A natív és a készülékkel összefüggő agyhártyagyulladás korai diagnózisa

A vizsgálat célja Egy új, kórokozó-specifikus biomarker D-laktát analitikai és klinikai teljesítményének (érzékenysége, specificitása, pozitív és negatív prediktív értéke, pontossága) értékelése a cerebrospinalis folyadékban (CSF) a natív és a készülékkel végzett diagnosztika és kezelés monitorozása céljából. - társuló agyhártyagyulladás. A CSF D-laktát teljesítményét a jelenleg használt hagyományos CSF-tenyészetekkel és biomarkerekkel fogják összehasonlítani, a fertőzés (natív és eszközzel összefüggő agyhártyagyulladás) szabványos definíciós kritériumai alapján.

Konkrét célok

• Cél 1. A D-laktát teszt teljesítményének meghatározása a készülékkel összefüggő meningitis és natív meningitis diagnosztizálására sorozatosan vett CSF mintákban lumbális/kamrai punkcióval (pre- vagy intraoperatív), külső kamrai drenázs (EVD), lumbális vízelvezetés (ELD) és söntszívás.
• Cél 2. A CSF D-laktát teszt optimális küszöbértékének értékelése a készülékkel összefüggő és natív meningitis diagnosztizálására a meglévő definíciós kritériumok alapján.
• Cél 3. A készülékkel összefüggő és natív meningitis diagnosztizálására szolgáló D-laktát teszt teljesítményének értékelése a standard tesztekkel összehasonlítva (tenyészet, gramm festés, liquor leukocitaszám és differenciál, CSF-laktát, CSF-glükóz, CSF-vér glükóz arány, CSF összfehérje, multiplex PCR) és új biomarkerek (CSF prokalcitonin, alfa-defenzin - ELISA, interleukin-6).

Vizsgálati populáció:

Ide tartoznak az intézményünkben kezelt, készülékkel összefüggő agyhártyagyulladás gyanúja és natív agyhártyagyulladás gyanúja miatt. A CSF leszívása a rutin diagnosztikai eljárást követően történik. A vizsgálat során további invazív vagy non-invazív vizsgálatokat nem végeznek. Az ebben a klinikai vizsgálatban kapott eredmények nem befolyásolják a betegek diagnosztikai vagy kezelési döntéseit.

A vizsgálat definíciói Az eszközökkel összefüggő meningitist a Betegségellenőrzési és Megelőzési Központ (CDC) nozokomiális fertőzésekre vonatkozó módosított kritériumai szerint határozzák meg.

Az eszközzel összefüggő agyhártyagyulladásnak vagy ventriculitisnek meg kell felelnie az alábbi kritériumok közül legalább egynek:

1. A kórokozó releváns növekedése a cerebrospinalis folyadékban, az eszközön vagy az eszköz behelyezési helyén lévő sebtamponban.
2. Az alábbi jelek vagy tünetek közül legalább egy, más azonosítható ok nélkül: láz >38°C, fejfájás, nyakmerevség, agyideg-tünetek, ingerlékenység, a Glasgow-i kóma skála (GCS) csökkenése ÉS az alábbi laboratóriumi leletek közül legalább egy: megnövekedett CSF leukociták (>5 × 10^6/l), megnövekedett CSF összfehérje (>0,45 g/l) vagy csökkent CSF/vércukor arány (<0,5); pozitív CSF gramm festődés ÉS az orvos antimikrobiális terápiát kezd.

A natív agyhártyagyulladásra a következő osztályozási rendszert kell alkalmazni:

A meningitist akkor diagnosztizálják, ha az alábbi kritériumok közül legalább egy fennáll:

1. A páciens agy-gerincvelői folyadékból (CSF) tenyésztett organizmusokkal rendelkezik.
2. A betegnek az alábbi jelek vagy tünetek közül legalább egy van: láz (>38°C), fejfájás*, nyakmerevség*, agyhártya-jelek*, agyideg jelei* vagy ingerlékenység*

3. És az alábbiak közül legalább 1:

   1. megnövekedett fehérvérsejtszám, emelkedett fehérjeszint és csökkent glükóz a CSF-ben
   2. a Gram-féle CSF-folton látható organizmusok
   3. vérből tenyésztett szervezetek
   4. a CSF, a vér vagy a vizelet pozitív laboratóriumi tesztje

   5. diagnosztikus egyetlen antitest titer (IgM) vagy a kórokozó páros szérumának (IgG) négyszeres növekedése, és ha a diagnózist antemortem állítják fel, az orvos megfelelő antimikrobiális terápiát ír elő.

      • Más felismert ok nélkül

A diagnosztizált natív vagy készülékkel összefüggő meningitisben szenvedő betegeknél a fertőzés kezdetét a klinikai, laboratóriumi és mikrobiológiai jellemzők határozzák meg.

A vizsgálat lebonyolítása Az eszközzel összefüggő meningitisben a CSF-et a készülékkel kapcsolatos műtét előtt, alatt vagy után szívják le, az általános gyakorlatnak megfelelően. Az ágyéki/kamrai punkciókat (pre-, intra- és/vagy posztoperatív) és külső kamrai (EVD) és lumbális drenázs (ELD) aspirációt neurológus vagy idegsebész végzi a szabványos aszeptikus technikák szerint.

