PCR-Techniken von getrocknetem Sputum unter Verwendung einer Spotcard

Molekulare Tests auf Mutationen in M. tuberculosis-Genen, die mit der Resistenz gegen Tuberkulose (TB)-Medikamente in Verbindung stehen, sind bereits Teil der Standard-TB-Diagnostik im Labor.

Dies impliziert eine frühere Kenntnis einer möglichen Resistenz und verhindert somit eine unnötige Behandlung und die Möglichkeit eines Behandlungsversagens oder einer behandlungsbedingten Toxizität.

Die molekulare Labordiagnostik ist in Ländern mit hohem Einkommen und niedriger TB-Endemie weit verbreitet. Den Ländern mit niedrigem Einkommen fehlen jedoch weit verbreitete Einrichtungen, um die Anfälligkeit zu testen, entweder genotypisch oder phänotypisch. Die Durchführung einer molekularen Diagnostik an Sputum, das mit einer Spot-Karte gesammelt wurde, könnte den Zugang zu molekularen Tests verbessern.

Diese Studie untersucht, ob das gesammelte und auf Spot-Karten aufgebrachte Sputum für mehrere molekulare Tests zum Nachweis, zur Identifizierung und zur Vorhersage der Anfälligkeit von TB verwendet werden könnte. Das bedeutet, dass die DNA-Extraktion des Sputums von der Tüpfelkarte durchführbar sein sollte.

Die Studie ist eine Pilotstudie mit erwachsenen Patienten der Tuberkulose-Abteilung des Universitätsklinikums Groningen (UMCG) Beatrixoord, Haren als Probanden. Das produzierte Sputum wird gesammelt, auf Tüpfelkarten getrocknet und die DNA-Extraktion aus der Karte wird getestet. Wenn der molekulare Nachweis für die Tuberkulose-Bakterien positiv ist, werden zusätzliche Tests durchgeführt. Basierend auf dem Vorhandensein/Fehlen von Mutationen in den Genen, die mit der Resistenzanfälligkeit assoziiert sind, können verschiedene molekulare Techniken durchgeführt werden, um mögliche Mutationen zu identifizieren. Darüber hinaus wird Sputum gesammelt, wenn die Patienten es produzieren. Sputumproben mit geringer Bakterienbelastung können ebenfalls getestet werden und die Sensitivität des Verfahrens testen.

Schließlich werden Techniken wie der RNA-Nachweis getestet, um die Bakterienlast zu identifizieren. Dies ist möglich, wenn mehr als eine Patientenprobe entnommen wurde.

Die Probanden werden nach Alter, Teilnahme an Standard-TDM und Drogenkonsum ausgewählt. Demografische Parameter werden analysiert. Sputumproben werden zweimal pro Woche (am Dienstag und Freitag) entnommen.