Myo-inositol, D-chiro-inositol och Glucomannan i PCOS

STUDIEDESIGN Studien är en prospektiv och observation. Inklusionskriterierna är: ålder mellan 18 och 35 år, övervikt/fetma (BMI > 25 kg/m2), frånvaro av någon annan akut interkurrent eller kronisk sjukdom, en positiv diagnos av PCOS enligt Rotterdams kriterier. Uteslutningskriterium är att använda hormonella mediciner eller läkemedel som påverkar insulinkänsligheten (t.ex. inositoler eller metformin) före inskrivningen.

Användningen av myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) och glukomannan (4,0 g)/dö får inte föregå rekryteringen på mer än 30 dagar. Beslutet att påbörja behandling måste redan ha fattats före och oberoende av studiestart. Användningen av inositol och glukomannan ska ske enligt det tekniska databladet. I synnerhet förväntas myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) och glukomannan (4,0 g) delas upp i två doser före huvudmåltider.

METOD 4.1 Intagningsbesök (V0) När behörighetskriterierna har kontrollerats kommer utredaren att informera patienten om syftet med studien under det första besöket (V0) och erhålla ett skriftligt informerat samtycke.

Sammanställningen av ett kliniskt kort inkluderar allmän information, anamnes, BMI, menstruationscykelns egenskaper, mängden menstruationsförlust, graden av hirsutism enligt Ferriman-Gallwey-indexet och graden av akne i enlighet med den globala utvärderingsskalan föreslog 2002 av FDA.

Utredaren kommer från den tillgängliga kliniska dokumentationen att samla in baslinjevärdena för glykemi, insulin, triglycerider och kolesterol innan behandlingen påbörjas. Vidare kommer information om ultraljudsbilden att samlas in vad gäller äggstocksvolymer och antralfolliklar.

Ett prov på 2-3 ml basalt blod kommer att samlas in för metabolomiska utvärderingar, med hjälp av en BD-vakutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, Storbritannien) blodinsamlingsrör (utan tillsatser). Efter centrifugering fryser provet omedelbart till -80 °C fram till analystillfället.

Patienten kommer sedan att uppmanas att fortsätta behandlingen med myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) och glukomannan (4 g) dör och att infinna sig för kontroll efter 90 dagar (V1).

4.2 Uppföljningsbesök 90:e dagen (±15) efter inskrivning (V1) Under V1 kommer patienten att intervjuas om den vanliga behandlingen och kliniska symtom, eventuella biverkningar och menstruationscykelns förlopp.

Vidare kommer alla patienter att omvärderas med avseende på antropometriska, biokemiska och ultraljudsparametrar.

Vid V1 kommer ett andra blodprov på 2-3 ml att tas med samma metoder som beskrivs ovan.

4.3 Biokemiska och metabolomiska provanalyser Blodkoncentrationen av glukos, insulin, triglycerider och kolesterol utvärderas för kontrollpersoner och för fall vid baslinjen och efter 3 månaders behandling. HOMA-IR si också beräknat. Äggstocksvolymer och antalet antrala folliklar utvärderades med ett vaginalt ultraljud utfört av en utbildad gynekolog.

Metabolomextraktion, rening och derivatisering utförs med MetaboPrep GC-kit (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italien) enligt tillverkarens instruktioner. Detaljer om metabolitextraktion och det övergripande analysschemat, inklusive QA/QC-provanalyser, rapporterades i Troisi et al. (2017, 2018)

Datahantering och statistisk analys I slutet av behandlingarna schemaläggs datainsamlingen för alla patienter och införandet av densamma, i kodad eller tydlig form, i en databas (Excel för Windows) lämpligt strukturerad för att innehålla alla förväntade objekt. För att följa integritetslagen kommer de känsliga nominella uppgifterna på lämpligt sätt att ersättas av de numeriska koder som tilldelats varje patient, så att det från den enkla konsultationen av uppgifterna inte kommer att vara möjligt att härleda någon individuell direkt referens. Dessutom är de enda data som kan extraheras från databasen relaterade till aggregerade uppsättningar som ska publiceras för vetenskapliga ändamål.

Data rapporteras som medel±standardavvikelse för kontinuerliga variabler och antal (procent) för kategoriska variabler.

Statistisk analys utförs med hjälp av programvaran Statistica (StatSoft, Oklahoma, USA) och Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Normal distribution av data verifieras med Shapiro-Wilks test. Eftersom data är normalfördelade använder utredarna enkelriktad ANOVA med Tukey post hoc-test för jämförelser mellan grupper. Alfavärdet (ɑ) är satt till 0,05. Pearsons chi-kvadrattest används för att bestämma skillnader mellan grupper för de kategoriska variablerna.

För multivariat dataanalys tabelleras kromatografidata med ett prov per rad och en variabel (metabolit) per kolumn. Dataförbehandling består av att normalisera varje metabolittopparea till den för den interna standarden följt av generaliserad logtransformation och dataskalning genom autoskalning (medelcentrerad och dividera den med standardavvikelsen för varje variabel). PLS-DA utförs med hjälp av det statistiska mjukvarupaketet R (Foundation for Statistical Computing, Wien, Österrike). Klassseparation uppnås med PLS-DA, som är en övervakad metod som använder multivariat regressionsteknik för att via linjära kombinationer av ursprungliga variabler (X) extrahera informationen som kan förutsäga klasstillhörighet (Y). PLS-regression utförs med hjälp av plsr-funktionen som ingår i R pls-paketet. Klassificering och korsvalidering utförs med hjälp av motsvarande omslagsfunktion som ingår i caret-paketet. Ett permutationstest utförs för att bedöma betydelsen av klassdiskriminering. I varje permutation byggs en PLS-DA-modell mellan data (X) och de permuterade klassetiketterna (Y) med användning av det optimala antalet komponenter som bestäms av korsvalidering för modellen baserat på den ursprungliga klasstilldelningen. Variable Importance in Projection (VIP)-poäng beräknas för varje metabolit. VIP-poängen är en viktad summa av kvadrater av PLS-laddningarna, med hänsyn till mängden förklarad Y-variation i varje dimension. VIP-metaboliterna med högst poäng jämförs i termer av veckförändringar (FC). FC är förhållandet mellan medelöverflöden mellan två valfria klasser och är ett mått som beskriver hur mycket en kvantitet förändras från ett initialt till ett slutligt värde.

De metaboliska vägarna konstrueras med MetScape-applikationen av programvaran Cytoscape.