Myo-Inositol, D-Chiro-Inositol und Glucomannan bei PCOS

STUDIENDESIGN Die Studie ist eine prospektive Beobachtung. Die Einschlusskriterien sind: Alter zwischen 18 und 35 Jahren, Übergewicht/Adipositas (BMI > 25 kg/m2), Fehlen einer anderen akuten interkurrenten oder chronischen Erkrankung, eine positive PCOS-Diagnose gemäß den Rotterdam-Kriterien. Ausschlusskriterium ist die Verwendung von hormonellen Medikamenten oder Medikamenten, die die Insulinsensitivität beeinflussen (z. B. Inositole oder Metformin) vor der Einschreibung.

Die Anwendung von Myo-Inositol (1,75 g), D-Chiro-Inositol (0,25 g) und Glucomannan (4,0 g)/Die darf der Rekrutierung nicht länger als 30 Tage vorangehen. Die Entscheidung zum Beginn der Behandlung muss bereits vor und unabhängig vom Studienbeginn getroffen worden sein. Die Verwendung von Inositol und Glucomannan muss gemäß dem technischen Datenblatt erfolgen. Insbesondere Myo-Inositol (1,75 g), D-Chiro-Inositol (0,25 g) und Glucomannan (4,0 g) sollten vor den Hauptmahlzeiten auf zwei Dosen aufgeteilt werden.

METHODIK 4.1 Aufnahmevisite (V0) Nachdem die Eignungskriterien überprüft wurden, informiert der Prüfarzt den Patienten während der Erstvisite (V0) über die Ziele der Studie und holt eine schriftliche Einverständniserklärung ein.

Die Erstellung eines Klinischen Ausweises umfasst allgemeine Informationen, Anamnese, BMI, die Charakteristika des Menstruationszyklus, die Höhe des Menstruationsverlustes, den Grad des Hirsutismus nach dem Ferriman-Gallwey-Index und den Grad der Akne in Übereinstimmung mit der globalen Bewertungsskala 2002 von der FDA vorgeschlagen.

Der Prüfarzt wird aus der verfügbaren klinischen Dokumentation die Grundwerte für Glykämie, Insulin, Triglyzeride und Cholesterin vor Beginn der Behandlung erheben. Darüber hinaus werden Informationen zum Ultraschallbild in Bezug auf Eierstockvolumen und Antralfollikel gesammelt.

Eine Probe von 2–3 ml Basalblut wird für metabolomische Auswertungen unter Verwendung eines roten Blutentnahmeröhrchens von BD Vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, Vereinigtes Königreich) (ohne Zusatzstoffe) entnommen. Nach dem Zentrifugieren wird die Probe bis zum Zeitpunkt der Analyse sofort auf -80 °C eingefroren.

Der Patient wird dann aufgefordert, die Behandlung mit Myo-Inositol (1,75 g), D-Chiro-Inositol (0,25 g) und Glucomannan (4 g) fortzusetzen und nach 90 Tagen zur Kontrolle zu erscheinen (V1).

4.2 Nachsorgeuntersuchung 90. Tag (±15) nach Einschreibung (V1) Während der V1 wird die Patientin zur regelmäßigen Therapie und zu klinischen Symptomen, eventuellen Nebenwirkungen und zum Verlauf des Menstruationszyklus befragt.

Darüber hinaus werden alle Patienten hinsichtlich der anthropometrischen, biochemischen und Ultraschallparameter erneut evaluiert.

Bei V1 wird eine zweite Blutprobe von 2-3 ml mit den gleichen oben beschriebenen Methoden entnommen.

4.3 Analyse biochemischer und metabolomischer Proben Die Blutkonzentration von Glukose, Insulin, Triglyzeriden und Cholesterin wird bei Kontrollpersonen und bei Fällen zu Studienbeginn und nach 3 Behandlungsmonaten bewertet. HOMA-IR wird ebenfalls berechnet. Eierstockvolumina und Antrumfollikelzahl wurden durch einen vaginalen Ultraschall, der von einem ausgebildeten Gynäkologen durchgeführt wurde, bewertet.

