비타민 D 보충 및 남성 불임: 무작위 임상 시험에 대한 CBG 연구

배경 2008년에는 모든 신생아의 약 8%가 보조 생식으로 잉태되었습니다. 세포질 내 정자 주입(ICSI)은 모든 치료의 ~50%를 차지하며 주로 정액의 질이 심하게 저하된 경우에 사용됩니다. 이것은 대부분의 경우 발달 중인 고환에 악영향을 미치는 태아기 요인에 의해 유발될 가능성이 높으므로 성인 남성의 어떤 치료로도 정액의 질을 완전히 정상화할 수 있을 것 같지 않습니다. 그러나 임상적으로 관련성이 적습니다. 보조 생식에 앞서 감소된 정액의 질을 개선할 수 있다면 덜 침습적인 치료가 필요할 것입니다. 예. ICSI보다는 고전적인 체외 수정(IVF), IVF보다는 단순 자궁내 수정(IUI) 또는 IUI보다는 자연 임신.

몇 가지 내분비 인자가 정자 생산 및 성숙과 관련되어 있지만 VD의 잠재적인 역할에 대해서는 알려진 바가 거의 없습니다. VD는 다양한 조직에서 비타민 D 수용체(VDR)의 발현이 여러 가지 다양한 작용과 관련되어 있지만 칼슘 항상성과 골 무기질화의 주요 조절자입니다. VD는 여러 동물 종의 생식에 영향을 미치며 설치류에서 확실하게 나타났습니다. 여기서 수컷 쥐의 VD 결핍은 정자 수를 감소시켰고 VD 결핍 수컷 쥐의 정액으로 수정된 암컷 쥐는 낮은 생식력을 보였습니다. 손상된 생식 기능은 가역적이며 VD를 공급하거나 칼슘 수치를 정상화하여 교정할 수 있습니다. VD 결핍 수컷 쥐와 달리 정자 수 감소, 정자 운동성 감소 및 고환의 조직학적 이상을 보인 VDR 녹아웃 마우스는 칼슘 보충제로 부분적으로만 회복될 수 있습니다.

연구자들은 최근 인간 고환, 사정관 및 성숙한 정자에서 VDR 및 VD 대사 효소의 발현을 보여주었습니다. 조사자들은 이어서 생리학적 농도의 VD가 정자에서 세포내 칼슘을 증가시킨다는 것을 보여주었습니다. VD는 빠른 비게놈 반응을 통해 작용하며, VD가 정자 운동성과 첨체 반응을 유도하기 때문에 VD 유도 칼슘 증가는 정자에 중요할 수 있습니다. 가임 남성과 불임 남성의 정자에 대한 발현 분석 결과 정액의 질이 손상된 남성은 VD를 대사할 수 있는 양이 정상 남성보다 적었으며(p < 0.0005) 단백질 중 하나의 존재가 정액의 질을 나타내는 잠재적 지표가 되었습니다. 또한 조사관은 일반 인구에서 300명의 젊은 남성에 대한 단면 연구를 막 완료했으며 낮은 혈청 VD가 감소된 정자 운동성 및 형태와 관련이 있음을 발견했습니다.

설정, 과학적 계획 및 모집 참가자는 남성 불임 평가를 위해 Rigshospitalet(RH), 성장 및 생식부(GR 부서)에 회부된 남성에 포함됩니다.

설계 이것은 전향적, 이중 맹검, 두 팔 무작위 대조 시험입니다.

개입 그룹: 각 남성은 혈액 및 정액 샘플 채취 후 DXA 스캔을 수행한 후 300,000 IU(7500 ug)의 콜레칼시페롤(D3)을 구두로 한 번 받습니다. 그 후 그들은 3개월 동안 매일 1,400 IU(35 ug) + 500 mg 칼슘의 VD 정제를 받게 됩니다. 4주 후 전화 제어 및 3개월에 임상 제어 및 혈액 샘플링을 수행한 후 추가 2개월 동안 매일 1400 IU VD + 500 mg 칼슘을 계속 섭취합니다. 포함 후 5개월 후 치료가 끝나면 남성은 2개의 정액 샘플을 제공하고 혈액 샘플을 채취하고 DXA 스캔을 수행합니다.

위약을 받는 그룹: VD가 위약으로 대체되더라도 동일한 이벤트 체인을 따를 것입니다.

참가자 약 700-800명의 불임 남성에 대한 스크리닝이 수행됩니다. 조사관은 ~340명의 남성이 제외되고 ~100명의 남성이 참여를 원하지 않는다고 가정합니다. 따라서 300명의 남성이 연구에 포함되고 절반은 활성 VD 치료에 무작위 배정됩니다. 조사관은 동기 부여가 높고 부작용이 없기 때문에 작은 탈락(< 20)을 예상합니다.

