23가 폐렴구균 협막 다당류 백신(Pneumovax)에 대한 소아 면역반응의 역학

자세한 내용은 다음과 같습니다.

1. 연구 사이트 Kilifi 지역 병원.
2. 모집단 및 샘플링 연구 코호트 관찰 종료 시(24개월령) 살아 있고 킬리피 지구에 거주하는 Kilifi 출생 코호트의 사례 및 대조군을 대상으로 23세 폐렴구균 협막 다당류(1, 6B, 14, 19F, 23F)의 서로 다른 면역학적 프로파일을 나타내기 위해 선택된 5개의 협막 항원에 대한 항피막 항체 반응의 역학을 비교하기 위해 원자가 폐렴구균 다당류 백신(Pneumovax 23).

3. 모집 잠재적인 연구 피험자가 식별되고 그들의 어머니에게 접근하여 HIV 검사를 받아야 하는 필요성을 포함하여 연구에 대해 알리고 참여하도록 초대합니다. 현장 조사자는 연구의 근거와 절차를 설명하고 어머니에게 가져갈 정보 시트/동의서를 줄 것입니다. 산모는 또한 예약 전표와 예약 날짜에 병원에 돌아올 수 있는 요금을 받게 됩니다. 약속은 병동 1에서 이루어집니다. 산모가 돌아오면 현지 조사원은 동의서를 다시 작성하고 산모에게 서명을 요청할 것입니다. 어머니는 상담을 받고 자녀는 HIV 검사를 받게 됩니다. 참가자가 긍정적인 경우 자녀는 Kilifi Family Clinic으로 보내집니다. 참가자가 음성인 경우 어린이는 Pneumovax(23가 다당류 백신)의 단일 용량을 받게 됩니다. 산모는 혈액 검사를 위한 2회의 추가 약속 일정을 받게 되며 방문할 때마다 병원 왕복 요금은 KEMRI에서 제공합니다. 예방 접종을 받고 이후에 참석하지 않는 연구 피험자는 FW가 오토바이를 타고 방문하여 바로 다음 날 약속을 지키도록 초대합니다. 연령, 성별, 집에 있는 형제자매 수, 요리 연기 노출, 간접 흡연, 최근 병원 입원과 같은 환경 노출에 관한 정보가 수집됩니다.

   사례 정의:

   IPD, ARI 또는 ​​방사선 사진 폐렴 및 뇌수막염 사례는 다음 증후군 정의 중 적어도 하나를 충족하는 생후 23개월 사이의 코호트 구성원에게 발생하고 입원이 필요한 질병의 에피소드로 정의됩니다. 침습성 폐렴구균 질병은 다음 기준 중 하나에 대한 양성 결과로 정의됩니다. (i) 혈액, CSF, 폐, 활액을 포함하지만 중이액 및 외부 안구 면봉을 제외한 모든 정상적인 무균 부위에서 S. pneumoniae 배양. 또는 (ii) 적어도 5일 간격으로 얻은 2개의 혈청 샘플에서 ELISA에 의해 측정된 항-PsaA 항체 농도의 2배 증가 21 및 라텍스 응집 분석에 의해 검출된 폐렴구균 협막 다당류의 소변 내 존재 46. ARI는 급성(<2주) 기침 또는 호흡 곤란의 과거력과 호흡률 증가(12개월 미만 어린이의 경우 ≥50/min, 12-23개월 어린이의 경우 ≥40/min)로 정의됩니다. ARI는 추가로 흉부 함몰이 있는 경우 중증이며 추가로 중추 청색증 및 쇠약 또는 음주 불능이 있는 경우 매우 중증입니다 47.

   RADIOGRAPHIC PNEUMONIA는 방사선 경화가 동반된 ARI로 정의됩니다. 모든 방사선 사진은 연구 의사와 컨설턴트 방사선 전문의에 의해 평가됩니다. "방사선 경화"는 두 관찰자가 문서화한 경우에만 존재하는 것으로 간주됩니다.

   수막염: 수막염은 IPD에 대한 추가 진단 테스트의 사용을 목표로 정의되고 있습니다. 폐렴구균성 수막염에 대해 민감하지만 반드시 고도로 특이적인 것은 아닌 정의가 필요합니다. "뇌수막염"이라는 임상적 진단을 받고 KEMRI 고의존 병동으로 이송되는 모든 어린이, 표준 수막염 항생제 요법을 시작한 모든 어린이 또는 CSF 백혈구 수가 상승하거나 CSF/혈장 포도당 비율이 0.5 미만인 어린이는 본 연구의 목적상 뇌수막염의 사례로 간주됩니다.

