Zespół metaboliczny u osób, które przeżyły przeszczep szpiku kostnego

Cel szczegółowy 1: Obserwacja endokrynopatii

• Przetestujemy defekty osi hormonu wzrostu (GH) za pomocą testów stymulacji GH. W skrócie, pacjent (osobnik) będzie miał badania prowadzone na czczo z użyciem dwóch niezależnych środków stymulujących wydzielanie (arginina i klonidyna) zgodnie z procedurami stosowanymi w praktyce klinicznej endokrynologicznej (protokół patrz załącznik). Niedobór GH zostanie stwierdzony u osób, u których stymulowana wartość GH wynosi < 10 ng/dl we wszystkich punktach czasowych, zgodnie ze standardowymi kryteriami. Ocenimy również poziomy IGF-1 i IGFBP-3, a wyniki zostaną zinterpretowane na podstawie wartości prawidłowych dla wieku. W ramach nadzoru nad wadami osi GH wykonamy zdjęcie rentgenowskie wieku kostnego. Wyniki będą interpretowane zgodnie ze standardami Greulicha i Pyle'a.
• Poziomy sterydów płciowych. Badanie poziomu estrogenu i testosteronu można wykonać tego samego dnia i o tej samej porze co testy stymulacji GH. Wyniki zostaną porównane z normalnymi wartościami odpowiadającymi wiekowi kostnemu, opublikowanymi przez Esoterix Laboratory (Calabasas Hills, CA).
• OGTT — 2-godzinny doustny test obciążenia glukozą (OGTT) zostanie przeprowadzony o godzinie 9 rano lub wcześniej, po całonocnym poście. Aby zminimalizować dyskomfort, krem ​​EMLA® zostanie umieszczony w miejscu wprowadzenia cewnika dożylnego (IV) na 30 minut przed umieszczeniem IV. IV zostanie umieszczona w żyle przedłokciowej przez doświadczoną pielęgniarkę. Wyjściowe próbki krwi zostaną pobrane z IV. Następnie pacjent będzie pił glukozę (1,75 g CHO/kg, maks. 75 g) przez 3 minuty. Próbki krwi zostaną pobrane z IV po 30, 60 i 120 minutach po spożyciu Glucoli. Krew zostanie natychmiast przeanalizowana przy użyciu analizatora glukozy YSI (Yellow Springs OH) pod kątem poziomu glukozy w surowicy. Tolerancja glukozy zostanie sklasyfikowana zgodnie ze Światową Organizacją Zdrowia17. Dodatkowa krew zostanie pobrana i zamrożona do późniejszej analizy poziomu insuliny w laboratorium PI.
• Pobrana zostanie próbka krwi na czczo w celu późniejszej oceny profilu lipidowego na czczo. Zostanie to przeprowadzone w laboratorium NCH. Wartości zostaną przeanalizowane zgodnie z opublikowanymi wartościami normalnymi dla wieku18.
• Zmierzymy obwód talii i zgłosimy zgodnie z normalnymi wartościami pediatrycznymi6.

Cel szczegółowy 2:

• Pomiar produkcji glukozy w wątrobie (HGP) i obrotu białkami. Pacjenci będą proszeni o nocleg w Ośrodku Badań Klinicznych (przyjazd do godz. 21:00). Pozostanie NPO, z wyjątkiem płynów niezawierających cukru i kofeiny po godzinie 21:00. Przed pójściem spać za pomocą kremu EMLA® do żyły łokciowej zostanie wprowadzony cewnik IV. o 4:00 rano rozpoczniemy infuzję stabilnych izotopów [1-13C] NaHCO3 (bolus 0,2 mg/kg, a następnie 0,6 mg/kg/h), [1-13C] leucyny (bolus 0,35 mg/kg, a następnie 0,65 mg/kg/h) i 6,6-[2H2]glukoza (bolus 2,5 grama/kg, a następnie stały wlew 2,0 mg/kg/godzinę) przez 3,0 godziny (okres równoważenia izotopowego). Krew zostanie pobrana na linii podstawowej i ponownie po zrównoważeniu izotopowym. Próbki zostaną odwirowane, a surowica zamrożona do przyszłej analizy za pomocą spektrometrii mas w laboratorium P.I. My i inni opisaliśmy wcześniej te metody.20 Dodatkowo ocenimy spoczynkowy wydatek energetyczny (REE) za pomocą 30-minutowej kalorymetrii pośredniej z użyciem kalorymetru VMax (Viasys Healthcare, Yorba Linda, CA).
• Pomiar wątrobowej i obwodowej oporności na insulinę za pomocą hiperinsulinemicznego klamry euglikemicznej. Zmierzymy wątrobową i obwodową wrażliwość na insulinę za pomocą klamry euglikemicznej hiperinsulinemicznej w połączeniu z ciągłym oznaczaniem 6,6-[2H2]glukozy. Ponownie używając kremu EMLA®, drugi cewnik dożylny zostanie wprowadzony wstecznie w tył przeciwnej dłoni, a dłoń zostanie umieszczona w ogrzewanym pudełku. Z tego cewnika zostanie pobrana krew w stanie stacjonarnym.

