Dynamiek van de immuunrespons bij kinderen op het 23-valente pneumokokkencapsulaire polysaccharidevaccin (Pneumovax)

De details zijn zoals hieronder beschreven:

1. Studieplaats Kilifi District Hospital.
2. Studiepopulatie en steekproeven Gevallen en controles uit het Kilifi Birth Cohort die aan het einde van de cohortobservatie (op de leeftijd van 24 maanden) in leven zijn en in het Kilifi District blijven wonen, zullen worden gevaccineerd met een enkele subcutane dosis van 0,5 ml van 23 valent pneumokokkenpolysaccharidevaccin (Pneumovax 23) om de dynamiek van de anticapsulaire antilichaamrespons op 5 capsulaire antigenen te vergelijken die zijn gekozen om verschillende immunologische profielen van de pneumokokkencapsulaire polysacchariden weer te geven (1, 6B, 14, 19F, 23F).

3. Werving Potentiële proefpersonen zullen worden geïdentificeerd en hun moeders zullen worden benaderd, geïnformeerd over de studie, inclusief de noodzaak om HIV-testen te ondergaan, en uitgenodigd om deel te nemen. Een veldwerker legt de grondgedachte en procedures voor het onderzoek uit en geeft de moeder een informatieblad/toestemmingsformulier om mee te nemen. De moeder krijgt ook een afspraakbriefje en een ritje om op de afspraakdatum terug te keren naar het ziekenhuis. Afspraken zijn op afdeling 1. Bij terugkomst van de moeder neemt de veldwerker het toestemmingsformulier nogmaals door en vraagt ​​de moeder om te tekenen. De moeder krijgt advies en haar kind wordt op HIV getest. Als de deelnemer positief is, wordt het kind doorverwezen naar de Kilifi Family Clinic. Als de deelnemer negatief is, krijgt het kind de enkelvoudige dosis Pneumovax (23-valent polysaccharidevaccin). De moeder krijgt een schema met nog 2 afspraken voor bloedonderzoek en bij elk bezoek wordt de rit van en naar het ziekenhuis verzorgd door KEMRI. Proefpersonen die zijn gevaccineerd en vervolgens niet komen, worden door FW op een motor bezocht om hen uit te nodigen om de volgende dag hun afspraken na te komen. Er zal informatie worden verzameld over leeftijd, geslacht en blootstelling aan het milieu, zoals: aantal oudere en jongere broers en zussen in huis, blootstelling aan kookrook, passief roken van sigaretten, recente ziekenhuisopname.

   Definitie van gevallen:

   Gevallen van IPD, ARI of radiografische pneumonie en meningitis zullen worden gedefinieerd als episoden van ziekte, waarvoor opname in het ziekenhuis nodig is, die voorkomen bij cohortleden tussen de geboorte en de leeftijd van 23 maanden die ook voldoen aan ten minste een van de volgende syndroomdefinities: INVASIEVE PNEUMOKOCCALE ZIEKTE wordt gedefinieerd door een positief resultaat op EEN VAN DE volgende criteria: (i) kweek van S. pneumoniae op een normaal steriele plaats, inclusief bloed, CSF, long, synoviaal vocht, maar exclusief middenoorvocht en uitstrijkjes van de uitwendige ogen. OF (ii) Tweevoudige stijging van anti-PsaA-antilichaamconcentratie gemeten met ELISA in twee serummonsters verkregen met een tussenpoos van ten minste 5 dagen 21 EN aanwezigheid in urine van pneumokokkencapsulair polysaccharide gedetecteerd met latexagglutinatieassay 46. ARI wordt gedefinieerd door een acute (<2 weken) voorgeschiedenis van hoesten of ademhalingsmoeilijkheden gepaard gaande met een verhoogde ademhalingsfrequentie (≥50/min bij een kind <12 maanden, ≥40/min bij een kind van 12-23 maanden). ARI is ernstig als er daarnaast sprake is van intrekking van de borst, en zeer ernstig als er daarnaast sprake is van centrale cyanose en uitputting of onvermogen om te drinken 47.

   RADIOGRAFISCHE PNEUMONIE wordt gedefinieerd als ARI vergezeld van radiografische consolidatie. Alle röntgenfoto's worden beoordeeld door zowel studieartsen als door een adviserende radioloog. "Radiografische consolidatie" wordt alleen als aanwezig beschouwd als deze door beide waarnemers is gedocumenteerd.

   MENINGITIS: Meningitis wordt gedefinieerd om het gebruik van aanvullende diagnostische tests voor IPD te targeten. Er is een definitie nodig die gevoelig is maar niet noodzakelijkerwijs zeer specifiek voor pneumokokkenmeningitis. Elk kind dat wordt overgeplaatst naar de KEMRI-afdeling voor hoge afhankelijkheid met een klinische diagnose van "meningitis", elk kind dat is gestart met het standaard antibioticumregime voor meningitis, of elk kind met een verhoogd aantal leukocyten in het hersenvocht of een CSF/plasmaglucoseverhouding van <0,5 zal worden behandeld. beschouwd als een geval van meningitis voor de doeleinden van deze studie.

