Myo-inositol, D-chiro-inositol og Glucomannan i PCOS

STUDIEDESIGN Studien er en prospektiv og observasjon. Inklusjonskriteriene er: alder mellom 18 og 35 år, overvekt/fedme (BMI > 25 kg/m2), fravær av annen akutt interkurrent eller kronisk sykdom, en positiv diagnose av PCOS i henhold til Rotterdam-kriterier. Eksklusjonskriterium er bruk av hormonelle medisiner eller legemidler som påvirker insulinfølsomheten (f.eks. inositoler eller metformin) før påmelding.

Bruk av myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4,0 g)/die må ikke gå mer enn 30 dager før rekrutteringen. Beslutningen om å starte behandling må allerede være tatt før og uavhengig av studiestart. Bruk av inositol og glucomannan skal skje i henhold til teknisk datablad. Spesielt forventes myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4,0 g) å bli delt inn i to doser før hovedmåltider.

METODOLOGI 4.1 Innleggsbesøk (V0) Når kvalifikasjonskriteriene er kontrollert, vil utrederen informere pasienten om målene for studien under det første besøket (V0) og innhente skriftlig informert samtykke.

Sammenstillingen av et klinisk kort inkluderer generell informasjon, anamnese, BMI, egenskapene til menstruasjonssyklusen, mengden av menstruasjonstap, graden av hirsutisme i henhold til Ferriman-Gallwey-indeksen og graden av akne i samsvar med den globale evalueringsskalaen foreslått i 2002 av FDA.

Utforskeren vil samle inn baseline glykemi, insulin, triglyserider, kolesterolverdier fra den tilgjengelige kliniske dokumentasjonen før behandlingen starter. Videre vil informasjon om ultralydbildet samles inn når det gjelder ovarievolum og antralfollikler.

En prøve på 2-3 ml basalblod vil bli samlet inn for metabolomiske evalueringer, ved hjelp av en BD-vakutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) blodprøvetakingsrør (uten tilsetningsstoffer). Etter sentrifugering vil prøven umiddelbart fryse til -80 °C frem til analysetidspunktet.

Pasienten vil da bli invitert til å fortsette behandlingen med myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4 g) dø og møte opp til kontroll etter 90 dager (V1).

4.2 Oppfølgingsbesøk 90. ​​dag (±15) etter innmelding (V1) I løpet av V1 vil pasienten bli intervjuet om den vanlige behandlingen og kliniske symptomer, eventuelle uønskede hendelser og menstruasjonssyklusen.

Videre vil alle pasienter bli revurdert med hensyn til antropometriske, biokjemiske og ultralydparametre.

Ved V1 vil en andre blodprøve på 2-3 ml bli tatt med de samme metodene beskrevet ovenfor.

4.3 Biokjemisk og metabolomisk prøveanalyse Blodkonsentrasjon av glukose, insulin, triglyserider og kolesterol vurderes for kontrollpersoner og for tilfeller ved baseline og etter 3 måneders behandling. HOMA-IR si også beregnet. Ovarievolumer og antralfollikler ble evaluert ved en vaginal ultralyd utført av en utdannet gynekolog.

Metabolomekstraksjon, rensing og derivatisering utføres med MetaboPrep GC-settet (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italia) i henhold til produsentens instruksjoner. Detaljer angående metabolittekstraksjon og det overordnede analyseskjemaet, inkludert QA/QC prøveanalyser, ble rapportert i Troisi et al. (2017, 2018)

Databehandling og statistisk analyse Ved slutten av behandlingen planlegges datainnsamlingen for alle pasienter og introduksjonen av det samme, i kodet eller tydelig form, i en database (Excel for Windows) som er hensiktsmessig strukturert for å inneholde alle de forventede elementene. For å overholde personvernloven vil de sensitive nominelle dataene på passende måte erstattes av de numeriske kodene som er tildelt hver pasient, slik at det fra den enkle konsultasjonen av dataene ikke vil være mulig å utlede noen individuell direkte referanse. Dessuten er de eneste dataene som kan trekkes ut fra databasen relatert til aggregerte sett som skal publiseres for vitenskapelige formål.

Data rapporteres som gjennomsnitt±standardavvik for kontinuerlige variabler og antall (prosent) for kategoriske variabler.

Statistisk analyse utføres ved hjelp av programvaren Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) og Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Normal distribusjon av data verifiseres ved hjelp av Shapiro-Wilks-testen. Siden dataene er normalfordelt, bruker etterforskerne enveis ANOVA med Tukey post hoc-testen for sammenligninger mellom grupper. Alfa-verdien (ɑ) er satt til 0,05. Pearsons kjikvadrattest brukes til å bestemme forskjeller mellom grupper for de kategoriske variablene.

For multivariat dataanalyse er de kromatografiske dataene tabellert med én prøve per rad og én variabel (metabolitt) per kolonne. Dataforbehandling består i å normalisere hvert metabolitttoppområde til det for den interne standarden etterfulgt av generalisert loggtransformasjon og dataskalering ved autoskalering (middelsentrert og delt det med standardavvik for hver variabel). PLS-DA utføres ved hjelp av den statistiske programvarepakken R (Foundation for Statistical Computing, Wien, Østerrike). Klasseseparasjon oppnås ved PLS-DA, som er en overvåket metode som bruker multivariate regresjonsteknikker for å trekke ut, via lineære kombinasjoner av originale variabler (X), informasjonen som kan forutsi klassemedlemskap (Y). PLS-regresjon utføres ved å bruke plsr-funksjonen inkludert i R pls-pakken. Klassifisering og kryssvalidering utføres ved å bruke den tilsvarende innpakningsfunksjonen som er inkludert i caret-pakken. En permutasjonstest utføres for å vurdere betydningen av klassediskriminering. I hver permutasjon bygges en PLS-DA-modell mellom dataene (X) og de permuterte klasseetikettene (Y) ved å bruke det optimale antallet komponenter bestemt av kryssvalidering for modellen basert på den opprinnelige klassetildelingen. Variable Importance in Projection (VIP)-skårer beregnes for hver metabolitt. VIP-poengsummen er en vektet sum av kvadrater av PLS-belastningene, tatt i betraktning mengden av forklart Y-variasjon i hver dimensjon. De høyest scorende VIP-metabolittene sammenlignes når det gjelder fold endringer (FC). FC er forholdet mellom gjennomsnittlig overflod mellom to klasser og er et mål som beskriver hvor mye en mengde endres fra en initial til en endelig verdi.

De metabolske veiene er konstruert ved hjelp av MetScape-applikasjonen av programvaren Cytoscape.