Integrazione commerciale di DHA

Gli investigatori hanno reclutato 73 donne incinte alla fine del terzo trimestre da una clinica ostetrica a basso rischio in conformità con il protocollo approvato dai regolamenti del comitato di revisione istituzionale degli investigatori (HRPO # 10-417). A tutte le donne della clinica è stata offerta la partecipazione e l'arruolamento è stato eseguito a 34-36 settimane di età gestazionale per coloro che erano d'accordo. I criteri di esclusione includevano preeclampsia, diabete gestazionale o diabete pre-gestazionale, uso cronico di farmaci e altre complicanze mediche della gravidanza. I dati materni tra cui età, gravidanza, parità, età gestazionale, etnia, indice di massa corporea al momento del parto e modalità di parto sono stati raccolti in conformità con le linee guida dell'Health Insurance Portability and Accountability Act. I dati neonatali, inclusi sesso, peso alla nascita, altezza e circonferenza cranica e caratteristiche del parto materno sono stati raccolti dopo aver esaminato il registro del parto.

I soggetti hanno acconsentito alla randomizzazione in un gruppo che riceveva 275 mg di Promise DHA a base di olio di pesce (Biotegrity; Granbury, TX) per via orale ogni giorno, o un 200 mg di Expecta DHA a base di alghe (Mead Johnson; Evansville, IN) per via orale ogni giorno, o dieta abitudini come al solito. Gli incarichi di randomizzazione sono stati nascosti in buste opache e rivelati al momento dell'arruolamento. I calendari sono stati tenuti per documentare l'uso degli integratori e gli integratori non utilizzati sono stati consegnati al momento dell'ammissione al travaglio e del parto. I conteggi delle pillole sono stati eseguiti per verificare l'accuratezza dei calendari.

Considerazioni sulla dimensione del campione: la misura dell'esito primario dei ricercatori era il livello di DHA nel siero materno e nel sangue del cordone ombelicale neonatale. Per rilevare un aumento del 15% nelle proporzioni di DHA, sarebbe necessario un campione di 19 persone in ciascun gruppo. Questo studio è un'indagine pilota, progettata per determinare se uno studio di integrazione più ampio sarebbe fattibile nella popolazione dei ricercatori.

Raccolta di campioni di sangue Un campione di sangue venoso è stato raccolto da ciascun partecipante al momento dell'arruolamento e della randomizzazione. Il sangue materno è stato prelevato dalla fossa antecubitale in provette contenenti EDTA e conservato a -4 gradi C. Un secondo campione materno è stato recuperato al momento del ricovero per il travaglio in modo simile. Allo stesso modo, i campioni neonatali sono stati raccolti al momento del parto, subito dopo il clampaggio del cordone. Entro 72 ore dalla raccolta, i campioni materni e neonatali non emolizzati sono stati identificati e centrifugati per 5 minuti in una centrifuga clinica, e la porzione di plasma è stata estratta e conservata in fiale da 2 ml a -78 °C fino all'esecuzione dell'analisi degli acidi grassi.

Analisi degli acidi grassi:

I campioni sono stati lasciati scongelare a temperatura ambiente e l'estrazione dei lipidi è stata eseguita utilizzando cloroformio/metanolo (2:1, v/v) secondo il metodo di Folch et al (1957). Il residuo lipidico estratto è stato pesato dopo essiccamento a 45°C sotto flusso di azoto. La componente fosfolipidica totale del siero è stata isolata mediante cromatografia su colonna di acido silicico (26) della frazione lipidica totale ottenuta estraendo un'aliquota di 1 mL di siero con cloroformio: metanolo (2:1,v/v). Gli acidi grassi sono stati transesterificati per generare esteri metilici utilizzando NaOH 0,5 N in metanolo e trifluoruro di boro al 14% (p/v) in metanolo (27). L'acido undecenoico (Nu-Check Prep, Elysian, MN) è stato aggiunto prima della metilazione e servito come standard interno.

Gli esteri metilici degli acidi grassi sono stati quantificati utilizzando un gascromatografo (6890N, Agilent Technologies, Sunnyvale, CA) dotato di un autoiniettore, un sistema di iniezione capillare split/splitless e un rivelatore a ionizzazione di fiamma come descritto altrove(28)(). È stata utilizzata una miscela personalizzata di acidi grassi descritta da Loor e Herbein (28) e realizzata con standard di esteri metilici puri, inclusi AA e DHA (Nu-Check Prep, Elysian, MN, USA; Sigma, St. Louis, MO, USA). identificare i picchi e determinare i fattori di risposta per l'integrazione con una Chem DataStation (Agilent Technologies, Sunnyvale, CA).