Natív agyhártyagyulladásban szenvedő betegeknél a CSF-et lumbálpunkcióval szívják ki, a szokásos gyakorlat szerint.

Laboratóriumi eljárás

• Közvetlenül az aspiráció után 0,5-1 ml agy-gerincvelői folyadék kerül az alábbi injekciós üvegekbe:

  • natív fiola hagyományos tenyészethez (agarlemez és húsleves)
  • EDTA injekciós üveg a leukocitaszám és a differenciál meghatározásához
  • gyermekvértenyésztő palack (BacTec PedsPlus/F)
  • natív injekciós üveg a biomarkerek kimutatásához (pl. D-laktát, prokalcitonin interleukin-6, alfa-defenzin (ELISA) és további vizsgálatok (pl. PCR)
• A D-laktát tesztet spektrofotometriás enzimvizsgálattal végzik el a gyártó utasításai szerint (D-laktát kolorimetriás vizsgálat). Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA) az alábbiak szerint: a 10 µl agy-gerincvelői folyadék mintát, 2 µl szubsztrátumkeveréket és 2 µl enzimkeveréket és vakpróbát, amely csak a mintát és a szubsztrátumkeveréket tartalmazza, elemezni kell minden minta. Minden tételben D-laktát (monolitiumsó) vizes oldatát tartalmazó kalibrációs görbét kell feldolgozni. Az elegyet szobahőmérsékleten 30 percig inkubáljuk, és az abszorbanciát 450 nm-en a Microplate Absorbance Reader segítségével határozzuk meg. Az egyes minták optikai sűrűségét újraszámítják D-laktát koncentrációra mmol-ban.
• A vizsgálatot két képzett orvosi labortechnikai asszisztens végzi, akik munkanapokon 12 órán keresztül állnak rendelkezésre.
• Minden CSF aspirátumot és szaporodó mikroorganizmust (beleértve azokat, amelyek intraoperatív mintákból, például implantátum körüli szövetekből vagy ultrahangos folyadékból származókat) egy biobankban tárolnak -70°C-on. Ez a folyadék- és tenyészetgyűjtés lehetővé teszi a későbbi további elemzéseket a helyes diagnózis biztosítására.

Statisztikai analízis:

Az eszközzel összefüggő agyhártyagyulladás esetében feltételezzük, hogy a cerebrospinalis folyadékban vett minták 30-40%-a fertőzött, és a D-laktát és a hagyományos tesztek közötti érzékenység különbsége 10% (90% a D-laktát és 80% a hagyományos tesztek esetében). A natív agyhártyagyulladás esetében feltételezzük, hogy a cerebrospinalis folyadékminták 10%-a fertőzött, és a D-laktát és a hagyományos tesztek közötti érzékenység különbsége 20% (95% a D-laktát és 75% a hagyományos tesztek esetében). A két teszt közötti nem inferioritás bizonyítását a százalékos értékek egyoldalú, kétcsoportos tesztje szolgáltatja. A non-inferiorit 10%-os eltéréssel határozták meg, és 458 betegnél idegen anyaggal összefüggő meningitisre, 198 betegnél natív agyhártyagyulladásra mutatható ki 5%-os szignifikanciaszinten és 80%-os hatványon. A teljesítményszámítást az nQuery Advisor 7.0-val végeztük. Az adatok skálatípusától függően a leíró eredményeket átlag ± SD-ben vagy az alanyok számában (százalékban) fejezzük ki. A kategorikus változókat x2 vagy Fisher-féle egzakt teszttel hasonlítjuk össze, ha szükséges. A folyamatos változókat a Wilcoxon rang-összeg teszt segítségével hasonlítjuk össze. A p érték <0,05 statisztikailag szignifikánsnak minősül. A teszteredmények értékelése szenzitivitás, specifitás, pozitív prediktív érték, negatív prediktív érték, pontosság és statisztikai szignifikancia alapján történik McNemar-féle Chi-négyzet teszttel vagy binomiális teszttel a minta méretétől függően. A másodlagos elemzésekből származó összes p-értéket nem megerősítő feltáró módon veszik figyelembe. A statisztikai elemzésekhez az SPSS (SPSS 10.0 for Windows, SPSS, USA) és az R programcsomagot (az elemzés időpontjában a legfrissebb verzió) használjuk.

A kutatók azt tervezik, hogy összesen 600 készülékkel összefüggő agyhártyagyulladásban és 220 natív agyhártyagyulladásban szenvedő beteget vonnak be a vizsgálatba. Az esetek magas számát jelzi, hogy a kutatók csak 30-40%-os fertőzési arányt várnak a külföldi készülékkel összefüggő agyhártyagyulladásnál, és 10%-os fertőzési arányt a natív agyhártyagyulladásnál, valamint 10-15%-os lemorzsolódást (pl. leukocitaszám vagy tenyésztés hiánya).