Sindrome metabolica nei sopravvissuti al trapianto di midollo osseo

Obiettivo specifico 1: Sorveglianza per le endocrinopatie

• Verificheremo i difetti nell'asse dell'ormone della crescita (GH) utilizzando il test di stimolazione del GH. In breve, il paziente (soggetto) avrà studi condotti a digiuno utilizzando due secretagoghi indipendenti (arginina e clonidina) secondo le procedure utilizzate nella pratica clinica endocrina (vedere l'appendice per il protocollo). La carenza di GH sarà identificata in quei soggetti il ​​cui valore di GH stimolato è < 10 ng/dl in tutti i punti temporali, secondo criteri standard. Valuteremo anche i livelli di IGF-1 e IGFBP-3 ei risultati saranno interpretati per valori normali di età. Come parte della nostra sorveglianza per i difetti dell'asse GH, otterremo una radiografia dell'età ossea. I risultati saranno interpretati secondo gli standard di Greulich e Pyle.
• Livelli di steroidi sessuali. I test per i livelli di estrogeni e testosterone possono essere eseguiti lo stesso giorno e contemporaneamente ai test di stimolazione del GH. I risultati saranno confrontati con i valori normali corrispondenti all'età ossea pubblicati da Esoterix Laboratory (Calabasas Hills, CA).
• OGTT- Verrà condotto un test di tolleranza al glucosio orale di 2 ore (OGTT) alle 9:00 o prima, dopo un digiuno notturno. Per ridurre al minimo il disagio, la crema EMLA® verrà posizionata sul sito per l'inserimento del catetere endovenoso (IV) per 30 minuti prima dell'inserimento della flebo. La flebo sarà posizionata in una vena antecubitale da un'infermiera esperta. I campioni di sangue al basale verranno prelevati dalla flebo. Il paziente berrà quindi una glucola (1,75 g CHO/kg, max 75 g) in 3 minuti. I campioni di sangue verranno prelevati dalla flebo a 30, 60 e 120 minuti dopo l'ingestione di Glucola. Il sangue verrà analizzato immediatamente utilizzando un analizzatore di glucosio YSI (Yellow Springs OH) per i livelli di glucosio nel siero. La tolleranza al glucosio sarà classificata secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità17. Il sangue aggiuntivo verrà raccolto e congelato per la successiva analisi dei livelli di insulina da analizzare nel laboratorio del PI.
• Verrà prelevato un campione di sangue a digiuno per la successiva valutazione di un profilo lipidico a digiuno. Questo sarà condotto nel laboratorio NCH. I valori saranno analizzati in base ai valori normali di età pubblicati18.
• Misureremo la circonferenza della vita e riferiremo in base ai valori normali pediatrici6.

Obiettivo specifico 2:

• Misurazione della produzione epatica di glucosio (HGP) e del ricambio proteico. Ai pazienti verrà chiesto di pernottare nel Centro Studi Clinici (arrivare entro le 21:00). Rimarrà NPO, fatta eccezione per i liquidi senza zucchero e caffeina dopo le 21:00. Prima di andare a dormire, utilizzando la crema EMLA®, verrà inserito un catetere IV nella vena antecubitale. Alle 4:00 inizieremo l'infusione di isotopi stabili [1-13C] NaHCO3 (bolo 0,2 mg/kg poi 0,6 mg/kg/ora), [1-13C] leucina (bolo 0,35 mg/kg seguito da 0,65 mg/kg/ora) e 6,6-[2H2]glucosio (bolo 2,5 grammi/kg seguito da infusione costante di 2,0 mg/kg/ora) per 3,0 ore (periodo di equilibrio isotopico). Il sangue verrà prelevato al basale e di nuovo dopo l'equilibrio isotopico. I campioni saranno centrifugati e il siero congelato per future analisi mediante spettrometria di massa nel laboratorio del PI. Noi e altri abbiamo precedentemente descritto questi metodi.20 Inoltre, valuteremo il dispendio energetico a riposo (REE) mediante la calorimetria indiretta della cappa di 30 minuti utilizzando il calorimetro VMax (Viasys Healthcare, Yorba Linda, CA).
• Misurazione dell'insulino-resistenza epatica e periferica utilizzando un morsetto euglicemico iperinsulinemico. Misureremo la sensibilità insulinica epatica e periferica utilizzando un clamp euglicemico iperinsulinemico in combinazione con 6,6-[2H2]glucosio continuato. Sempre utilizzando la crema EMLA®, un secondo catetere IV verrà inserito retrogrado nel dorso della mano opposta e la mano verrà posta in una scatola riscaldante. Il sangue allo stato stazionario verrà raccolto da questo catetere.

