Tecniche di PCR dell'espettorato essiccato utilizzando una Spotcard

I test molecolari per le mutazioni nei geni di M. tuberculosis associati alla resistenza ai farmaci antitubercolari (TB) fanno già parte della diagnostica standard di laboratorio della tubercolosi.

Ciò implica una conoscenza precoce della possibile resistenza e quindi previene trattamenti non necessari e la possibilità di fallimento del trattamento o tossicità correlata al trattamento.

La diagnostica di laboratorio molecolare è ampiamente diffusa nei paesi ad alto reddito e con bassa tubercolosi endemica. Tuttavia, i paesi a basso reddito non dispongono di strutture diffuse per testare la suscettibilità, sia genotipica che fenotipica. L'esecuzione della diagnostica molecolare sull'espettorato raccolto con una scheda spot potrebbe migliorare l'accessibilità ai test molecolari.

Questo studio esamina se l'espettorato raccolto e messo su carte spot potrebbe essere utilizzato per più test molecolari per il rilevamento, l'identificazione e la previsione della suscettibilità della tubercolosi. Ciò significa che l'estrazione del DNA dell'espettorato dallo spot card dovrebbe essere fattibile.

Lo studio è uno studio pilota con pazienti adulti del dipartimento di tubercolosi del Centro medico universitario di Groningen (UMCG) Beatrixoord, Haren come soggetti. L'espettorato prodotto verrà raccolto, asciugato su carte spot e verrà testata l'estrazione del DNA dalla carta. Se il rilevamento molecolare è positivo per i batteri della tubercolosi, verranno eseguiti ulteriori test. Sulla base della presenza/assenza di mutazioni nei geni associati alla suscettibilità alla resistenza che possono essere predite, verranno eseguite diverse tecniche molecolari per identificare possibili mutazioni. Inoltre, l'espettorato verrà raccolto man mano che i pazienti lo producono. Possono essere testati anche campioni di espettorato con bassa carica batterica e possono testare la sensibilità della procedura.

Infine, verranno testate tecniche come il rilevamento dell'RNA per identificare la carica batterica. Questo può essere fatto se sono stati raccolti più di un campione di pazienti.

I soggetti saranno selezionati in base all'età, alla partecipazione a TDM standard e all'uso di droghe. Verranno analizzati i parametri demografici. I campioni di espettorato verranno prelevati due volte a settimana (martedì e venerdì).