Myo-inositolo, D-chiro-inositolo e glucomannano nella PCOS

PROGETTAZIONE DELLO STUDIO Lo studio è una prospettiva e un'osservazione. I criteri di inclusione sono: età compresa tra 18 e 35 anni, sovrappeso/obesità (BMI > 25 kg/m2), assenza di qualsiasi altra malattia acuta intercorrente o cronica, diagnosi positiva di PCOS secondo i criteri di Rotterdam. Il criterio di esclusione è l'uso di farmaci ormonali o farmaci che influenzano la sensibilità all'insulina (ad es. Inositoli o metformina) prima dell'arruolamento.

L'uso di mio-inositolo (1,75 g), D-chiro-inositolo (0,25 g) e glucomannano (4,0 g)/die deve precedere l'assunzione di non più di 30 giorni. La decisione di iniziare il trattamento deve essere già stata presa prima e indipendentemente dall'inizio dello studio. L'utilizzo di inositolo e glucomannano deve avvenire secondo la scheda tecnica. In particolare, il mio-inositolo (1,75 g), il D-chiro-inositolo (0,25 g) e il glucomannano (4,0 g) dovrebbero essere suddivisi in due dosi prima dei pasti principali.

METODOLOGIA 4.1 Visita di ricovero (V0) Una volta verificati i criteri di eleggibilità, lo sperimentatore informerà il paziente sugli obiettivi dello studio durante la visita iniziale (V0) e otterrà un modulo di consenso informato scritto.

La compilazione di una scheda clinica comprende le informazioni generali, l'anamnesi, il BMI, le caratteristiche del ciclo mestruale, l'entità della perdita mestruale, il grado di irsutismo secondo l'indice di Ferriman-Gallwey e il grado di acne in accordo alla scala di valutazione globale proposto nel 2002 dalla FDA.

Lo sperimentatore raccoglierà dalla documentazione clinica disponibile i valori basali di glicemia, insulina, trigliceridi, colesterolo prima dell'inizio del trattamento. Inoltre, verranno raccolte informazioni sul quadro ecografico in termini di volumi ovarici e follicoli antrali.

Un campione di 2-3 ml di sangue basale sarà raccolto per le valutazioni metabolomiche, utilizzando una provetta rossa per prelievo di sangue BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) (senza additivi). Dopo la centrifugazione, il campione si congelerà immediatamente a -80 °C fino al momento dell'analisi.

Il paziente verrà quindi invitato a continuare il trattamento con mio-inositolo (1,75 g), D-chiro-inositolo (0,25 g) e glucomannano (4 g) die e a presentarsi al controllo dopo 90 giorni (V1).

4.2 Visita di follow-up 90° giorno (±15) dopo l'arruolamento (V1) Durante il V1 la paziente sarà intervistata sulla terapia regolare e sui sintomi clinici, eventuali eventi avversi e l'andamento del ciclo mestruale.

Inoltre, tutti i pazienti saranno rivalutati per quanto riguarda i parametri antropometrici, biochimici ed ecografici.

In V1 verrà prelevato un secondo campione di sangue di 2-3 ml con le stesse modalità sopra descritte.

4.3 Analisi dei campioni biochimici e metabolomici La concentrazione ematica di glucosio, insulina, trigliceridi e colesterolo viene valutata per i soggetti di controllo e per i casi al basale e dopo 3 mesi di trattamento. Anche HOMA-IR si calcola. I volumi ovarici e la conta dei follicoli antrali sono stati valutati mediante ecografia vaginale eseguita da un ginecologo esperto.

L'estrazione, la purificazione e la derivatizzazione del metaboloma vengono eseguite con il kit MetaboPrep GC (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italia) secondo le istruzioni del produttore. I dettagli riguardanti l'estrazione dei metaboliti e lo schema analitico generale, comprese le analisi dei campioni QA/QC, sono stati riportati in Troisi et al. (2017, 2018)

Gestione Dati e Analisi Statistica Al termine dei trattamenti è prevista la raccolta dei dati di tutti i pazienti e l'inserimento degli stessi, in forma codificata o in chiaro, in un database (Excel per windows) opportunamente strutturato per contenere tutte le voci previste. Al fine di ottemperare alla normativa sulla privacy, i dati nominativi sensibili saranno opportunamente sostituiti dai codici numerici assegnati a ciascun paziente, in modo che dalla semplice consultazione dei dati non sia possibile dedurre alcun riferimento diretto individuale. Inoltre, gli unici dati che possono essere estratti dal database sono relativi a insiemi aggregati da pubblicare per scopi scientifici.

I dati sono riportati come media ± deviazione standard per le variabili continue e numero (percentuale) per le variabili categoriali.

Le analisi statistiche vengono eseguite utilizzando il software Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) e Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). La normale distribuzione dei dati è verificata mediante il test di Shapiro-Wilks. Poiché i dati sono normalmente distribuiti, i ricercatori utilizzano ANOVA unidirezionale con il test post hoc di Tukey per i confronti tra gruppi. Il valore alfa (ɑ) è impostato su 0,05. Il test del chi quadrato di Pearson viene utilizzato per determinare le differenze tra i gruppi per le variabili categoriali.

Per l'analisi dei dati multivariata, i dati cromatografici sono tabulati con un campione per riga e una variabile (metabolita) per colonna. Il pretrattamento dei dati consiste nella normalizzazione di ogni area di picco del metabolita a quella dello standard interno seguita dalla trasformazione logaritmica generalizzata e dal ridimensionamento dei dati mediante ridimensionamento automatico (centrato sulla media e dividendolo per la deviazione standard di ciascuna variabile). PLS-DA viene eseguito utilizzando il pacchetto software statistico R (Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria). La separazione delle classi è ottenuta mediante PLS-DA, che è un metodo supervisionato che utilizza tecniche di regressione multivariata per estrarre, tramite combinazioni lineari di variabili originali (X), le informazioni che possono prevedere l'appartenenza alla classe (Y). La regressione PLS viene eseguita utilizzando la funzione plsr inclusa nel pacchetto R pls. La classificazione e la convalida incrociata vengono eseguite utilizzando la funzione wrapper corrispondente inclusa nel pacchetto caret. Viene eseguito un test di permutazione per valutare l'importanza della discriminazione di classe. In ogni permutazione, viene costruito un modello PLS-DA tra i dati (X) e le etichette di classe permutate (Y) utilizzando il numero ottimale di componenti determinato dalla convalida incrociata per il modello basato sull'assegnazione di classe originale. I punteggi VIP (Variable Importance in Projection) vengono calcolati per ciascun metabolita. Il punteggio VIP è una somma ponderata dei quadrati dei caricamenti PLS, tenendo conto della quantità di variazione Y spiegata in ciascuna dimensione. I metaboliti VIP con il punteggio più alto vengono confrontati in termini di cambi di piega (FC). FC è il rapporto delle abbondanze medie tra due classi qualsiasi ed è una misura che descrive quanto cambia una quantità passando da un valore iniziale a uno finale.

Le vie metaboliche sono costruite utilizzando l'applicazione MetScape del software Cytoscape.