Suplementación comercial de DHA

Los investigadores reclutaron a 73 mujeres embarazadas a fines del tercer trimestre de una clínica de partería de bajo riesgo de acuerdo con el protocolo aprobado por las regulaciones de la junta de revisión institucional de investigadores (HRPO #10-417). Se ofreció la participación a todas las mujeres en la clínica y la inscripción se realizó a las 34-36 semanas de edad gestacional para aquellas que estuvieron de acuerdo. Los criterios de exclusión incluyeron preeclampsia, diabetes gestacional o diabetes pregestacional, uso crónico de medicamentos y otras complicaciones médicas del embarazo. Los datos maternos, incluidos la edad, la gravedad, la paridad, la edad gestacional, el origen étnico, el IMC al momento del parto y el modo de parto, se recopilaron de conformidad con las pautas de la Ley de portabilidad y responsabilidad del seguro médico. Los datos neonatales, incluidos el sexo, el peso al nacer, la altura y la circunferencia de la cabeza y las características del parto materno, se recopilaron después de revisar el registro de parto.

Los sujetos dieron su consentimiento para la aleatorización en un grupo que recibió 275 mg de Promise DHA a base de aceite de pescado (Biotegrity; Granbury, TX) por vía oral todos los días, o Expecta DHA de 200 mg a base de algas (Mead Johnson; Evansville, IN) por vía oral todos los días, o hábitos como de costumbre. Las asignaciones de aleatorización se ocultaron en sobres opacos y se revelaron en el momento de la inscripción. Se mantuvieron calendarios para documentar el uso de suplementos y los suplementos no utilizados se entregaron en el momento de la admisión al trabajo de parto y el parto. Se realizaron recuentos de pastillas para verificar la exactitud de los calendarios.

Consideraciones sobre el tamaño de la muestra: la medida de resultado primaria de los investigadores fue el nivel de DHA en el suero materno y en la sangre del cordón umbilical neonatal. Para detectar un aumento del 15% en las proporciones de DHA, se requeriría un tamaño de muestra de 19 en cada grupo. Este estudio es una investigación piloto, diseñada para determinar si un estudio de suplementación más grande sería factible en la población de investigadores.

Recolección de muestras de sangre Se recolectó una muestra de sangre venosa de cada participante en el momento de la inscripción y la aleatorización. Se extrajo sangre materna de la fosa antecubital en tubos que contenían EDTA y se almacenó a -4 grados C. Se extrajo una segunda muestra materna en el momento de la admisión para el trabajo de parto de manera similar. Las muestras neonatales se recolectaron de manera similar en el momento del parto, justo después del pinzamiento del cordón. Dentro de las 72 horas posteriores a la recolección, las muestras maternas y neonatales no hemolizadas se identificaron y centrifugaron durante 5 minutos en una centrífuga clínica, y la porción de plasma se extrajo y almacenó en viales de 2 ml a -78 °C hasta que se realizó el análisis de ácidos grasos.

Análisis de ácidos grasos:

Las muestras se dejaron descongelar a temperatura ambiente y la extracción de lípidos se realizó con cloroformo/metanol (2:1, v/v) según el método de Folch et al (1957). El residuo lipídico extraído se pesó después de secarlo a 45°C bajo una corriente de nitrógeno. El componente fosfolipídico total del suero se aisló mediante cromatografía en columna de ácido silícico (26) de la fracción lipídica total obtenida extrayendo una alícuota de 1 ml de suero con cloroformo: metanol (2:1, v/v). Los ácidos grasos se transesterificaron para generar ésteres metílicos utilizando NaOH 0,5 N en metanol y trifluoruro de boro al 14 % (p/v) en metanol (27). Se añadió ácido undecenoico (Nu-Check Prep, Elysian, MN) antes de la metilación y sirvió como estándar interno.

Los ésteres metílicos de ácidos grasos se cuantificaron utilizando un cromatógrafo de gases (6890N, Agilent Technologies, Sunnyvale, CA) equipado con un autoinyector, un sistema de inyección capilar split/splitless y un detector de ionización de llama como se describe en otra parte(28)(). Se utilizó una mezcla de ácidos grasos personalizada descrita por Loor y Herbein (28) y elaborada con estándares de éster metílico puro, incluidos AA y DHA (Nu-Check Prep, Elysian, MN, EE. UU.; Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.). para identificar picos y determinar factores de respuesta para la integración con Chem DataStation (Agilent Technologies, Sunnyvale, CA).