi dopo la randomizzazione dell'ultimo paziente.

I dati relativi alla gravidanza e all'esito del parto vivo saranno riportati in addenda al rapporto dello studio clinico principale, a seconda dei casi.

Prima dell'inizio dello studio, tutti i centri di studio avranno sperimentatori sufficientemente formati.

Lo studio sarà condotto in almeno tre siti in Germania. Il reclutamento dei pazienti sarà competitivo tra i centri di studio.

Il numero di pazienti con prelievo di ovociti durante il periodo di svolgimento dello studio sarà costituito dalla popolazione sottoposta a screening per l'inclusione.

In generale, i pazienti che soddisfano i criteri di inclusione ed esclusione sono idonei per l'inclusione e la randomizzazione.

Non ci sono restrizioni sul protocollo di stimolazione ovarica e sul tipo o sulla dose dell'agente di induzione dell'ovulazione (hCG o GnRH-agonista). Il prelievo dell'ovulo viene solitamente eseguito mediante aspirazione follicolare transvaginale ecoguidata 36 ± 2 ore dopo la somministrazione di hCG.

La procedura di fecondazione in vitro o ICSI viene eseguita secondo la procedura operativa standard del sito dello sperimentatore.

Il controllo della fecondazione viene eseguito il giorno 1 dopo il prelievo degli ovuli (OPU) 17±1 ore dopo l'inseminazione. Viene valutato il numero di ovociti regolarmente fecondati, definiti come ovociti che presentano 2 pronuclei e 2 corpi polari.

I pazienti che presentano ≥ 2 ovociti fecondati regolarmente in eccedenza per la crioconservazione il giorno 1 e i pazienti sottoposti a crioconservazione elettiva di tutti i 2 ovociti PN disponibili sono assegnati a una delle due 2 procedure.

La randomizzazione verrà eseguita il giorno del controllo della fecondazione (giorno 1 dopo l'OPU) dal personale di laboratorio aprendo buste sigillate numerate e opache. La sequenza casuale sarà generata dal software e verranno utilizzati i blocchi. Tutti i pazienti randomizzati verranno registrati in un registro di randomizzazione cartaceo con iniziali, data di nascita, numero dello studio, data, gruppo di studio, nome e firma del personale. La randomizzazione sarà stratificata per Centro e per indicazione (crioconservazione di ovociti 2PN in eccesso vs. crioconservazione elettiva di tutti gli ovociti 2PN disponibili).

Tutte le procedure di vetrificazione e riscaldamento saranno eseguite secondo le istruzioni del produttore.

Al fine di indagare le differenze nella durata della procedura di vetrificazione, verrà registrato l'intervallo di tempo tra l'inizio delle preparazioni necessarie per la vetrificazione e il trasferimento del/i dispositivo/i di vetrificazione nel serbatoio di azoto liquido per la conservazione.

A seconda della politica di trasferimento di embrioni criogenici del sito dello sperimentatore, in un successivo ciclo naturale o programmato verranno sostituiti gli embrioni vitrificati/riscaldati. All'interno del sito, tutte le pazienti saranno sottoposte allo stesso crioprotocollo per la preparazione dell'endometrio.

Non ci sono specifiche sul protocollo da utilizzare. Il numero di 2 ovociti PN da riscaldare sarà deciso dallo sperimentatore caso per caso. La coltura dell'embrione sarà eseguita in tutti i casi in singole microgoccioline ricoperte di olio di coltura fino al giorno del previsto trasferimento dell'embrione.

Il giorno del trasferimento dell'embrione e il numero di embrioni da trasferire saranno decisi dallo sperimentatore caso per caso.

Al fine di studiare il tasso di sopravvivenza, le 2PN-ooytes riscaldate saranno valutate immediatamente e 2 ore dopo la procedura di riscaldamento. La sopravvivenza sarà confermata dalla presenza di un oolemma intatto e di un citoplasma regolare 2 ore dopo la procedura di riscaldamento e/o quando si osserva la scissione embrionale.

