骨髄移植生存者のメタボリックシンドローム

具体的な目的 1: 内分泌疾患の監視

• 成長ホルモン（GH）刺激検査を利用して、成長ホルモン（GH）軸の欠陥を検査します。 簡単に説明すると、患者（被験者）は、内分泌臨床実践で利用される手順に従って、2つの独立した分泌促進物質（アルギニンとクロニジン）を使用して絶食状態で研究を実施されます（プロトコルについては付録を参照）。 ＧＨ欠乏症は、標準基準に従って、刺激されたＧＨ値がすべての時点で１０ｎｇ／ｄｌ未満である対象において特定される。 また、IGF-1 および IGFBP-3 レベルも評価し、結果は年齢の正常値ごとに解釈されます。 GH 軸欠損の監視の一環として、骨年齢 X 線検査を行います。 結果は、Greulich と Pyle の基準に従って解釈されます。
• 性ステロイドのレベル。 エストロゲンとテストステロンのレベルの検査は、GH 刺激検査と同じ日に、同時に行うことができます。 結果は、Esoterix Laboratory (カリフォルニア州カラバサスヒルズ) によって公表されている骨年齢と一致する正常値と比較されます。
• OGTT - 2 時間の経口ブドウ糖負荷試験 (OGTT) は、一晩絶食した後、午前 9 時またはそれ以前に実施されます。 不快感を最小限に抑えるため、静脈カテーテル (IV) を挿入する部位に EMLA® クリームを 30 分間塗布してから、IV を挿入します。 経験豊富な看護師が点滴を肘前静脈に留置します。 ベースライン血液サンプルは点滴から採取されます。 次に、患者はグルコーラ (1.75 gms CHO/kg、最大 75 gms) を 3 分間かけて飲みます。 血液サンプルは、グルコラ摂取後 30、60、および 120 分後に IV から採取されます。 血液は、YSIグルコース分析装置(オハイオ州イエロースプリングス)を使用して血清グルコースレベルについて直ちに分析される。 耐糖能は世界保健機関に従って分類されます17。 PIの研究室でインスリンレベルを後で分析するために、追加の血液が収集され、凍結されます。
• 後の空腹時脂質プロフィールの評価のために、空腹時血液サンプルが採取されます。 これはNCH研究所で実施されます。 値は、公表されている年齢の正常値に従って分析されます18。
• 腹囲を測定し、小児の正常値に基づいて報告します6。

具体的な目的 2:

• 肝臓のグルコース産生 (HGP) とタンパク質代謝回転の測定。 患者は臨床研究センターで一晩過ごすように求められます（午後9時までに到着）。 午後9時以降は砂糖やカフェインを含まない液体を除いて、NPOのままとなります。就寝前にEMLA®クリームを使用し、IVカテーテルを肘前静脈に挿入します。 午前4時 安定同位体 [1-13C] NaHCO3 (ボーラス 0.2 mg/kg、その後 0.6 mg/kg/hr)、[1-13C] ロイシン (ボーラス 0.35 mg/kg、その後 0.65 mg/kg/hr) の注入を開始します。 6,6-[2H2]グルコース（2.5グラム/kgのボーラス、その後2.0mg/kg/時間の定常注入）を3.0時間（同位体平衡期間）。 血液はベースラインで採取され、同位体平衡後に再度採取されます。 サンプルは遠心分離され、血清は将来の P.I. の研究室での質量分析による分析に備えて凍結されます。 これらの方法については、私たちや他の人が以前に説明しました20。 さらに、VMax 熱量計 (Viasys Healthcare、カリフォルニア州ヨーバリンダ) を使用した 30 分間のフード間接熱量測定により、安静時エネルギー消費量 (REE) を評価します。
• 高インスリン正常血糖クランプを使用した肝臓および末梢のインスリン抵抗性の測定。 継続的な6,6-[2H2]グルコースと併用した高インスリン正常血糖クランプを使用して、肝臓および末梢のインスリン感受性を測定します。 再び EMLA® クリームを使用して、2 本目の IV カテーテルを反対側の手の甲に逆行して挿入し、手を加温ボックスに置きます。 定常状態の血液がこのカテーテルから収集されます。

午前7時 クランプを開始します。 インスリンは最初に 10 mU/m2/min で注入されます。 少なくとも 2 時間後 (定常状態が生じていない場合はそれ以上)、インスリン注入速度は 40 mU/m2/min に増加します。 2回目の投与は、定常状態に達するまで少なくとも2時間以上継続されます。 インスリン注入中、患者は 20% ブドウ糖の注入も受けます。 ブドウ糖注入の速度は、血漿グルコース 88 ～ 95 mg/dl を維持するために 5 ～ 15 分ごとに調整されます。 血漿グルコースは、自動グルコースオキシダーゼ技術（グルコースアナライザー；YSI、オハイオ州イエロースプリングス）を使用して、ベッドサイドで5〜10分ごとに測定されます。 低カリウム血症と低リン酸血症を防ぐために、研究全体を通じてK2HPO4が注入され、ベースラインと研究終了時に血清カリウムレベルが測定されます。 同位体の注入前（ベースライン）、定常状態（インスリン注入の直前）、および各インスリン注入「ステップ」の終了時に、血漿中の6H6を後で検出するために血液が採取されます。 これらの時点での血漿インスリン濃度の分析のために血液も採取します。 私たちのグループは以前にこれらの方法の詳細を報告しました21。

末梢インスリン感受性は、インスリン用量 40 mU/m2/min で血清グルコース レベル 88 ～ 93 mg/dl を維持するために必要なグルコース量に応じた最大グルコース処理速度の半分 (ミリグラム/キログラム/分) として報告されます。 。 これは、定常状態に達した後、3 回の 15 分間隔の平均として取得されます。 肝臓のインスリン感受性は、ベースラインの HGP を 10mU/m2/min クランプの終了時に測定した HGP と比較することによって定量化されます。

DXAスキャン（Lunar Prodigy）を使用して骨密度を測定します。これには、全身、股関節、脊椎の骨密度と骨量の両方の測定が含まれます。 測定値は、年齢および性別が一致した正常値と比較され、Z スコアに変換されます (www.bcm.edu/bodycomplab)。

**安全性の問題: 私たちはこれまでに、200 人以上の成人と 6 人の青少年に高インスリン血症正常血糖クランプを使用しました。 私たちの被験者はこれまでに低血糖を経験したことがありません。 私たちは、ベッドサイドで血糖値を5〜15分ごとに測定し、血漿血糖値の測定後1分以内にブドウ糖の注入を調整することでリスクを軽減します。 P.I.毎回のクランプ処置に立ち会い、同じ熟練した看護師を助手として雇います。 これは、どの現場で行われた研究にも当てはまります。 私たちは子供向けに改良された最小限のモデルを使用しており、失血を大幅に最小限に抑えます。 この研究に参加する場合の最大失血量は、子供 1 人あたり 52 cc と推定されています。 安定同位体法は、妊婦と小児の両方に広く使用されています。

インビトロ法:

• プラズマの同位体濃縮度（6H6 濃縮度）の測定は、電子衝撃モードで Hewlett Packard 5989A ガスクロマトグラフ/質量分析計を使用して誘導体化後に測定されます。 測定は申請者の研究室で行われます。
• ホルモンおよびその他の分析 - インスリンおよび C ペプチドのレベルは、申請者の研究室で二重標識抗体技術を使用して測定されます。 ヘモグロビン A1c と空腹時脂質プロファイルは、ネーションワイド小児病院の検査室で測定されます。