Alle 7 del mattino inizieremo il morsetto. L'insulina sarà inizialmente infusa a 10 mU/m2/min. Dopo almeno 2 ore (o più se non si è verificato lo stato stazionario), la velocità di infusione di insulina verrà aumentata a 40 mU/m2/min. La seconda dose verrà continuata per almeno 2 ore o più a lungo fino a quando non si sarà verificato lo stato stazionario. Durante l'infusione di insulina, il paziente riceverà anche un'infusione di destrosio al 20%. La velocità di infusione di destrosio verrà regolata ogni 5-15 minuti per mantenere la glicemia a 88-95 mg/dl. La glicemia plasmatica sarà misurata ogni 5-10 minuti al letto del paziente utilizzando una tecnica automatizzata di glucosio ossidasi (Glucose Analyzer; YSI, Yellow Springs, OH). Per prevenire l'ipokaliemia e l'ipofosfatemia, K2HPO4 sarà infuso durante lo studio e i livelli sierici di potassio saranno misurati al basale e alla fine dello studio. Il sangue verrà raccolto per il successivo rilevamento di 6H6 nel plasma prima dell'infusione dell'isotopo (basale), allo stato stazionario (appena prima dell'infusione di insulina) e alla fine di ogni "fase" di infusione di insulina. Raccoglieremo anche il sangue per l'analisi dei livelli plasmatici di insulina in questi punti temporali. Il nostro gruppo ha precedentemente riportato i dettagli di questi metodi21.

La sensibilità periferica all'insulina sarà riportata come metà del tasso massimo di smaltimento del glucosio (in milligrammi/chilogrammo/minuto) in base alla quantità di glucosio necessaria per mantenere i livelli sierici di glucosio 88-93 mg/dl, a una dose di insulina di 40 mU/m2/min . Questo sarà preso come media di tre intervalli di 15 minuti una volta raggiunto lo stato stazionario. La sensibilità epatica all'insulina sarà quantificata confrontando l'HGP al basale con l'HGP misurato alla fine del clamp 10mU/m2/min.

Misureremo la densità ossea utilizzando una scansione DXA (Lunar Prodigy) che includerà la misurazione di tutto il corpo, dell'anca e della colonna vertebrale sia per la densità minerale ossea che per il contenuto. Le misurazioni saranno confrontate con valori normali abbinati per età e sesso e convertite in punteggi Z (www.bcm.edu/bodycomplab).

** Problemi di sicurezza: abbiamo precedentemente utilizzato il morsetto euglicemico iperinsulinemico in oltre 200 adulti e in 6 adolescenti. In nessun momento nessuno dei nostri soggetti ha avuto ipoglicemia. Riduciamo il rischio misurando il livello di glucosio al letto del paziente ogni 5-15 minuti e regolando l'infusione di destrosio entro un minuto dalla misurazione del glucosio plasmatico. Il pi greco. è presente a ogni procedura di clamp e utilizza la stessa infermiera esperta come assistente. Questo sarà il caso per gli studi condotti in qualsiasi sito. Stiamo usando il modello minimo modificato per i bambini, che riduce notevolmente la perdita di sangue. La perdita massima di sangue per la partecipazione a questo studio è stimata in 52 cc per bambino. I metodi degli isotopi stabili sono stati ampiamente utilizzati sia nelle donne in gravidanza che nei bambini.

Metodi in vitro:

• La determinazione dell'arricchimento isotopico - l'arricchimento in 6H6 del plasma sarà misurata dopo la derivatizzazione utilizzando un gascromatografo/spettrometro di massa Hewlett Packard 5989A nella modalità ad impatto elettronico. Le misure saranno condotte nel laboratorio del richiedente.
• Ormoni e altre analisi- I livelli di insulina e peptide C saranno misurati utilizzando una tecnica di anticorpi a doppia marcatura nel laboratorio del richiedente. L'emoglobina A1c ei profili lipidici a digiuno saranno misurati dal laboratorio del Nationwide Children's Hospital.