분석 및 개입 생식 호르몬 및 성장 인자는 부서에서 분석됩니다. GR의 Rigshospitalet. 첫 번째 혈액 샘플의 분취량은 연구에 포함되기 전에 분석되고 다른 혈액 샘플은 분석 간 변동을 극복하기 위해 시험 종료 시 두 번째 혈액 샘플과 동시에 분석됩니다. 다른 혈청 분석은 Rigshospitalet의 임상 생화학 부서에서 분석됩니다. 정액 분석 및 DXA 스캔은 부서에서 수행됩니다. GR의.

샘플 크기 계산 및 통계 300명의 참가자를 대상으로 한 협회 연구에서 조사관은 VD 상태와 정자 운동성 및 형태 사이의 중요한 용량 반응 관계를 감지할 수 있었고 VD 수준이 낮은 남성과 높은 남성 사이에 상당한 차이가 있음을 발견했습니다. 이러한 결과를 바탕으로 연구자들은 우리의 설정으로 VD의 혈청 수준을 50nM로 증가시킬 수 있다고 가정합니다. 각 그룹에 150명의 남성을 포함하면 정자 운동성과 형태의 15% 변화와 Inhibin B 수치의 25% 변화를 감지할 수 있습니다. 치료 의도 원칙이 사용되고 공변량 분석이 VD의 잠재적 영향을 분석하는 데 사용됩니다.

생물학적 통계학적 분석 모든 분석은 우수임상관리기준(Good Clinical Practice) 가이드라인과 무작위 배정을 받고 제1일에 첫 번째 약물 투여를 받은 모든 환자를 포함하는 치료 의도 모집단의 1차 분석에 따라 수행될 것입니다. 우리는 3가지 방법으로 데이터를 분석할 것입니다. 1차 분석은 무작위 비타민 D 및 칼슘 용량 그룹 지정에 따라 진행됩니다. 2차 분석은 미리 정의된 1차 및 2차 종점과 관련하여 하위 그룹 분석에 따라 남성을 계층화하는 것을 기반으로 하며, 마지막 분석은 용량-반응 관계를 설명하려고 시도합니다. 연구의 통계학자였으며 연구 그룹 할당을 알지 못하는 저자(JHP)가 1차 분석을 수행합니다.

데이터 분석 및 품질 이 프로토콜의 1차 종점은 정액 품질, 특히 정자 운동성에 따른 정자 농도, 형태 및 정액 부피의 변화입니다. 여러 2차 평가변수가 존재하지만 초기 조사의 초점은 정자 DFI, 임신율, Inhibin B, 비타민 D 및 칼슘 항상성과 같은 2차 평가변수의 변화에 ​​있습니다. 90일 방문 후 150일 이전에 참여를 종료한 피험자는 90일까지 데이터 분석에 포함됩니다. 한 번의 정액 샘플만 제공하거나 방문 시 데이터가 누락된 남성은 여전히 ​​분석에 포함됩니다. 정액 분석 전 최대 3개월 전에 열이 있는 남성은 잠재적 교란자로 간주됩니다. 프로토콜의 기준을 충족하지 않는 남성은 분석에서 제외됩니다. 그런 다음 해당 값은 분석을 위해 이월됩니다. 5%의 유의 수준이 사용됩니다. 1차 분석을 위해 Bonferronu-Holm p-값 보정이 추가로 계산됩니다. 2차 분석의 경우 다중 테스트 수정이 사용되지 않습니다. 대신 결과는 여러 테스트 상황을 고려하여 논의됩니다.

1. 위약 대 활성 물질 간의 분석 위약 대 비타민 D + 칼슘 그룹 분석 간: 첫 번째 단계는 위약 대 비타민 D + 칼슘 두 그룹의 주요 결과 변화를 비교하는 것입니다. 이 분석은 그룹 간에 상당한 차이가 있는지 보여줍니다. 반복적으로 측정된 결과의 경우 그룹 간 각 결과의 예상 기울기 또는 변화율을 비교해야 합니다. 혼합 모델을 사용하면 매개변수 추정에 적절하게 통합하기 위해 각 남성의 반복 관찰 기준선-1일 90일-150일 간의 상관관계를 허용합니다. 기준선 및 150일째에 측정된 모든 종점에 대해 쌍체 t-테스트를 ​​사용하여 그룹 간에 상당한 차이가 있는지 평가하고 각 그룹 내의 평균 변화가 0과 크게 다른지 여부를 결정합니다. 두 경우 모두 모델 가정을 충족하기 위해 필요에 따라 데이터가 변환됩니다. 그 후, 계절, BMI, 흡연, 금욕 기간, 사정에서 운동성 평가까지의 시간, 열 등과 같은 관련 교란변수와 함께 다중 회귀를 사용하여 동일한 분석을 수행하여 결과가 변경되는지 확인합니다. 측정할 수 없는 결과에 대해 1일, 90일 및 150일에 t-테스트 또는 기타 파라메트릭 테스트와 비교하여 Wilcoxon Mann-Whitney 테스트와 같은 비모수 테스트를 사용하여 그룹을 비교합니다. 이진법 결과의 경우 관련 교란 요인에 대한 조정과 함께 조건부 로지스틱 회귀 분석을 통해 두 그룹 간에 데이터를 비교할 것입니다(유의하게 p<0.05 관련되는 것으로 정의됨).

