Myo-inositol, D-chiro-inositol og Glucomannan i PCOS

STUDIEDESIGN Undersøgelsen er en prospektiv og observation. Inklusionskriterierne er: alder mellem 18 og 35 år, overvægt/fedme (BMI > 25 kg/m2), fravær af anden akut interkurrent eller kronisk sygdom, en positiv diagnose af PCOS i henhold til Rotterdam-kriterierne. Eksklusionskriterium er brug af hormonelle medicin eller lægemidler, der påvirker insulinfølsomheden (f.eks. inositoler eller metformin) før tilmelding.

Anvendelse af myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4,0 g)/die må ikke gå mere end 30 dage forud for rekrutteringen. Beslutningen om at starte behandlingen skal allerede være truffet før og uafhængigt af studiestart. Anvendelse af inositol og glucomannan skal ske i henhold til det tekniske datablad. Især myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4,0 g) forventes at blive underopdelt i to doser før hovedmåltider.

METODOLOGI 4.1 Indlæggelsesbesøg (V0) Når berettigelseskriterierne er blevet kontrolleret, vil investigator informere patienten om formålet med undersøgelsen under det indledende besøg (V0) og indhente en skriftlig informeret samtykkeerklæring.

Kompileringen af ​​et klinisk kort inkluderer generel information, anamnese, BMI, karakteristika for menstruationscyklussen, mængden af ​​menstruationstab, graden af ​​hirsutisme i henhold til Ferriman-Gallwey-indekset og graden af ​​acne i overensstemmelse med den globale evalueringsskala foreslået i 2002 af FDA.

Investigatoren vil indsamle baseline-glykæmi, insulin, triglycerider, kolesterolværdier fra den tilgængelige kliniske dokumentation før behandlingens start. Endvidere vil der blive indsamlet information om ultralydsbilledet med hensyn til ovarievolumener og antralfollikler.

En prøve på 2-3 ml basalblod vil blive opsamlet til metabolomiske evalueringer ved hjælp af en BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, UK) blodprøvetagning rødt rør (uden tilsætningsstoffer). Efter centrifugering vil prøven straks fryse til -80 °C indtil analysetidspunktet.

Patienten vil derefter blive inviteret til at fortsætte behandlingen med myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) og glucomannan (4 g) dø og møde op til kontrol efter 90 dage (V1).

4.2 Opfølgningsbesøg 90. dag (±15) efter indskrivning (V1) I løbet af V1 vil patienten blive interviewet om den almindelige terapi og kliniske symptomer, eventuelle uønskede hændelser og forløbet af menstruationscyklussen.

Endvidere vil alle patienter blive revurderet med hensyn til de antropometriske, biokemiske og ultralydsparametre.

Ved V1 vil en anden blodprøve på 2-3 ml blive opsamlet med de samme metoder som beskrevet ovenfor.

4.3 Biokemisk og metabolomisk prøveanalyse Blodkoncentrationen af ​​glucose, insulin, triglycerider og kolesterol evalueres for kontrolpersoner og for tilfælde ved baseline og efter 3 måneders behandling. HOMA-IR si også beregnet. Æggestokkevolumener og antralfollikler blev evalueret ved en vaginal ultralyd udført af en uddannet gynækolog.

Metabolomekstraktion, oprensning og derivatisering udføres med MetaboPrep GC-kittet (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italien) i henhold til producentens instruktioner. Detaljer vedrørende metabolitekstraktion og det overordnede analytiske skema, herunder QA/QC prøveanalyser, blev rapporteret i Troisi et al. (2017, 2018)

Datastyring og statistisk analyse Ved afslutningen af ​​behandlingerne planlægges dataindsamlingen for alle patienter, og introduktionen af ​​samme, i kodet eller klar form, i en database (Excel for Windows), der er passende struktureret til at indeholde alle de forventede elementer. For at overholde privatlivsloven vil de følsomme nominelle data passende blive erstattet af de numeriske koder, der er tildelt hver patient, således at det ud fra den simple konsultation af dataene ikke vil være muligt at udlede en individuel direkte reference. Desuden er de eneste data, der kan udtrækkes fra databasen, relateret til aggregerede sæt, der skal offentliggøres til videnskabelige formål.

Data rapporteres som middel±standardafvigelse for kontinuerte variable og antal (procent) for kategoriske variable.

Statistisk analyse udføres ved hjælp af Statistica-software (StatSoft, Oklahoma, USA) og Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, USA). Normal distribution af data verificeres ved hjælp af Shapiro-Wilks testen. Da dataene er normalt fordelt, bruger efterforskerne envejs ANOVA med Tukey post hoc testen til sammenligninger mellem grupper. Alfa-værdien (ɑ) er sat til 0,05. Pearsons chi-kvadrat-test bruges til at bestemme forskelle mellem grupper for de kategoriske variable.

For multivariat dataanalyse er de kromatografiske data tabuleret med en prøve pr. række og en variabel (metabolit) pr. kolonne. Dataforbehandling består i at normalisere hvert metabolitspidsareal til det for den interne standard efterfulgt af generaliseret logtransformation og dataskalering ved autoskalering (middelcentreret og divideret med standardafvigelsen for hver variabel). PLS-DA udføres ved hjælp af den statistiske softwarepakke R (Foundation for Statistical Computing, Wien, Østrig). Klasseadskillelse opnås ved PLS-DA, som er en overvåget metode, der bruger multivariate regressionsteknikker til, via lineære kombinationer af originale variable (X), at udtrække den information, der kan forudsige klassemedlemskab (Y). PLS-regression udføres ved hjælp af plsr-funktionen inkluderet i R pls-pakken. Klassificering og krydsvalidering udføres ved hjælp af den tilsvarende indpakningsfunktion, der er inkluderet i caret-pakken. En permutationstest udføres for at vurdere betydningen af ​​klassediskrimination. I hver permutation bygges en PLS-DA-model mellem dataene (X) og de permuterede klasseetiketter (Y) ved hjælp af det optimale antal komponenter bestemt ved krydsvalidering for modellen baseret på den oprindelige klassetildeling. Variable Importance in Projection (VIP)-scorer beregnes for hver metabolit. VIP-scoren er en vægtet sum af kvadrater af PLS-belastningerne, idet der tages højde for mængden af ​​forklaret Y-variation i hver dimension. De højest scorende VIP-metabolitter sammenlignes med hensyn til foldændringer (FC). FC er forholdet mellem de gennemsnitlige mængder mellem to klasser og er et mål, der beskriver, hvor meget en mængde ændrer sig fra en initial til en endelig værdi.

De metaboliske veje er konstrueret ved hjælp af MetScape-applikationen af ​​softwaren Cytoscape.