Myo-inozitol, D-chiro-inozitol és glükomannán PCOS-ben

TANULMÁNY TERVEZÉSE A tanulmány egy prospektív és megfigyelés. A felvételi kritériumok: 18 és 35 év közötti életkor, túlsúly/elhízás (BMI > 25 kg/m2), egyéb akut interkurrens vagy krónikus betegség hiánya, PCOS pozitív diagnózisa a rotterdami kritériumok szerint. A kizárási feltétel az, hogy a beiratkozás előtt hormonális gyógyszereket vagy az inzulinérzékenységet befolyásoló gyógyszereket (pl. inozitolok vagy metformin) használjon.

A mio-inozit (1,75 g), a D-kiro-inozit (0,25 g) és a glükomannán (4,0 g) adagolása nem haladhatja meg a 30 napos felvételt. A kezelés megkezdésére vonatkozó döntést már a vizsgálat megkezdése előtt és attól függetlenül meg kell hozni. Az inozit és a glükomannán felhasználását a műszaki adatlap szerint kell elvégezni. Különösen a mioinozitot (1,75 g), a D-kiroinozitot (0,25 g) és a glükomannánt (4,0 g) várhatóan két adagra kell osztani a főétkezések előtt.

MÓDSZER 4.1 Felvételi vizit (V0) Az alkalmassági kritériumok ellenőrzése után a vizsgáló a kezdeti vizit (V0) során tájékoztatja a pácienst a vizsgálat céljairól, és írásos beleegyező nyilatkozatot kap.

A klinikai kártya összeállítása tartalmazza az általános információkat, anamnézist, a BMI-t, a menstruációs ciklus jellemzőit, a menstruációs veszteség mértékét, a hirsutizmus mértékét a Ferriman-Gallwey index szerint és az akne mértékét a Globális értékelési skála szerint. 2002-ben javasolta az FDA.

A vizsgáló a rendelkezésre álló klinikai dokumentációból összegyűjti a kiindulási glikémia, inzulin, triglicerid, koleszterin értékeket a kezelés megkezdése előtt. Ezen túlmenően az ultrahangos képről információkat gyűjtenek a petefészek térfogatáról és az antrális tüszőkről.

2-3 ml alapvérmintát veszünk a metabolomikus kiértékeléshez, egy BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, Egyesült Királyság) vörös vérvételi cső segítségével (adalékanyag nélkül). A centrifugálás után a minta azonnal -80 °C-ra fagy az analízis időpontjáig.

A páciens ezután felkérést kap, hogy folytassa a mio-inozittal (1,75 g), D-kiro-inozittal (0,25 g) és glükomannánnal (4 g) végzett kezelést, és 90 nap elteltével jelenjen meg a kontrollnál (V1).

4.2 Ellenőrző vizit a beiratkozást követő 90. napon (±15) (V1) A V1 során a beteget kikérdezik a szokásos terápiáról és a klinikai tünetekről, az esetleges nemkívánatos eseményekről és a menstruációs ciklus lefolyásáról.

Ezen túlmenően minden beteget újraértékelnek az antropometriai, biokémiai és ultrahang paraméterek tekintetében.

A V1-nél egy második, 2-3 ml-es vérmintát vesznek a fent leírt módszerekkel.

4.3 Biokémiai és metabolomikai minták elemzése A glükóz, inzulin, trigliceridek és koleszterin vérkoncentrációját a kontroll alanyoknál és az eseteknél a kiinduláskor és 3 hónapos kezelés után értékeljük. HOMA-IR si is számított. A petefészek térfogatát és az antrális tüszőszámot hüvelyi ultrahanggal értékelték, amelyet képzett nőgyógyász végzett.

A metabolom extrakciót, tisztítást és származékképzést a MetaboPrep GC kittel (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Olaszország) végezzük a gyártó utasításai szerint. A metabolitok extrakciójával és az általános analitikai rendszerrel kapcsolatos részleteket, beleértve a minőségbiztosítási/minőségellenőrzési mintaelemzéseket, Troisi et al. (2017, 2018)

Adatkezelés és statisztikai elemzés A kezelések végén ütemezzük az összes beteg adatfelvételét, és annak kódolt vagy áttekinthető formában történő bevezetését egy adatbázisban (Excel for windows) megfelelően strukturáltan, hogy minden elvárt elemet tartalmazzon. Az adatvédelmi törvénynek való megfelelés érdekében az érzékeny névleges adatokat megfelelően helyettesítjük az egyes betegekhez rendelt számkódokkal, így az adatok egyszerű lekérdezéséből nem lehet egyedi közvetlen hivatkozásra következtetni. Ezen túlmenően az adatbázisból kizárólag tudományos céllal publikálandó összesített készletekre lehet kinyerni.

Az adatokat a folytonos változók átlag±szórásaként, a kategorikus változók esetében pedig számot (százalékot) jelentjük.

A statisztikai elemzés a Statistica szoftverrel (StatSoft, Oklahoma, USA) és a Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA) segítségével történik. Az adatok normál eloszlását a Shapiro-Wilks teszt segítségével ellenőrizzük. Mivel az adatok normális eloszlásúak, a vizsgálók egyirányú ANOVA-t használnak a Tukey post hoc teszttel a csoportok közötti összehasonlításhoz. Az alfa (ɑ) értéke 0,05. A Pearson-féle khi-négyzet tesztet a kategorikus változók csoportjai közötti különbségek meghatározására használják.

A többváltozós adatelemzéshez a kromatográfiás adatok soronként egy mintával és oszloponként egy változóval (metabolittal) vannak táblázatba foglalva. Az adatok előkezelése abból áll, hogy minden metabolit csúcsterületét a belső standard értékére normalizálják, majd általánosított logaritmikus transzformációt és adatskálázást végeznek autoskálázással (átlagközpontú és elosztják az egyes változók szórásával). A PLS-DA az R statisztikai szoftvercsomag segítségével történik (Foundation for Statistical Computing, Bécs, Ausztria). Az osztályok szétválasztását a PLS-DA biztosítja, amely egy olyan felügyelt módszer, amely többváltozós regressziós technikákat használ, hogy az eredeti változók (X) lineáris kombinációján keresztül kinyerje azokat az információkat, amelyek megjósolhatják az osztálytagságot (Y). A PLS regressziót az R pls csomagban található plsr függvény segítségével hajtjuk végre. Az osztályozás és a keresztellenőrzés a caret csomagban található megfelelő wrapper funkcióval történik. Permutációs tesztet végzünk az osztálydiszkrimináció jelentőségének felmérésére. Minden permutációban egy PLS-DA modell épül fel az adatok (X) és a permutált osztálycímkék (Y) közé, a komponensek optimális számával, amelyet a modellhez az eredeti osztály-hozzárendelésen alapuló keresztellenőrzéssel határoztak meg. Változó fontosság a kivetítésben (VIP) pontszámokat minden metabolit esetében kiszámítják. A VIP pontszám a PLS-terhelések négyzeteinek súlyozott összege, figyelembe véve az egyes dimenziókban megmagyarázott Y-variáció mértékét. A legmagasabb pontszámot elért VIP metabolitokat a hajtásváltozások (FC) tekintetében hasonlítják össze. Az FC bármely két osztály közötti átlagos abundanciák aránya, és egy mérőszám, amely leírja, hogy egy mennyiség mennyit változik a kezdeti értéktől a végső értékig.

A metabolikus útvonalakat a Cytoscape szoftver MetScape alkalmazásával hozták létre.