Studio clinico e sui biomarcatori dell'efficacia della fotoferesi extracorporea nella malattia del trapianto contro l'ospite (BIOECP_GVHD)

Titolo: Studio esplorativo di biomarcatori associati alla risposta clinica alla fotoferesi extracorporea nel trattamento della malattia del trapianto contro l'ospite acuta e cronica post trapianto allogenico di cellule staminali ematopoietiche

Obiettivi:

1. Valutare l'efficacia clinica dell'uso della fotoferesi extracorporea nel trattamento della malattia del trapianto contro l'ospite acuta o cronica in base alle indicazioni cliniche standard come predefinite dai centri partecipanti (Gruppo spagnolo per il trapianto ematopoietico).
2. Esplorare e identificare i biomarcatori della risposta clinica alla fotoferesi extracorporea mediante un'analisi completa di diverse popolazioni immunitarie, comprese le cellule T, B e Natural Killer, prima e all'interno degli episodi di malattia clinica del trapianto contro l'ospite e il profilo cinetico del plasma citochine (Interferon-gamma, fattore di attivazione delle cellule B, fattore di necrosi tumorale-alfa e interleuchina-6) in relazione alla malattia del trapianto contro l'ospite.

Metodi:

50 pazienti con malattia del trapianto contro l'ospite acuta o cronica dopo trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche qualunque sia la fonte cellulare (sangue, midollo osseo o cordone ombelicale), diagnosticata e trattata in uno dei centri partecipanti con fotoferesi extracorporea chiusa nelle indicazioni dettagliate sotto, saranno analizzati al fine di identificare potenziali biomarcatori della risposta alla malattia del trapianto contro l'ospite. Le analisi delle popolazioni T, B e Natural Killer saranno effettuate mediante Intracellular Cytokine Staining e Flow Cytometry. La misurazione delle citochine nel plasma sarà effettuata mediante Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay. Centri partecipanti:

• Clinica Ospedaliera. Valencia. Spagna
• Clinica Ospedaliera. Salamanca. Spagna
• Ospedale Ramón y Cajal. Madrid. Spagna.
• Ospedale Murcia. Spagna
• Ospedale di Navarra, Pamplona. Spagna

Ciascun Centro otterrà l'approvazione dello studio da parte del Comitato Etico Locale ei pazienti presenteranno il consenso informato. Non sono previsti rischi dalla partecipazione dei pazienti a questo studio analitico esplorativo.

Frequenza del trattamento La frequenza del trattamento dipenderà dal tipo di malattia del trapianto contro l'ospite (acuta o cronica) e sarà modificata a seconda della risposta clinica. Tutti i campioni verranno ottenuti contemporaneamente ad altri campioni di sangue standard.

Malattia acuta del trapianto contro l'ospite: il trattamento verrà avviato utilizzando 3 sessioni/settimana, 1a settimana. Di solito la risposta sarà determinata in 3-4 settimane. Se una chiara progressione dopo 2 settimane di trattamento o nessuna risposta dopo 6-8 settimane il trattamento verrà sospeso e il trattamento aggiuntivo dipenderà dalla decisione dello sperimentatore. In caso di risposta, la frequenza del trattamento sarà ridotta secondo il seguente schema:

• 2 trattamenti ogni settimana dalla settimana 2 alla settimana 12
• 1 trattamento ogni 2 settimane dalla settimana 13, fino alla totale soppressione del trattamento con corticosteroidi.

Valutazione della risposta:

1. Remissione completa: risoluzione di tutti i segni della malattia del trapianto contro l'ospite
2. Remissione parziale: miglioramento di almeno 1 grado.
3. Assenza di risposta

Malattia cronica del trapianto contro l'ospite: il trattamento verrà avviato utilizzando 3 sessioni durante la settimana 1, 2 sessioni ogni 2 settimane durante le settimane da 2 a 12. In assenza di progressione, la prima valutazione verrà effettuata a 3 mesi (settimana 12). In assenza di risposta, la fotoferesi extracorporea verrà sospesa, ad eccezione della malattia del trapianto contro l'ospite sclerodermiforme in cui la valutazione verrà effettuata a 6 mesi. Se risposta alla settimana 12: 2 sessioni ogni mese per altri 3 mesi, dopo la soppressione del trattamento con corticosteroidi. Utilizzo dei criteri di risposta del NIH Consensus Group (2006)

Studio sui biomarcatori: Campioni: 2 x 10 ml di sangue intero in etilendiamminotetraacetato. si otterranno in ciascuna analisi temporale: fotoferesi pre-extracorporea e nei giorni +7, +14, +21, +30 fotoferesi post-extracorporea nella GVHD acuta e fotoferesi pre-extracorporea e nei giorni +15, +30, +45 , +60, +75, +90 fotoferesi post-extracorporea nella malattia cronica del trapianto contro l'ospite. I campioni saranno processati in ciascun Centro partecipante al fine di ottenere cellule mononucleate seguendo il protocollo allegato e conservati congelati fino al trasporto al Laboratorio di elaborazione centralizzato presso l'Hospital Clinico, Valencia, Spagna e l'invio delle informazioni cliniche incluse nel database Excel allegato.

1. Le analisi delle popolazioni T, B e Natural Killer, comprese le cellule Treg e le cellule dendritiche, saranno eseguite mediante colorazione intracellulare di citochine e citometria a flusso (BD e Bioscience).

   Popolazioni cellulari e time-point da monitorare: fotoferesi pre-extracorporea e nei giorni +7, +14, +21, +30 fotoferesi post-extracorporea nella malattia del trapianto contro l'ospite acuta e fotoferesi pre-extracorporea e nei giorni +15, +30, +45, +60, +75, +90 fotoferesi post-extracorporea nella malattia cronica del trapianto contro l'ospite.

2. Misurazione delle citochine nel plasma (Interferon-gamma, Tumor Necrosis Factor-alfa, Interleuchina-10, Fattore di attivazione delle cellule B e Interleuchina-6)