Myo-inositol, D-chiro-inositol en glucomannan in PCOS

ONDERZOEKSOPZET Het onderzoek is een prospectieve en observatie. De inclusiecriteria zijn: leeftijd tussen 18 en 35 jaar, overgewicht/obesitas (BMI > 25 kg/m2), afwezigheid van enige andere acute bijkomende of chronische ziekte, een positieve diagnose PCOS volgens Rotterdamse criteria. Uitsluitingscriterium is het gebruik van hormonale medicijnen of medicijnen die de insulinegevoeligheid beïnvloeden (bijv. inositols of metformine) vóór inschrijving.

Het gebruik van myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) en glucomannan (4,0 g)/die mag niet langer dan 30 dagen voorafgaan aan de rekrutering. De beslissing om met de behandeling te beginnen moet al zijn genomen vóór en onafhankelijk van de start van het onderzoek. Het gebruik van inositol en glucomannan dient plaats te vinden volgens de technische fiche. Met name myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) en glucomannan (4,0 g) zullen naar verwachting worden onderverdeeld in twee doses vóór de hoofdmaaltijden.

METHODOLOGIE 4.1 Opnamebezoek (V0) Zodra de geschiktheidscriteria zijn gecontroleerd, zal de onderzoeker de patiënt informeren over de doelstellingen van het onderzoek tijdens het eerste bezoek (V0) en een schriftelijk toestemmingsformulier verkrijgen.

De samenstelling van een klinische kaart bevat algemene informatie, anamnese, BMI, de kenmerken van de menstruatiecyclus, de hoeveelheid menstruatieverlies, de mate van hirsutisme volgens de Ferriman-Gallwey-index en de mate van acne in overeenstemming met de Globale evaluatieschaal in 2002 voorgesteld door de FDA.

De onderzoeker verzamelt uit de beschikbare klinische documentatie de basiswaarden van glykemie, insuline, triglyceriden en cholesterol vóór de start van de behandeling. Verder zal informatie over het echobeeld worden verzameld in termen van ovariumvolumes en antrale follikels.

Een monster van 2-3 ml basaal bloed zal worden verzameld voor metabolomische evaluaties, met behulp van een BD vacutainer (Becton Dickinson, Oxfordshire, VK) bloedafname rode buis (zonder toevoegingen). Na centrifugeren bevriest het monster onmiddellijk tot -80 °C tot het moment van analyse.

De patiënt wordt vervolgens uitgenodigd om de behandeling met myo-inositol (1,75 g), D-chiro-inositol (0,25 g) en glucomannan (4 g) voort te zetten en na 90 dagen ter controle te verschijnen (V1).

4.2 Vervolgbezoek 90e dag (±15) na inschrijving (V1) Tijdens het V1 wordt de patiënt geïnterviewd over de reguliere therapie en klinische symptomen, eventuele bijwerkingen en het verloop van de menstruatiecyclus.

Bovendien zullen alle patiënten opnieuw worden geëvalueerd met betrekking tot de antropometrische, biochemische en ultrasone parameters.

Bij V1 wordt een tweede bloedmonster van 2-3 ml afgenomen met dezelfde methoden als hierboven beschreven.

4.3 Analyse van biochemische en metabolomische monsters De bloedconcentratie van glucose, insuline, triglyceriden en cholesterol wordt geëvalueerd voor controlepersonen en voor gevallen bij baseline en na 3 maanden behandeling. HOMA-IR si ook berekend. Eierstokvolumes en het aantal antrale follikels werden geëvalueerd door een vaginale echografie uitgevoerd door een getrainde gynaecoloog.

Metabolome extractie, zuivering en derivatisering wordt uitgevoerd met de MetaboPrep GC-kit (Theoreo srl, Montecorvino Pugliano [SA], Italië) volgens de instructies van de fabrikant. Details met betrekking tot metabolietextractie en het algehele analytische schema, inclusief QA/QC-monsteranalyses, werden gerapporteerd in Troisi et al. (2017, 2018)

Gegevensbeheer en statistische analyse Aan het einde van de behandelingen wordt de gegevensverzameling van alle patiënten gepland en de invoer ervan, in gecodeerde of duidelijke vorm, in een database (Excel voor Windows) die op de juiste manier is gestructureerd om alle verwachte items te bevatten. Om te voldoen aan de privacywetgeving zullen de gevoelige nominale gegevens op passende wijze worden vervangen door de cijfercodes die aan elke patiënt worden toegekend, zodat uit de eenvoudige raadpleging van de gegevens geen enkele directe verwijzing naar het individu zal kunnen worden afgeleid. Bovendien hebben de enige gegevens die uit de database kunnen worden gehaald, betrekking op geaggregeerde sets die voor wetenschappelijke doeleinden worden gepubliceerd.

Gegevens worden gerapporteerd als gemiddelde ± standaarddeviatie voor continue variabelen en aantal (percentage) voor categorische variabelen.

Statistische analyses worden uitgevoerd met behulp van Statistica-software (StatSoft, Oklahoma, VS) en Minitab (Minitab Inc, Pennsylvania, VS). Normale verdeling van gegevens wordt geverifieerd met behulp van de Shapiro-Wilks-test. Omdat de gegevens normaal verdeeld zijn, gebruiken de onderzoekers one-way ANOVA met de Tukey post hoc-test voor vergelijkingen tussen groepen. De alpha (ɑ) waarde is ingesteld op 0,05. De chi-kwadraattoets van Pearson wordt gebruikt om verschillen tussen groepen voor de categorische variabelen te bepalen.

Voor multivariate gegevensanalyse worden de chromatografische gegevens getabelleerd met één monster per rij en één variabele (metaboliet) per kolom. Gegevensvoorbehandeling bestaat uit het normaliseren van elk metabolietpiekgebied naar dat van de interne standaard, gevolgd door gegeneraliseerde logtransformatie en gegevensschaling door automatische schaling (gemiddeld gecentreerd en gedeeld door standaarddeviatie van elke variabele). PLS-DA wordt uitgevoerd met behulp van het statistische softwarepakket R (Foundation for Statistical Computing, Wenen, Oostenrijk). Klassenscheiding wordt bereikt door PLS-DA, een gecontroleerde methode die multivariate regressietechnieken gebruikt om via lineaire combinaties van oorspronkelijke variabelen (X) de informatie te extraheren die het lidmaatschap van een klasse (Y) kan voorspellen. PLS-regressie wordt uitgevoerd met behulp van de plsr-functie die is opgenomen in het R pls-pakket. Classificatie en kruisvalidatie worden uitgevoerd met behulp van de corresponderende wrapper-functie die is opgenomen in het caret-pakket. Een permutatietest wordt uitgevoerd om de betekenis van klassendiscriminatie te beoordelen. In elke permutatie wordt een PLS-DA-model gebouwd tussen de gegevens (X) en de gepermuteerde klasselabels (Y) met behulp van het optimale aantal componenten bepaald door kruisvalidatie voor het model op basis van de oorspronkelijke klassetoewijzing. Variabele Belang in Projectie (VIP) scores worden berekend voor elke metaboliet. De VIP-score is een gewogen som van de kwadraten van de PLS-ladingen, rekening houdend met de hoeveelheid verklaarde Y-variatie in elke dimensie. De best scorende VIP-metabolieten worden vergeleken in termen van fold changes (FC). FC is de verhouding van de gemiddelde abundanties tussen twee willekeurige klassen en is een maatstaf die beschrijft hoeveel een grootheid verandert van een begin- naar een eindwaarde.

De metabole routes worden geconstrueerd met behulp van de MetScape-toepassing van de software Cytoscape.