Myo-inositol, D-chiro-inositol et glucomannane dans le SOPK

CONCEPTION DE L'ÉTUDE L'étude est prospective et d'observation. Les critères d'inclusion sont : âge compris entre 18 et 35 ans, surpoids/obésité (IMC > 25 kg/m2), absence de toute autre maladie aiguë intercurrente ou chronique, diagnostic positif de SOPK selon les critères de Rotterdam. Le critère d'exclusion est l'utilisation de médicaments hormonaux ou de médicaments qui affectent la sensibilité à l'insuline (par exemple, les inositols ou la metformine) avant l'inscription.

L'utilisation de myo-inositol (1,75 g), de D-chiro-inositol (0,25 g) et de glucomannane (4,0 g)/die doit précéder le recrutement d'au plus 30 jours. La décision de débuter le traitement doit avoir déjà été prise avant et indépendamment du début de l'étude. L'utilisation d'inositol et de glucomannane doit se faire conformément à la fiche technique. En particulier, le myo-inositol (1,75 g), le D-chiro-inositol (0,25 g) et le glucomannane (4,0 g) devraient être subdivisés en deux doses avant les principaux repas.

MÉTHODOLOGIE 4.1 Visite d'admission (V0) Une fois les critères d'éligibilité vérifiés, l'investigateur informera le patient des objectifs de l'étude lors de la visite initiale (V0) et obtiendra un formulaire écrit de consentement éclairé.

La compilation d'une fiche clinique comprend des informations générales, l'anamnèse, l'IMC, les caractéristiques du cycle menstruel, la quantité de perte menstruelle, le degré d'hirsutisme selon l'indice de Ferriman-Gallwey et le degré d'acné en accord avec l'échelle d'évaluation globale proposé en 2002 par la FDA.

L'investigateur recueillera à partir de la documentation clinique disponible les valeurs de base de glycémie, d'insuline, de triglycérides, de cholestérol avant le début du traitement. De plus, des informations sur l'image échographique seront recueillies en termes de volumes ovariens et de follicules antraux.

Un échantillon de 2 à 3 ml de sang basal sera prélevé pour des évaluations métabolomiques, à l'aide d'un tube rouge de prélèvement sanguin BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) (sans additifs). Après centrifugation, l'échantillon gèlera immédiatement à -80 °C jusqu'au moment de l'analyse.

Le patient sera alors invité à poursuivre le traitement par myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) et glucomannane (4 g) et à se présenter au contrôle après 90 jours (V1).

4.2 Visite de suivi 90e jour (±15) après l'inscription (V1) Au cours de la V1, la patiente sera interrogée sur le traitement régulier et les symptômes cliniques, tout événement indésirable et le déroulement du cycle menstruel.

De plus, tous les patients seront réévalués en ce qui concerne les paramètres anthropométriques, biochimiques et échographiques.

A V1, un deuxième échantillon de sang de 2-3 ml sera prélevé avec les mêmes méthodes décrites ci-dessus.

4.3 Analyse biochimique et métabolomique des échantillons La concentration sanguine de glucose, d'insuline, de triglycérides et de cholestérol est évaluée pour les sujets témoins et pour les cas au départ et après 3 mois de traitement. HOMA-IR si également calculé. Les volumes ovariens et le nombre de follicules antraux ont été évalués par une échographie vaginale réalisée par un gynécologue qualifié.

L'extraction, la purification et la dérivatisation du métabolome sont réalisées avec le kit MetaboPrep GC (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italie) conformément aux instructions du fabricant. Les détails concernant l'extraction des métabolites et le schéma analytique global, y compris les analyses d'échantillons QA/QC, ont été rapportés dans Troisi et al. (2017, 2018)

Gestion des données et analyse statistique À la fin des traitements, la collecte des données de tous les patients est programmée et leur introduction, sous forme codée ou claire, dans une base de données (Excel pour Windows) correctement structurée pour contenir tous les éléments attendus. Afin de respecter la loi sur la confidentialité, les données nominatives sensibles seront remplacées de manière appropriée par les codes numériques attribués à chaque patient, de sorte que de la simple consultation des données, il ne sera pas possible de déduire une référence directe individuelle. De plus, les seules données qui peuvent être extraites de la base de données sont liées à des ensembles agrégés à publier à des fins scientifiques.

Les données sont rapportées en moyenne ± écart type pour les variables continues et en nombre (pourcentage) pour les variables catégorielles.

Les analyses statistiques sont réalisées à l'aide des logiciels Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) et Minitab (Minitab Inc, Pennsylvanie, USA). La distribution normale des données est vérifiée à l'aide du test de Shapiro-Wilks. Étant donné que les données sont normalement distribuées, les enquêteurs utilisent une ANOVA unidirectionnelle avec le test post hoc de Tukey pour les comparaisons intergroupes. La valeur alpha (ɑ) est définie sur 0,05. Le test du chi carré de Pearson est utilisé pour déterminer les différences entre les groupes pour les variables catégorielles.

Pour l'analyse de données multivariées, les données chromatographiques sont tabulées avec un échantillon par ligne et une variable (métabolite) par colonne. Le prétraitement des données consiste à normaliser chaque aire de pic de métabolite à celle de l'étalon interne, suivie d'une transformation logarithmique généralisée et d'une mise à l'échelle des données par mise à l'échelle automatique (moyenne centrée et divisée par l'écart type de chaque variable). PLS-DA est réalisé à l'aide du progiciel statistique R (Foundation for Statistical Computing, Vienne, Autriche). La séparation des classes est réalisée par PLS-DA, qui est une méthode supervisée qui utilise des techniques de régression multivariées pour extraire, via des combinaisons linéaires de variables originales (X), les informations qui peuvent prédire l'appartenance à une classe (Y). La régression PLS est effectuée à l'aide de la fonction plsr incluse dans le package R pls. La classification et la validation croisée sont effectuées à l'aide de la fonction wrapper correspondante incluse dans le package caret. Un test de permutation est effectué pour évaluer l'importance de la discrimination de classe. Dans chaque permutation, un modèle PLS-DA est construit entre les données (X) et les étiquettes de classe permutées (Y) en utilisant le nombre optimal de composants déterminé par validation croisée pour le modèle en fonction de l'affectation de classe d'origine. Les scores d'importance variable dans la projection (VIP) sont calculés pour chaque métabolite. Le score VIP est une somme pondérée des carrés des charges PLS, en tenant compte de la quantité de variation Y expliquée dans chaque dimension. Les métabolites VIP les mieux notés sont comparés en termes de changements de pli (FC). FC est le rapport des abondances moyennes entre deux classes et est une mesure décrivant à quel point une quantité change en passant d'une valeur initiale à une valeur finale.

Les voies métaboliques sont construites à l'aide de l'application MetScape du logiciel Cytoscape.