   Een enkele ziekte-episode kan voldoen aan één, twee, drie of alle casusdefinities. De definitie van IPD is voor gebruik in de case-control studie. De andere definities zijn bedoeld voor gebruik bij de studie van de incidentie en etiologie van ernstige ARI en radiografische pneumonie en om de stroom van onderzoeken van patiënten met verdenking op IPD te begeleiden.

4. Laboratoriummethoden ANTI-CAPSULAIRE IGG ELISA. De methode van Quataert et al. zal worden gebruikt met kleine aanpassingen 13,14. Microtiterplaten met vlakke bodem (Nunc Maxisorb, Nunc, Finland) worden gecoat met 20 μg/ml gezuiverd capsulair polysaccharide (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, VS) in 0,01 M fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), pH 7,2, gedurende 5 uur bij 37oC en daarna bewaard bij 4oC. De platen worden na elke stap vijf keer gewassen met PBS, pH 7,2, met 0,05% Tween-20. Testsera worden 1:50 verdund in 1% runderserumalbumine, 0,05% Tween-20 in PBS met 10 μg/ml C-polysaccharide (Statens Seruminstitut, Kopenhagen, Denemarken) en 20 μg/ml polysaccharide van serotypes 22F (American Type Culture Collectie) gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Testsera worden in duplo op de plaat verdeeld in 8 drievoudige verdunningen en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. Een standaardreferentieserum (89SF, Dr. Carl Frasch, FDA, VS) en een controle (serum na vaccinatie van een persoon met goede reacties op alle vaccinserotypen) worden op elke plaat getest in zeven drievoudige verdunningen. Gebonden antilichaam wordt gelabeld met alkalische fosfatase-geconjugeerd geiten-anti-humaan IgG in een incubatie van 2 uur bij kamertemperatuur. Gebonden enzym wordt zichtbaar gemaakt met p-nitrofenylfosfaat in diethanolaminesubstraat (Sigma) gedurende 2 uur bij kamertemperatuur en de reactie wordt gestopt met 3M NaOH. Platen worden gelezen door een ELISA-lezer bij een golflengte van 450 nm met een referentiefilter van 620 nm. Resultaten worden geanalyseerd door een 4-parameter logistiek-log curve fit-programma (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) en uitgedrukt in relatie tot de bekende concentraties van het referentieserum.

   ELISA VOOR ANTI-PSAA: de methode van Tharpe et al. zal worden gebruikt op paren of triplo's van sera. Microtiterplaten met vlakke bodem (Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA) worden bekleed met 2,5 µg/ml gezuiverd PsaA in 0,01 M fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), pH 7,2, gedurende 16 uur bij 4°C. PsaA wordt geproduceerd door recombinatie en expressie in Escherichia coli van het gen dat codeert voor PsaA. Platen worden vier keer gewassen met PBS, pH 7,2, met 0,05% Tween-20 na elke stap, behalve blokkeren, wanneer de platen eenvoudig worden geleegd. Platen worden gedurende 1 uur bij 37°C geblokkeerd met 1% runderserumalbumine (EIA Grade, Sigma Chemical Co., St. Louise, MO) 10 mg/L in PBS. Testsera worden verdund in 1% runderserumalbumine, 0,05% Tween-20 in PBS en gedurende 1 uur bij 37°C geïncubeerd. Testsera worden in tweevoud getest in 8 tweevoudige verdunningen en alle sera van één patiënt worden op dezelfde plaat getest. Een referentieserum met hoge anti-PsaA-concentratie en een controle (Sandoglobuline, Sandoz, Zwitserland) worden op elke plaat getest in zeven 2-voudige verdunningen. Gebonden antilichaam wordt gelabeld met muis monoklonaal anti-humaan IgG-Fc geconjugeerd aan mierikswortelperoxidase (kloon PH6043, Hybridoma Reagent laboratories, Baltimore, MD) in een 2 uur durende incubatie bij 37°C. Gebonden enzym wordt gevisualiseerd met tetramethlybenzidine (TMB 1-component microwell peroxidase substraat, Kirkegaard en Perry Laboratories Inc., Gaithersburg, MD) gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur en de reactie wordt gestopt met 0,18 M zwavelzuur. Platen worden gelezen door een ELISA-lezer bij een golflengte van 450 nm met een referentiefilter van 620 nm. Resultaten worden geanalyseerd door een 4-parameter logistiek-log curve fit-programma (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) en uitgedrukt in ELISA-eenheden als een percentage van de concentratie van het referentieserum.

5. Gegevensopslag Wervings- en vervolgformulieren worden bewaard in een afgesloten studielokaal. Informatie uit de formulieren wordt ingevoerd in een computer met behulp van Filemaker Pro 5.5 en wordt gekoppeld aan studienummer en bezoek aan de laboratoriumgegevens.