Die Metabolom-Extraktion, Aufreinigung und Derivatisierung wird mit dem MetaboPrep GC-Kit (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italien) gemäß den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Einzelheiten zur Metabolitenextraktion und zum gesamten Analyseschema, einschließlich QA/QC-Probenanalysen, wurden in Troisi et al. (2017, 2018)

Datenverwaltung und statistische Analyse Am Ende der Behandlungen ist die Datensammlung aller Patienten geplant und die Eingabe derselben in verschlüsselter oder übersichtlicher Form in eine Datenbank (Excel für Windows), die entsprechend strukturiert ist, um alle erwarteten Elemente zu enthalten. Um dem Datenschutzgesetz zu entsprechen, werden die sensiblen Nominaldaten in geeigneter Weise durch die jedem Patienten zugeordneten Zahlencodes ersetzt, so dass aus der einfachen Abfrage der Daten kein direkter individueller Bezug abgeleitet werden kann. Darüber hinaus beziehen sich die einzigen Daten, die aus der Datenbank extrahiert werden können, auf aggregierte Datensätze, die für wissenschaftliche Zwecke veröffentlicht werden sollen.

Die Daten werden als Mittelwert ± Standardabweichung für kontinuierliche Variablen und Zahl (Prozent) für kategoriale Variablen angegeben.

Die statistische Analyse erfolgt mit der Software Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) und Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Die Normalverteilung der Daten wird mit dem Shapiro-Wilks-Test verifiziert. Da die Daten normalverteilt sind, verwenden die Forscher die einfache ANOVA mit dem Tukey-Post-Hoc-Test für Vergleiche zwischen den Gruppen. Der Alpha (ɑ)-Wert wird auf 0,05 gesetzt. Der Chi-Quadrat-Test von Pearson wird verwendet, um Unterschiede zwischen Gruppen für die kategorialen Variablen zu bestimmen.

Für die multivariate Datenanalyse werden die chromatographischen Daten mit einer Probe pro Reihe und einer Variablen (Metabolit) pro Spalte tabellarisch dargestellt. Die Datenvorbehandlung besteht aus der Normalisierung jeder Metaboliten-Peakfläche auf die des internen Standards, gefolgt von einer verallgemeinerten logarithmischen Transformation und Datenskalierung durch Autoskalierung (mittelwertzentriert und dividiert durch die Standardabweichung jeder Variablen). PLS-DA wird mit dem statistischen Softwarepaket R (Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria) durchgeführt. Die Klassentrennung wird durch PLS-DA erreicht, eine überwachte Methode, die multivariate Regressionstechniken verwendet, um über lineare Kombinationen ursprünglicher Variablen (X) die Informationen zu extrahieren, die die Klassenzugehörigkeit (Y) vorhersagen können. Die PLS-Regression wird mit der plsr-Funktion durchgeführt, die im R pls-Paket enthalten ist. Die Klassifizierung und Kreuzvalidierung wird mit der entsprechenden Wrapper-Funktion durchgeführt, die im Caret-Paket enthalten ist. Um die Signifikanz der Klassendiskriminierung zu beurteilen, wird ein Permutationstest durchgeführt. Bei jeder Permutation wird ein PLS-DA-Modell zwischen den Daten (X) und den permutierten Klassenetiketten (Y) aufgebaut, wobei die optimale Anzahl von Komponenten verwendet wird, die durch Kreuzvalidierung für das Modell basierend auf der ursprünglichen Klassenzuweisung bestimmt wird. Variable Importance in Projection (VIP)-Scores werden für jeden Metaboliten berechnet. Der VIP-Score ist eine gewichtete Summe von Quadraten der PLS-Ladungen unter Berücksichtigung des Betrags der erklärten Y-Variation in jeder Dimension. Die VIP-Metaboliten mit der höchsten Punktzahl werden in Bezug auf Faltungsänderungen (Fold Changes, FC) verglichen. FC ist das Verhältnis der mittleren Häufigkeiten zwischen zwei beliebigen Klassen und ein Maß, das beschreibt, wie stark sich eine Menge von einem Anfangs- zu einem Endwert ändert.

Die Stoffwechselwege werden unter Verwendung der MetScape-Anwendung der Software Cytoscape konstruiert.