O 7 rano. rozpoczniemy zacisk. Insulina będzie początkowo podawana z szybkością 10 mU/m2/min. Po co najmniej 2 godzinach (lub dłużej, jeśli stan stacjonarny nie występuje) szybkość wlewu insuliny zostanie zwiększona do 40 mj.m./m2/min. Drugą dawkę należy podawać przez co najmniej 2 godziny lub dłużej, aż do uzyskania stanu stacjonarnego. Podczas wlewu insuliny pacjent otrzyma również wlew 20% dekstrozy. Szybkość wlewu dekstrozy będzie dostosowywana co 5-15 minut, aby utrzymać stężenie glukozy w osoczu na poziomie 88-95 mg/dl. Stężenie glukozy w osoczu będzie mierzone co 5-10 minut przy łóżku pacjenta przy użyciu zautomatyzowanej techniki oksydazy glukozy (Glucose Analyzer; YSI, Yellow Springs, OH). Aby zapobiec hipokaliemii i hipofosfatemii, K2HPO4 będzie podawany we wlewie przez cały czas trwania badania, a poziomy potasu w surowicy będą mierzone na początku i na końcu badania. Krew zostanie pobrana w celu późniejszego wykrycia 6H6 w osoczu przed infuzją izotopu (linia bazowa), w stanie ustalonym (tuż przed infuzją insuliny) oraz na końcu każdego „etapu” infuzji insuliny. Pobierzemy również krew do analizy poziomu insuliny w osoczu w tych punktach czasowych. Nasza grupa wcześniej informowała o szczegółach tych metod21.

Obwodowa wrażliwość na insulinę będzie podawana jako połowa maksymalnej szybkości usuwania glukozy (w miligramach/kilogram/minutę) zgodnie z ilością glukozy wymaganą do utrzymania poziomu glukozy w surowicy 88-93 mg/dl, przy dawce insuliny 40 mU/m2/min . Zostanie to przyjęte jako średnia z trzech 15-minutowych okresów po osiągnięciu stanu stacjonarnego. Wrażliwość wątroby na insulinę zostanie określona ilościowo przez porównanie HGP na linii podstawowej z HGP zmierzonym na końcu zacisku 10 mU/m2/min.

Zmierzymy gęstość kości za pomocą skanu DXA (Lunar Prodigy), który obejmie pomiar całego ciała, bioder i kręgosłupa zarówno pod kątem gęstości mineralnej, jak i zawartości kości. Pomiary zostaną porównane z normami dobranymi pod względem wieku i płci i przeliczone na wyniki Z (www.bcm.edu/bodycomplab).

**Kwestie bezpieczeństwa: Wcześniej stosowaliśmy hiperinsulinemiczną klamrę euglikemiczną u ponad 200 osób dorosłych i 6 nastolatków. Nigdy żaden z naszych pacjentów nie doświadczył hipoglikemii. Zmniejszamy ryzyko, mierząc poziom glukozy przy łóżku chorego co 5-15 minut i korygując infuzję dekstrozy w ciągu jednej minuty od pomiaru stężenia glukozy w osoczu. P.I. jest obecny przy każdym zabiegu zaciskania i korzysta z usług tej samej wykwalifikowanej pielęgniarki jako asystenta. Tak będzie w przypadku badań przeprowadzonych w dowolnym miejscu. Używamy modelu minimalnego zmodyfikowanego dla dzieci, co znacznie minimalizuje utratę krwi. Maksymalną utratę krwi związaną z udziałem w tym badaniu szacuje się na 52 cm3 na dziecko. Metody stabilnych izotopów były szeroko stosowane zarówno u kobiet w ciąży, jak iu dzieci.

Metody in vitro:

• Oznaczanie wzbogacenia izotopowego - wzbogacenie plazmy w 6H6 będzie mierzone po derywatyzacji przy użyciu chromatografu gazowego/spektrometru masowego Hewlett Packard 5989A w trybie zderzenia elektronów. Pomiary będą prowadzone w laboratorium wnioskodawcy.
• Hormony i inne analizy – poziomy insuliny i peptydu C będą mierzone przy użyciu techniki podwójnie znakowanych przeciwciał w laboratorium wnioskodawcy. Hemoglobina A1c i profile lipidowe na czczo będą mierzone przez laboratorium Ogólnopolskiego Szpitala Dziecięcego.