Al fine di indagare le potenziali differenze nello sviluppo e nella qualità degli embrioni vetrificati/riscaldati, la scissione e la morfologia saranno valutate come segue:

giorno 2 (44±1 ore dopo l'inseminazione): numero di cellule, dimensione del blastomero, grado di frammentazione

giorno 3 (68±1 ore dopo l'inseminazione): numero di cellule, dimensione del blastomero, grado di frammentazione

giorno 5 (116±1 ore dopo l'inseminazione): stadio di blastocisti (grado di espansione), morfologia ICM (massa cellulare interna), morfologia TE (trofectoderma)

giorno 6 (140±1 ore dopo l'inseminazione): stadio di blastocisti (grado di espansione), morfologia ICM (massa cellulare interna), morfologia TE (trofectoderma)

Le pazienti che concepiscono saranno sottoposte a esame ecografico per confermare la gravidanza clinica a 6-7 settimane di gestazione. I dati di follow-up relativi alla conferma della gravidanza in corso saranno ottenuti telefonicamente. Il parto vivo, compresi i dati correlati, sarà ottenuto da un questonaire per essere completato dal paziente e restituito alla clinica dello sperimentatore.

Le analisi verranno eseguite per intenzione di trattare (ITT) e per protocollo (PP), a seconda dei casi. La popolazione ITT è la popolazione di pazienti randomizzati. La popolazione PP è la popolazione dei pazienti sottoposti a un tentativo di scongelamento.

I dati di origine saranno moduli di segnalazione di casi cartacei (CRF).

• numero identificativo dello studio
• data di nascita (paziente donna)
• età femminile (anni)
• età maschio (anni)
• tipo di protocollo di stimolazione (protocollo Antagonista/Agonista, protocollo corto/lungo)
• tipo di gonadotropina utilizzata (uFSH, rFSH, HMG, mix, Elonva)
• dose totale di gonadotropine
• tipo di inseminazione degli ovociti (FIV, ICSI)
• Data e ora di attivazione
• Tipo e dose del farmaco scatenante
• Data e ora del prelievo degli ovuli
• Data di randomizzazione
• gruppo di studio
• data e ora della fecondazione in vitro/ICSI
• data e ora del controllo della fecondazione (valutazione 2PN)
• numero di ovociti fecondati (ovociti 2PN)
• motivo della vetrificazione (surplus vs. elettivo)
• data e ora della vetrificazione (inizio/fine)
• durata della procedura di vetrificazione (minuti)
• data e ora del riscaldamento (inizio/fine)
• durata della procedura di riscaldamento (minuti)
• numero di ovociti 2PN riscaldati
• numero di ovociti 2PN vitali
• numero di embrioni di alta qualità al giorno 2, giorno 3, giorno 5 e giorno 6 (a seconda del giorno del trasferimento dell'embrione)
• numero di embrioni trasferiti
• numero di embrioni rivitrificati
• esito del ciclo (nessuna gravidanza, test hCG positivo)
• corso della gravidanza (aborto, interruzione, scomparsa del gemello, ecc.)
• Molteplicità (singolo, gemello, terzina)
• esito della gravidanza (gravidanza clinica, gravidanza in corso, parto vivo)

Le statistiche descrittive saranno eseguite analizzando mediana, media, n, deviazione standard, intervalli e intervalli di confidenza al 95% (IC). Le differenze tra i bracci saranno riassunte come differenza assoluta con IC 95%. Per l'esito primario, verrà costruito un modello lineare che tiene conto del gruppo di trattamento, del sito di studio e dello strato di randomizzazione esclusivamente per la popolazione per protocollo.

Per gli esiti secondari verranno eseguite analisi ITT e/o PP. Non è prevista alcuna correzione per la molteplicità. Verranno utilizzati test parametrici e non parametrici per variabili normalmente distribuite e non normalmente distribuite, rispettivamente, per confrontare i risultati secondari tra i gruppi.

I dati del paziente saranno inseriti in un database informatico in modo pseudonimizzato. La gestione e l'analisi dei dati saranno effettuate dal Principal Investigator.