Suplementação comercial de DHA

Os investigadores recrutaram 73 mulheres grávidas no final do terceiro trimestre de uma clínica de obstetrícia de baixo risco em conformidade com o protocolo aprovado pelos regulamentos do conselho de revisão institucional dos investigadores (HRPO # 10-417). Todas as mulheres na clínica foram convidadas a participar e a inscrição foi realizada entre 34 e 36 semanas de idade gestacional para aquelas que concordaram. Os critérios de exclusão incluíram pré-eclâmpsia, diabetes gestacional ou pré-gestacional, uso crônico de medicamentos e outras complicações médicas da gravidez. Dados maternos, incluindo idade, gravidez, paridade, idade gestacional, etnia, IMC no momento do parto e tipo de parto foram coletados de acordo com as diretrizes da Lei de Portabilidade e Responsabilidade do Seguro de Saúde. Dados neonatais, incluindo sexo, peso ao nascer, altura e perímetro cefálico e características maternas do parto foram coletados após revisão do registro do parto.

Os participantes consentiram com a randomização em um grupo recebendo 275 mg de Promise DHA à base de óleo de peixe (Biotegrity; Granbury, TX) por via oral todos os dias, ou 200 mg de Expecta DHA à base de algas (Mead Johnson; Evansville, IN) por via oral todos os dias, ou dieta hábitos como de costume. As atribuições de randomização foram ocultadas em envelopes opacos e reveladas no momento da inscrição. Calendários foram mantidos para documentar o uso de suplementos e os suplementos não utilizados foram entregues no momento da admissão para o trabalho de parto e parto. Contagens de comprimidos foram realizadas para verificar a precisão dos calendários.

Considerações sobre o tamanho da amostra: A medida de desfecho primário dos investigadores foi o nível de DHA no soro materno e no sangue do cordão neonatal. Para detectar um aumento de 15% nas proporções de DHA, seria necessário um tamanho de amostra de 19 em cada grupo. Este estudo é uma investigação piloto, projetada para determinar se um estudo maior de suplementação seria viável na população dos investigadores.

Coleta de amostras de sangue Uma amostra de sangue venoso foi coletada de cada participante no momento da inscrição e randomização. O sangue materno foi coletado da fossa antecubital em tubos contendo EDTA e armazenado a -4 graus C. Uma segunda amostra materna foi coletada no momento da admissão para o trabalho de parto de maneira semelhante. Amostras neonatais foram coletadas de forma semelhante no momento do parto, logo após o clampeamento do cordão. Até 72 horas após a coleta, as amostras maternas e neonatais não hemolisadas foram identificadas e centrifugadas por 5 minutos em centrífuga clínica, e a porção de plasma foi extraída e armazenada em frascos de 2 mL a -78 graus C até a análise de ácidos graxos.

Análises de ácidos graxos:

As amostras foram descongeladas à temperatura ambiente e a extração de lipídios foi realizada usando clorofórmio/metanol (2:1, v/v) de acordo com o método de Folch et al (1957). O resíduo lipídico extraído foi pesado após secagem a 45oC sob uma corrente de nitrogênio. O componente fosfolipídio total do soro foi isolado por cromatografia em coluna de ácido silícico (26) da fração lipídica total obtida pela extração de uma alíquota de 1 mL de soro com clorofórmio:metanol (2:1,v/v). Ácidos graxos foram transesterificados para gerar ésteres metílicos usando NaOH 0,5 N em metanol e 14% (p/v) de trifluoreto de boro em metanol (27). O ácido undecenóico (Nu-Check Prep, Elysian, MN) foi adicionado antes da metilação e serviu como padrão interno.

Os ésteres metílicos de ácidos graxos foram quantificados usando um cromatógrafo a gás (6890N, Agilent Technologies, Sunnyvale, CA) equipado com um autoinjetor, um sistema de injeção capilar split/splitless e um detector de ionização de chama conforme descrito anteriormente(28)(). Uma mistura personalizada de ácidos graxos descrita por Loor e Herbein (28) e feita com padrões de éster metílico puro, incluindo AA e DHA, (Nu-Check Prep, Elysian, MN, EUA; Sigma, St. Louis, MO, EUA) foi usada para identificar picos e determinar fatores de resposta para integração com um Chem DataStation (Agilent Technologies, Sunnyvale, CA).