Mio-inositol, D-chiro-inositol y Glucomannan en PCOS

DISEÑO DEL ESTUDIO El estudio es prospectivo y de observación. Los criterios de inclusión son: edad entre 18 y 35 años, sobrepeso/obesidad (IMC > 25 kg/m2), ausencia de cualquier otra enfermedad aguda intercurrente o crónica, diagnóstico positivo de SOP según criterios de Rotterdam. El criterio de exclusión es el uso de medicamentos hormonales o medicamentos que afectan la sensibilidad a la insulina (p. ej., inositol o metformina) antes de la inscripción.

El uso de myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) y glucomanano (4,0 g)/die debe preceder al reclutamiento de no más de 30 días. La decisión de iniciar el tratamiento debe haber sido tomada antes e independientemente del inicio del estudio. El uso de inositol y glucomanano debe realizarse de acuerdo con la ficha técnica. En particular, se espera que el mioinositol (1,75 g), el D-quiroinositol (0,25 g) y el glucomanano (4,0 g) se subdividan en dos dosis antes de las comidas principales.

METODOLOGÍA 4.1 Visita de ingreso (V0) Una vez comprobados los criterios de elegibilidad, el investigador informará al paciente sobre los objetivos del estudio durante la visita inicial (V0) y obtendrá el consentimiento informado por escrito.

La elaboración de una ficha clínica incluye información general, anamnesis, IMC, las características del ciclo menstrual, la cantidad de pérdida menstrual, el grado de hirsutismo según el índice de Ferriman-Gallwey y el grado de acné según la escala de evaluación Global propuesto en 2002 por la FDA.

El investigador recogerá de la documentación clínica disponible los valores basales de glucemia, insulina, triglicéridos, colesterol antes del inicio del tratamiento. Además, se recopilará información sobre la imagen de ultrasonido en términos de volúmenes de ovario y folículos antrales.

Se recogerá una muestra de 2-3 ml de sangre basal para evaluaciones metabolómicas, utilizando un tubo rojo de recogida de sangre BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, Reino Unido) (sin aditivos). Después de la centrifugación, la muestra se congelará inmediatamente a -80 °C hasta el momento del análisis.

A continuación, se invitará al paciente a continuar el tratamiento con mioinositol (1,75 g), D-quiroinositol (0,25 g) y glucomanano (4 g), morir y presentarse a control a los 90 días (V1).

4.2 Visita de seguimiento 90 días (±15) después de la inscripción (V1) Durante la V1, se entrevistará a la paciente sobre el tratamiento regular y los síntomas clínicos, cualquier evento adverso y el curso del ciclo menstrual.

Además, todos los pacientes serán reevaluados en cuanto a los parámetros antropométricos, bioquímicos y ecográficos.

En V1 se recogerá una segunda muestra de sangre de 2-3 ml con los mismos métodos descritos anteriormente.

4.3 Análisis de muestras bioquímicas y metabolómicas Se evalúa la concentración sanguínea de glucosa, insulina, triglicéridos y colesterol para sujetos control y para casos al inicio y después de 3 meses de tratamiento. HOMA-IR si también se calcula. Los volúmenes de ovario y el conteo de folículos antrales fueron evaluados por un ultrasonido vaginal realizado por un ginecólogo capacitado.

La extracción, purificación y derivatización del metaboloma se lleva a cabo con el kit MetaboPrep GC (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italia) según las instrucciones del fabricante. Los detalles sobre la extracción de metabolitos y el esquema analítico general, incluidos los análisis de muestras QA/QC, se informaron en Troisi et al. (2017, 2018)

Gestión de Datos y Análisis Estadístico Al final de los tratamientos se programa la recogida de datos de todos los pacientes y la introducción de los mismos, en forma codificada o clara, en una base de datos (Excel para windows) debidamente estructurada para contener todos los ítems esperados. Para dar cumplimiento a la ley de privacidad, los datos nominales sensibles serán oportunamente sustituidos por los códigos numéricos asignados a cada paciente, de manera que de la simple consulta de los datos no se podrá deducir ninguna referencia directa individual. Además, los únicos datos que se pueden extraer de la base de datos están relacionados con conjuntos agregados que se publicarán con fines científicos.

Los datos se informan como media ± desviación estándar para variables continuas y número (porcentaje) para variables categóricas.

Los análisis estadísticos se realizan utilizando el software Statistica (StatSoft, Oklahoma, EE. UU.) y Minitab (Minitab Inc, Pensilvania, EE. UU.). La distribución normal de los datos se verifica utilizando la prueba de Shapiro-Wilks. Dado que los datos se distribuyen normalmente, los investigadores utilizan ANOVA unidireccional con la prueba post hoc de Tukey para las comparaciones entre grupos. El valor alfa (ɑ) se establece en 0,05. La prueba de chi-cuadrado de Pearson se utiliza para determinar las diferencias entre grupos para las variables categóricas.

Para el análisis de datos multivariados, los datos cromatográficos se tabulan con una muestra por fila y una variable (metabolito) por columna. El pretratamiento de datos consiste en normalizar el área de pico de cada metabolito a la del estándar interno, seguido de una transformación logarítmica generalizada y escalado de datos mediante escalado automático (centrado en la media y dividido por la desviación estándar de cada variable). PLS-DA se realiza utilizando el paquete de software estadístico R (Fundación para la Computación Estadística, Viena, Austria). La separación de clases se logra mediante PLS-DA, que es un método supervisado que utiliza técnicas de regresión multivariante para extraer, mediante combinaciones lineales de variables originales (X), la información que puede predecir la pertenencia a una clase (Y). La regresión PLS se realiza utilizando la función plsr incluida en el paquete R pls. La clasificación y la validación cruzada se realizan utilizando la función contenedora correspondiente incluida en el paquete de intercalación. Se realiza una prueba de permutación para evaluar la importancia de la discriminación de clases. En cada permutación, se construye un modelo PLS-DA entre los datos (X) y las etiquetas de clase permutadas (Y) usando el número óptimo de componentes determinado por validación cruzada para el modelo basado en la asignación de clase original. Las puntuaciones de Importancia Variable en la Proyección (VIP) se calculan para cada metabolito. La puntuación VIP es una suma ponderada de los cuadrados de las cargas de PLS, teniendo en cuenta la cantidad de variación Y explicada en cada dimensión. Los metabolitos VIP con la puntuación más alta se comparan en términos de cambios de pliegue (FC). FC es la relación de las abundancias medias entre dos clases y es una medida que describe cuánto cambia una cantidad al pasar de un valor inicial a un valor final.

Las rutas metabólicas se construyen utilizando la aplicación MetScape del software Cytoscape.