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2. 하위 그룹으로 계층화한 후 분석 대상자는 BMI, 칼슘, 계절, 정액의 질, 뼈 인자, BMD 또는 비타민 D 수준에 따라 그룹화되고 위약 대 활성 물질의 효과는 90일 및 150일에 평가됩니다. 하위 그룹 분석은 정상적인 임상 실습 및 임상(25OHD < 25nmol/l, BMI <25, 25-30, >30 등), 3분위수/4분위수/5분위수 또는 최고/최저에 따라 적절한 그룹으로 계층화됩니다. 기준선에 남아있는 것과 비교.
3. 비타민 D와 칼슘의 변화를 비교하기 위한 데이터 분석 비타민 D와 칼슘의 변화 사이의 용량-반응 관계와 위약군과 활성 물질군 사이 및 모든 남성의 1차 및 2차 평가변수를 비교할 것입니다. 시작부터 90일 및 150일까지 순환하는 비타민 D 전구체, 칼슘 이온, 총 칼슘 및 알부민 보정 칼슘에 대한 델타 값을 결정하고 그 차이를 1차 및 2차 종료점에서 관찰된 변화와 비교할 것입니다. 우리는 서로 다른 끝점 사이에 용량-반응 곡선의 모양에 차이가 없을 것으로 예상합니다. 즉, 적어도 데이터 변환 후에는 평행하고 선형이 될 것입니다. 그런 다음 계절, BMI, 흡연, 금욕 기간, 사정에서 운동성 평가까지의 시간 등과 같은 관련 혼란 요소를 사용하여 동일한 분석을 수행하여 결과가 변경되는지 확인합니다.

검진 및 시간 코스 부서에서 조사를 받는 남성. 불임으로 인한 GR의 경우 연구 적격성을 위해 선별될 것이며, 참여 기준을 충족하는 사람들은 통보를 받을 것이며, 그들이 동의하는 경우 VD 또는 위약을 사용한 적극적인 치료에 할당될 것입니다. 할당은 무작위화 실패로 인한 불균형한 그룹화를 피하기 위해 minim을 사용하여 최소화하여 수행됩니다. 다음 변수가 균형을 이룰 것입니다: 정자 농도, BMI, 혈청 inhibin-B 및 VD 수준.

윤리 및 부작용 모든 환자는 연구에 초대되기 전에 조사를 완료합니다. 그들은 잠재적인 부작용, 중독 징후에 대해 통보받게 되며 아무런 결과 없이 언제든지 재판을 떠날 수 있습니다. 시험은 "우수한 임상 관행"에 따라 진행됩니다. VD 치료는 사실상 부작용이 없으며 중독의 위험은 VD의 상대적으로 낮은 용량과 VD 및 칼슘 상태를 면밀히 모니터링하는 제안된 환경에서 거의 존재하지 않습니다. 참가자는 구강 VC/위약에 노출되고 2개의 DXA 스캔에 노출되며 3개의 추가 혈액 샘플을 채취하고 2개의 추가 정액 샘플을 제공합니다. 모든 참가자는 VD 상태에 따라 정보를 받고 상담을 받습니다.

결과의 출판 긍정적이든 부정적이든 모든 결과는 동료 검토 과학 저널에 제출됩니다. 데이터는 연속적으로 획득되어 통계 데이터베이스로 전송됩니다.

실용적인 문제 GR 부서는 매년 500명 이상의 불임 남성을 조사합니다. 참가자는 해당 그룹에 포함됩니다. 이 부서는 임상 생화학 부서에서 분석할 일부 혈액 샘플의 측정을 제외하고 모든 조사를 수행할 수 있는 임상 전문 지식, 경험 및 역량을 갖추고 있습니다. VD 및 위약 경구 현탁액은 Glostrup apotek에서 구입하고, VD 및 위약 정제는 Ferrosan, MD Martin에서 구입합니다. 연구자들은 생물 통계학 J.H. 부교수와 협력하고 있습니다. 코펜하겐 대학교 Petersen.