Mio-inositol, D-chiro-inositol e Glucomannan na SOP

DESENHO DO ESTUDO O estudo é prospectivo e observacional. Os critérios de inclusão são: idade entre 18 e 35 anos, sobrepeso/obesidade (IMC > 25 kg/m2), ausência de qualquer outra doença aguda intercorrente ou crônica, diagnóstico positivo de SOP segundo os critérios de Rotterdam. O critério de exclusão é o uso de medicamentos hormonais ou drogas que afetam a sensibilidade à insulina (por exemplo, inositóis ou metformina) antes da inscrição.

O uso de mio-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) e glucomanano (4,0 g)/die deve preceder o recrutamento de no máximo 30 dias. A decisão de iniciar o tratamento já deve ter sido tomada antes e independentemente do início do estudo. O uso de inositol e glucomanano deve ser feito de acordo com a ficha técnica. Em particular, espera-se que mio-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) e glucomanano (4,0 g) sejam subdivididos em duas doses antes das refeições principais.

METODOLOGIA 4.1 Visita de admissão (V0) Uma vez verificados os critérios de elegibilidade, o investigador informará o paciente sobre os objetivos do estudo durante a visita inicial (V0) e obterá o termo de consentimento livre e esclarecido por escrito.

A compilação de um cartão clínico inclui informações gerais, anamnese, IMC, as características do ciclo menstrual, a quantidade de perda menstrual, o grau de hirsutismo de acordo com o índice de Ferriman-Gallwey e o grau de acne de acordo com a escala de avaliação global proposto em 2002 pela FDA.

O investigador coletará da documentação clínica disponível os valores basais de glicemia, insulina, triglicerídeos e colesterol antes do início do tratamento. Além disso, serão coletadas informações da imagem ultrassonográfica em termos de volumes ovarianos e folículos antrais.

Uma amostra de 2-3 ml de sangue basal será coletada para avaliações metabolômicas, usando um tubo vermelho de coleta de sangue BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, Reino Unido) (sem aditivos). Após a centrifugação, a amostra congelará imediatamente a -80 °C até o momento da análise.

O paciente será então convidado a continuar o tratamento com mio-inositol (1,75 g), D-quiro-inositol (0,25 g) e glucomanano (4 g) morrer e apresentar-se para controle após 90 dias (V1).

4.2 Consulta de acompanhamento 90º dia (±15) após a inscrição (V1) Durante a V1, a paciente será entrevistada sobre a terapia regular e os sintomas clínicos, quaisquer eventos adversos e o curso do ciclo menstrual.

Além disso, todos os pacientes serão reavaliados quanto aos parâmetros antropométricos, bioquímicos e ultrassonográficos.

Em V1, uma segunda amostra de sangue de 2-3 ml será coletada com os mesmos métodos descritos acima.

4.3 Análise de amostras bioquímicas e metabolômicas A concentração sanguínea de glicose, insulina, triglicerídeos e colesterol é avaliada para indivíduos controle e para casos no início e após 3 meses de tratamento. HOMA-IR si também calculado. Os volumes ovarianos e a contagem de folículos antrais foram avaliados por ultrassonografia vaginal realizada por ginecologista treinado.

A extração, purificação e derivatização do metaboloma são realizadas com o kit MetaboPrep GC (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Itália) de acordo com as instruções do fabricante. Detalhes sobre a extração de metabólitos e o esquema analítico geral, incluindo análises de amostra QA/QC, foram relatados em Troisi et al. (2017, 2018)

Gestão de Dados e Análise Estatística No final dos tratamentos é agendada a recolha de dados de todos os doentes e a introdução dos mesmos, de forma codificada ou clara, numa base de dados (Excel para windows) devidamente estruturada para conter todos os itens esperados. Para cumprimento da lei de privacidade, os dados nominais sensíveis serão devidamente substituídos pelos códigos numéricos atribuídos a cada paciente, pelo que da simples consulta dos dados não será possível deduzir qualquer referência direta individual. Além disso, os únicos dados que podem ser extraídos do banco de dados estão relacionados a conjuntos agregados a serem publicados para fins científicos.

Os dados são relatados como média±desvio padrão para variáveis ​​contínuas e número (porcentagem) para variáveis ​​categóricas.

A análise estatística é realizada usando o software Statistica (StatSoft, Oklahoma, EUA) e Minitab (Minitab Inc, Pensilvânia, EUA). A distribuição normal dos dados é verificada por meio do teste de Shapiro-Wilks. Como os dados são normalmente distribuídos, os investigadores usam ANOVA de uma via com o teste post hoc de Tukey para comparações entre grupos. O valor alfa (ɑ) é definido como 0,05. O teste qui-quadrado de Pearson é usado para determinar diferenças entre grupos para as variáveis ​​categóricas.

Para análise de dados multivariados, os dados cromatográficos são tabulados com uma amostra por linha e uma variável (metabólito) por coluna. O pré-tratamento dos dados consiste em normalizar cada área de pico do metabólito para o padrão interno, seguido de transformação logarítmica generalizada e escalonamento de dados por escalonamento automático (centrado na média e dividido pelo desvio padrão de cada variável). O PLS-DA é realizado usando o pacote de software estatístico R (Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria). A separação de classes é realizada por PLS-DA, que é um método supervisionado que utiliza técnicas de regressão multivariada para extrair, por meio de combinações lineares de variáveis ​​originais (X), as informações que podem predizer o pertencimento à classe (Y). A regressão PLS é realizada usando a função plsr incluída no pacote R pls. A classificação e a validação cruzada são realizadas usando a função wrapper correspondente incluída no pacote de cursor. Um teste de permutação é realizado para avaliar a significância da discriminação de classe. Em cada permutação, um modelo PLS-DA é construído entre os dados (X) e os rótulos de classe permutados (Y) usando o número ideal de componentes determinado pela validação cruzada para o modelo com base na atribuição de classe original. As pontuações Variáveis ​​de Importância na Projeção (VIP) são calculadas para cada metabólito. A pontuação VIP é uma soma ponderada dos quadrados das cargas PLS, levando em consideração a quantidade de variação Y explicada em cada dimensão. Os metabólitos VIP de pontuação mais alta são comparados em termos de alterações de dobra (FC). FC é a razão das abundâncias médias entre quaisquer duas classes e é uma medida que descreve o quanto uma quantidade muda de um valor inicial para um valor final.

As vias metabólicas são construídas usando o aplicativo MetScape do software Cytoscape.