Myo-inositoli, D-kiro-inositoli ja glukomannaani PCOS:ssä

TUTKIMUKSEN SUUNNITTELU Tutkimus on prospektiivinen ja havainto. Osallistumiskriteerit ovat: ikä 18–35 vuotta, ylipaino/lihavuus (BMI > 25 kg/m2), minkään muun akuutin rinnakkaissairauden tai kroonisen sairauden puuttuminen, positiivinen PCOS-diagnoosi Rotterdamin kriteerien mukaan. Poissulkemiskriteerinä on hormonaalisten lääkkeiden tai insuliiniherkkyyteen vaikuttavien lääkkeiden (esim. inositolien tai metformiinin) käyttö ennen ilmoittautumista.

Myo-inositolin (1,75 g), D-kiro-inositolin (0,25 g) ja glukomannaanin (4,0 g) käyttö kuoliaa kohti saa olla ennen rekrytointia enintään 30 päivää. Päätös hoidon aloittamisesta on oltava tehty jo ennen tutkimuksen aloittamista ja siitä riippumatta. Inositolin ja glukomannaanin käytön tulee tapahtua teknisen tiedotteen mukaisesti. Erityisesti myo-inositoli (1,75 g), D-kiro-inositoli (0,25 g) ja glukomannaani (4,0 g) odotetaan jaettavan kahteen annokseen ennen pääateriaa.

MENETELMÄT 4.1 Pääsykäynti (V0) Kun kelpoisuuskriteerit on tarkistettu, tutkija tiedottaa potilaalle tutkimuksen tavoitteista ensimmäisellä käynnillä (V0) ja hankkii kirjallisen suostumuslomakkeen.

Kliinisen kortin koonti sisältää yleistiedot, anamneesin, BMI:n, kuukautiskierron ominaisuudet, kuukautisten katoamisen määrän, hirsutismin asteen Ferriman-Gallwey-indeksin mukaan ja aknen asteen maailmanlaajuisen arviointiasteikon mukaisesti FDA ehdotti vuonna 2002.

Tutkija kerää käytettävissä olevasta kliinisestä dokumentaatiosta lähtötason glykemia-, insuliini-, triglyseridi- ja kolesteroliarvot ennen hoidon aloittamista. Lisäksi ultraäänikuvasta kerätään tietoa munasarjojen tilavuudesta ja antrumirakkuloista.

2–3 ml:n näyte perusverta otetaan metabolomisia arvioita varten käyttämällä punaista BD-vacutainer-verenkeräysputkea (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) (ilman lisäaineita). Sentrifugoinnin jälkeen näyte jäätyy välittömästi -80 °C:seen analyysiin asti.

Potilasta pyydetään sitten jatkamaan hoitoa myo-inositolilla (1,75 g), D-kiro-inositolilla (0,25 g) ja glukomannaanilla (4 g) ja hänen tulee tulla kontrolliin 90 päivän kuluttua (V1).

4.2 Seurantakäynti 90. päivä (±15) ilmoittautumisen jälkeen (V1) V1:n aikana potilasta haastatellaan säännöllisestä hoidosta ja kliinisistä oireista, mahdollisista haittatapahtumista ja kuukautiskierron kulusta.

Lisäksi kaikki potilaat arvioidaan uudelleen antropometristen, biokemiallisten ja ultraääniparametrien suhteen.

Kohdassa V1 otetaan toinen 2-3 ml:n verinäyte samoilla edellä kuvatuilla menetelmillä.

4.3 Biokemiallisten ja metabolomisten näytteiden analyysi Veren glukoosi-, insuliini-, triglyseridi- ja kolesterolipitoisuus arvioidaan kontrollihenkilöillä ja tapauksilla lähtötilanteessa ja 3 kuukauden hoidon jälkeen. HOMA-IR si myös laskettu. Munasarjojen tilavuudet ja antrualisten follikkelien määrä arvioitiin emättimen ultraäänellä, jonka suoritti koulutettu gynekologi.