   질병의 단일 에피소드는 하나, 둘, 셋 또는 모든 사례 정의를 충족할 수 있습니다. IPD의 정의는 사례-대조군 연구에 사용하기 위한 것입니다. 다른 정의는 중증 ARI 및 방사선 사진 폐렴의 발병률 및 병인 연구에 사용하고 IPD가 의심되는 환자의 조사 흐름을 안내하기 위한 것입니다.

4. 실험실 방법 ANTI-CAPSULAR IGG ELISA. Quataert 등의 방법. 사소한 수정 13,14와 함께 사용됩니다. 평평한 바닥 마이크로타이터 플레이트(Nunc Maxisorb, Nunc, Finland)를 0.01M 인산염 완충 식염수(PBS), pH 7.2에서 5시간 동안 20 μg/ml 정제 캡슐 다당류(American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA)로 코팅합니다. 37oC에서 보관한 다음 4oC에서 보관합니다. 플레이트는 각 단계 후에 0.05% Tween-20이 포함된 PBS, pH7.2로 5회 세척됩니다. 시험 혈청은 10 μg/ml C-다당류(Statens Seruminstitut, Copenhagen, Denmark) 및 20 μg/ml 혈청형 22F의 다당류(American Type Culture 수집) 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 시험 혈청을 8개의 3배 희석액으로 이중으로 플레이트에 분주하고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 표준 참조 혈청(89SF, Dr Carl Frasch, FDA, USA) 및 대조군(모든 백신 혈청형에 대해 우수한 반응을 보이는 개인의 백신접종 후 혈청)을 7개의 3배 희석으로 모든 플레이트에서 분석합니다. 결합된 항체는 실온에서 2시간 배양에서 알칼리성 포스파타제 결합된 염소 항-인간 IgG로 표지됩니다. 결합된 효소는 실온에서 2시간 동안 디에탄올아민 기질(Sigma) 중 p-니트로페닐 포스페이트로 시각화되고 반응은 3M NaOH로 중지됩니다. 플레이트는 620nm의 기준 필터를 사용하여 450nm의 파장에서 ELISA 판독기로 읽습니다. 결과는 4-파라미터 로지스틱-로그 곡선 맞춤 프로그램(ELISA v1.11, 질병 통제 및 예방 센터(Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA))으로 분석하고 참조 혈청의 알려진 농도와 관련하여 표현합니다.

   ANTI-PSAA에 대한 ELISA: The method of Tharpe et al. 혈청 쌍 또는 삼중체에 사용됩니다. 평평한 바닥 마이크로타이터 플레이트(Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA)는 4oC에서 16시간 동안 0.01M 인산염 완충 식염수(PBS), pH 7.2에서 2.5㎍/ml의 정제된 PsaA로 코팅됩니다. PsaA는 PsaA를 코딩하는 유전자의 재조합 및 대장균에서의 발현에 의해 생성된다. 플레이트를 단순히 비울 때 차단을 제외하고 각 단계 후에 플레이트를 0.05% Tween-20을 포함하는 PBS, pH7.2로 4회 세척합니다. 플레이트는 PBS에서 1% 소 혈청 알부민(EIA 등급, Sigma Chemical Co., St Louise, MO) 10mg/L로 37oC에서 1시간 동안 차단됩니다. 시험 혈청은 1% 소 혈청 알부민, 0.05% Tween-20 PBS에 희석하고 37oC에서 1시간 동안 배양합니다. 테스트 혈청은 8개의 2배 희석액으로 이중으로 분석되고 한 환자의 모든 혈청은 동일한 플레이트에서 분석됩니다. 높은 항-PsaA 농도의 참조 혈청 및 대조군(Sandoglobulin, Sandoz, Switzerland)을 7개의 2배 희석액으로 모든 플레이트에서 검정하였다. 결합된 항체는 37oC에서 2시간 배양에서 양고추냉이 퍼옥시다제(클론 PH6043, Hybridoma Reagent laboratories, Baltimore, MD)에 접합된 마우스 단일클론 항-인간 IgG-Fc로 표지됩니다. 결합된 효소를 실온에서 30분 동안 테트라메틸벤지딘(TMB 1-성분 마이크로웰 퍼옥시다제 기질, Kirkegaard and Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD)으로 가시화하고 반응을 0.18M 황산으로 정지시켰다. 플레이트는 620nm의 기준 필터를 사용하여 450nm의 파장에서 ELISA 판독기로 읽습니다. 결과는 4-파라미터 로지스틱-로그 곡선 맞춤 프로그램(ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA)으로 분석하고 기준 혈청 농도의 백분율로 ELISA 단위로 표시합니다.

5. 데이터 저장 모집 및 후속 양식은 잠긴 연구실에 보관됩니다. 양식의 정보는 Filemaker Pro 5.5를 사용하여 컴퓨터에 입력되고 연구 번호 및 방문 시 실험실 데이터와 연결됩니다.