Myo-inositol, D-chiro-inositol a glukomannan u PCOS

NÁVRH STUDIE Studie je prospektivní a pozorovací. Kritéria pro zařazení jsou: věk mezi 18 a 35 lety, nadváha/obezita (BMI > 25 kg/m2), nepřítomnost jakéhokoli jiného akutního interkurentního nebo chronického onemocnění, pozitivní diagnóza PCOS podle Rotterdamských kritérií. Vylučovacím kritériem je užívání hormonálních léků nebo léků, které ovlivňují citlivost na inzulín (např. inositoly nebo metformin) před zařazením.

Použití myo-inositolu (1,75 g), D-chiro-inositolu (0,25 g) a glukomananu (4,0 g)/kus nesmí předcházet náboru více než 30 dnů. Rozhodnutí o zahájení léčby musí být učiněno již před zahájením studie a nezávisle na něm. Použití inositolu a glukomananu musí probíhat podle technického listu. Zejména se očekává, že myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) a glukomannan (4,0 g) budou rozděleny do dvou dávek před hlavními jídly.

METODOLOGIE 4.1 Vstupní návštěva (V0) Jakmile byla zkontrolována kritéria způsobilosti, zkoušející informuje pacienta o cílech studie během úvodní návštěvy (V0) a získá písemný informovaný souhlas.

Sestavení klinické karty zahrnuje obecné informace, anamnézu, BMI, charakteristiku menstruačního cyklu, množství menstruačních ztrát, stupeň hirsutismu podle Ferriman-Gallweyho indexu a stupeň akné v souladu s Globální hodnotící škálou navržený v roce 2002 FDA.

Před zahájením léčby zkoušející shromáždí z dostupné klinické dokumentace výchozí hodnoty glykémie, inzulinu, triglyceridů a cholesterolu. Kromě toho budou shromážděny informace o ultrazvukovém snímku, pokud jde o objemy vaječníků a antrální folikuly.

Vzorek 2-3 ml bazální krve bude odebrán pro metabolomické hodnocení pomocí červené zkumavky pro odběr krve BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) (bez přísad). Po odstředění vzorek okamžitě zmrzne na -80 °C až do doby analýzy.

Pacient bude poté vyzván, aby pokračoval v léčbě myo-inositolem (1,75 g), D-chiro-inositolem (0,25 g) a glukomananem (4 g) zemřel a aby se dostavil ke kontrole po 90 dnech (V1).

4.2 Následná návštěva 90. den (±15) po zařazení (V1) Během V1 bude pacientka dotazována na pravidelnou terapii a klinické příznaky, případné nežádoucí příhody a průběh menstruačního cyklu.

Dále budou všichni pacienti přehodnoceni z hlediska antropometrických, biochemických a ultrazvukových parametrů.

Ve V1 bude odebrán druhý vzorek krve o objemu 2-3 ml stejnými metodami popsanými výše.

4.3 Analýza biochemických a metabolomických vzorků Koncentrace glukózy, inzulínu, triglyceridů a cholesterolu v krvi se hodnotí u kontrolních subjektů au případů na začátku a po 3 měsících léčby. HOMA-IR si také vypočítal. Objemy vaječníků a počet antrálních folikulů byly hodnoceny vaginálním ultrazvukem, který provedl vyškolený gynekolog.

Extrakce, čištění a derivatizace metabolomu se provádí pomocí soupravy MetaboPrep GC kit (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Itálie) podle pokynů výrobce. Podrobnosti týkající se extrakce metabolitů a celkového analytického schématu, včetně analýz vzorků QA/QC, byly uvedeny v Troisi et al. (2017, 2018)

Správa dat a statistická analýza Na konci léčby je naplánován sběr dat všech pacientů a jejich zavedení, v kódované nebo přehledné formě, do databáze (Excel pro Windows) vhodně strukturované tak, aby obsahovala všechny očekávané položky. V souladu se zákonem o ochraně osobních údajů budou citlivé nominální údaje vhodně nahrazeny číselnými kódy přidělenými každému pacientovi, takže z pouhého nahlédnutí do údajů nebude možné vyvodit žádný individuální přímý odkaz. Kromě toho jediné údaje, které lze z databáze získat, se týkají agregovaných souborů, které mají být zveřejněny pro vědecké účely.

Data jsou uvedena jako průměr ± standardní odchylka pro spojité proměnné a počet (procenta) pro kategorické proměnné.

Statistické analýzy se provádějí pomocí softwaru Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) a Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Normální rozložení dat je ověřeno pomocí Shapiro-Wilksova testu. Vzhledem k tomu, že data jsou normálně distribuována, výzkumníci používají jednosměrnou ANOVA s Tukeyovým post hoc testem pro srovnání mezi skupinami. Hodnota alfa (ɑ) je nastavena na 0,05. Pearsonův chí-kvadrát test se používá k určení rozdílů mezi skupinami pro kategorické proměnné.

Pro multivariační analýzu dat jsou chromatografická data tabulkována s jedním vzorkem na řádek a jednou proměnnou (metabolitem) na sloupec. Předúprava dat spočívá v normalizaci plochy píku každého metabolitu na plochu vnitřního standardu s následnou zobecněnou logaritmickou transformací a škálováním dat pomocí automatického škálování (středně na střední hodnotu a vydělte ji směrodatnou odchylkou každé proměnné). PLS-DA se provádí pomocí statistického softwarového balíku R (Foundation for Statistical Computing, Vídeň, Rakousko). Oddělení tříd je dosaženo pomocí PLS-DA, což je kontrolovaná metoda, která využívá techniky vícerozměrné regrese k extrakci, prostřednictvím lineárních kombinací původních proměnných (X), informací, které mohou předpovídat příslušnost ke třídě (Y). PLS regrese se provádí pomocí funkce plsr obsažené v balíčku R pls. Klasifikace a křížová validace se provádí pomocí odpovídající funkce wrapper, která je součástí balíčku stříšky. Pro posouzení významnosti třídní diskriminace se provádí permutační test. V každé permutaci je mezi daty (X) a permutovanými štítky tříd (Y) postaven model PLS-DA s použitím optimálního počtu komponent určených křížovou validací pro model na základě původního přiřazení třídy. Pro každý metabolit se vypočítají skóre variabilní důležitosti v projekci (VIP). VIP skóre je vážený součet druhých mocnin zatížení PLS, přičemž se bere v úvahu množství vysvětlených Y-variací v každé dimenzi. VIP metabolity s nejvyšším skóre se porovnávají z hlediska násobných změn (FC). FC je poměr středních abundancí mezi jakýmikoli dvěma třídami a je mírou popisující, jak moc se veličina mění od počáteční po konečnou hodnotu.

Metabolické dráhy jsou konstruovány pomocí aplikace MetScape softwaru Cytoscape.