Metabolomien uutto, puhdistus ja derivatisointi suoritetaan MetaboPrep GC -sarjalla (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italia) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Yksityiskohdat metaboliitin uuttamisesta ja yleisestä analyysikaaviosta, mukaan lukien QA/QC-näyteanalyysit, on raportoitu julkaisussa Troisi et ai. (2017, 2018)

Tiedonhallinta ja tilastollinen analyysi Hoidon päätteeksi ajoitetaan kaikkien potilaiden tiedonkeruu ja niiden käyttöönotto koodatussa tai selkeässä muodossa tietokantaan (Excel for windows), joka on asianmukaisesti rakennettu sisältämään kaikki odotetut kohteet. Yksityisyyslain noudattamiseksi arkaluontoiset nimelliset tiedot korvataan asianmukaisesti kullekin potilaalle annetuilla numerokoodeilla, jotta yksinkertaisen tietojen tarkastelun perusteella ei ole mahdollista päätellä yksittäistä suoraa viittausta. Lisäksi ainoat tiedot, jotka tietokannasta voidaan poimia, liittyvät tieteellisiin tarkoituksiin julkaistaviin aggregoituihin sarjoihin.

Tiedot raportoidaan jatkuvien muuttujien keskiarvona ± keskihajonnana ja kategoristen muuttujien lukuina (prosenttiosuutena).

Tilastollinen analyysi suoritetaan käyttäen Statistica-ohjelmistoa (StatSoft, Oklahoma, USA) ja Minitabia (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Datan normaali jakautuminen varmistetaan Shapiro-Wilks-testillä. Koska tiedot jakautuvat normaalisti, tutkijat käyttävät yksisuuntaista ANOVAa Tukeyn post hoc -testin kanssa ryhmien välisiin vertailuihin. Alfa (ɑ) arvoksi on asetettu 0,05. Pearsonin khin neliötestiä käytetään määrittämään erot ryhmien välillä kategorisille muuttujille.

Monimuuttujatietojen analyysiä varten kromatografiset tiedot on taulukoitu yhdellä näytteellä riviä kohden ja yhdellä muuttujalla (aineenvaihdunta) saraketta kohden. Tietojen esikäsittely koostuu kunkin metaboliitin huippualueen normalisoimisesta sisäisen standardin pinta-alaksi, minkä jälkeen suoritetaan yleistetty log-muunnos ja tietojen skaalaus autoskaalauksella (keskiarvokeskitetty ja se jaetaan kunkin muuttujan keskihajonnalla). PLS-DA suoritetaan tilastoohjelmistolla R (Foundation for Statistical Computing, Wien, Itävalta). Luokkaerottelu saavutetaan PLS-DA:lla, joka on valvottu menetelmä, joka käyttää monimuuttujaregressiotekniikoita poimimaan alkuperäisten muuttujien (X) lineaaristen yhdistelmien avulla tiedot, jotka voivat ennustaa luokkajäsenyyden (Y). PLS-regressio suoritetaan käyttämällä plsr-funktiota, joka sisältyy R pls -pakettiin. Luokittelu ja ristiinvalidointi suoritetaan käyttämällä vastaavaa caret-pakettiin sisältyvää kääretoimintoa. Luokkasyrjinnän merkityksen arvioimiseksi suoritetaan permutaatiotesti. Jokaisessa permutaatiossa datan (X) ja permutoitujen luokkatunnisteiden (Y) väliin rakennetaan PLS-DA-malli käyttämällä optimaalista komponenttien lukumäärää, joka määritetään mallin ristiinvalidaatiolla alkuperäisen luokkamäärityksen perusteella. Variable Importance in Projection (VIP) -pisteet lasketaan kullekin metaboliitille. VIP-pisteet on PLS-kuormituksen neliöiden painotettu summa, jossa otetaan huomioon selitetyn Y-vaihtelun määrä kussakin ulottuvuudessa. Parhaiten pisteytyneitä VIP-metaboliitteja verrataan kertamuutoksilla (FC). FC on kahden luokan keskimääräisten runsaiden suhde ja mitta, joka kuvaa kuinka paljon määrä muuttuu alkuarvosta lopulliseen arvoon.

Aineenvaihduntareitit on rakennettu Cytoscape-ohjelmiston MetScape-sovelluksella.