Dinamica della risposta immunitaria nei bambini al vaccino polisaccaridico capsulare pneumococcico 23-valente (Pneumovax)

I dettagli sono quelli descritti di seguito:

1. Sito di studio Kilifi District Hospital.
2. Popolazione in studio e campionamento I casi e i controlli della Kilifi Birth Cohort che sono vivi alla fine dell'osservazione della coorte (all'età di 24 mesi) e rimarranno residenti nel distretto di Kilifi saranno vaccinati con una singola dose sottocutanea da 0,5 ml di 23 vaccino polisaccaridico pneumococcico valente (Pneumovax 23) per confrontare la dinamica della risposta anticorpale anti-capsulare a 5 antigeni capsulari scelti per rappresentare diversi profili immunologici dei polisaccaridi capsulari pneumococcici (1, 6B, 14, 19F, 23F).

3. Reclutamento I potenziali soggetti dello studio saranno identificati e le loro madri saranno avvicinate, informate sullo studio, compresa la necessità di sottoporsi al test HIV, e invitate a partecipare. Un operatore sul campo spiegherà le motivazioni e le procedure dello studio e consegnerà alla madre un foglio informativo/modulo di consenso da portare via. Alla madre verrà inoltre consegnato un tagliando per l'appuntamento e un biglietto per il rientro in ospedale il giorno dell'appuntamento. Gli appuntamenti saranno al reparto 1. Quando la madre ritorna, l'operatore sul campo esaminerà nuovamente il modulo di consenso e chiederà alla madre di firmare. La madre sarà consigliata e suo figlio sarà testato per l'HIV. Se il partecipante è positivo, il bambino verrà indirizzato alla Kilifi Family Clinic. Se il partecipante è negativo, il bambino riceverà la singola dose di Pneumovax (vaccino polisaccaridico 23valente). Alla madre verrà dato un programma di 2 ulteriori appuntamenti per gli esami del sangue e ad ogni visita la tariffa da e per l'ospedale sarà fornita da KEMRI. I soggetti dello studio che sono stati vaccinati e successivamente non si presentano saranno visitati da FW in motocicletta per invitarli a rispettare gli appuntamenti il ​​giorno successivo. Verranno raccolte informazioni riguardanti l'età, il sesso e le esposizioni ambientali come: numero di fratelli maggiori e minori in casa, esposizione al fumo di cucina, fumo passivo di sigaretta, recente ricovero in ospedale.

   Definizione dei casi:

   I casi di IPD, ARI o polmonite radiografica e meningite saranno definiti come episodi di malattia, che richiedono il ricovero in ospedale, che si verificano tra i membri della coorte tra la nascita e l'età di 23 mesi che soddisfano anche almeno una delle seguenti definizioni di sindrome: PNEUMOCOCCO INVASIVA La MALATTIA è definita da un risultato positivo su UNO DEI seguenti criteri: (i) coltura di S. pneumoniae da qualsiasi sito normalmente sterile inclusi sangue, liquido cerebrospinale, polmone, liquido sinoviale ma escludendo il liquido dell'orecchio medio ei tamponi oculari esterni. OPPURE (ii) Aumento di due volte della concentrazione di anticorpi anti-PsaA misurata mediante ELISA in due campioni di siero ottenuti ad almeno 5 giorni di distanza 21 E presenza nelle urine di polisaccaride capsulare pneumococcico rilevato mediante test di agglutinazione al lattice 46. L'ARI è definita da una storia acuta (<2 settimane) di tosse o difficoltà respiratorie accompagnata da un aumento della frequenza respiratoria (≥50/min in un bambino <12 mesi, ≥40/min in un bambino di 12-23 mesi). L'ARI è grave se c'è, in aggiunta, ritiro del torace, e molto grave se c'è, in aggiunta, cianosi centrale e prostrazione o incapacità di bere 47.

   La PNEUMONIA RADIOGRAFICA è definita come ARI accompagnata da consolidamento radiografico. Tutte le radiografie saranno valutate sia dai medici dello studio che da un radiologo consulente. Il "consolidamento radiografico" sarà considerato presente solo se documentato da entrambi gli osservatori.

   MENINGITE: la meningite è in fase di definizione per indirizzare l'uso di ulteriori test diagnostici per l'IPD. È richiesta una definizione che sia sensibile ma non necessariamente altamente specifica per la meningite pneumococcica. Qualsiasi bambino che viene trasferito all'unità ad alta dipendenza del KEMRI con una diagnosi clinica di "meningite", qualsiasi bambino che ha iniziato il regime antibiotico standard per la meningite o qualsiasi bambino con un'elevata conta leucocitaria nel liquido cerebrospinale o un rapporto glucosio plasmatico/liquido inferiore a 0,5 sarà considerato come un caso di meningite ai fini di questo studio.

   Un singolo episodio di malattia può soddisfare una, due, tre o tutte le definizioni di caso. La definizione di IPD è per l'uso nello studio caso-controllo. Le altre definizioni servono per lo studio dell'incidenza e dell'eziologia delle ARI gravi e della polmonite radiografica e per guidare il flusso delle indagini sui pazienti con sospetta IPD.

4. Metodi di laboratorio ELISA ANTI-CAPSULAR IGG. Il metodo di Quataert et al. verrà utilizzato con piccole modifiche 13,14. Le piastre per microtitolazione a fondo piatto (Nunc Maxisorb, Nunc, Finlandia) sono rivestite con 20 μg/ml di polisaccaride capsulare purificato (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA) in soluzione salina tamponata con fosfato 0,01 M (PBS), pH 7,2, per 5 ore a 37°C e poi conservato a 4°C. Le piastre vengono lavate cinque volte con PBS, pH 7,2, con Tween-20 allo 0,05% dopo ciascuna fase. I sieri del test sono diluiti 1:50 in 1% albumina di siero bovino, 0,05% Tween-20 in PBS contenente 10 μg/ml di polisaccaride C (Statens Seruminstitut, Copenhagen, Danimarca) e 20 μg/ml di polisaccaride dei sierotipi 22F (American Type Culture Raccolta) incubate per 30 minuti a temperatura ambiente. I sieri del test vengono aliquotati sulla piastra in duplicato in 8 diluizioni triple e incubati a temperatura ambiente per 1 ora. Un siero di riferimento standard (89SF, Dr Carl Frasch, FDA, USA) e un controllo (siero post-vaccinazione di un individuo con buone risposte a tutti i sierotipi di vaccino) vengono analizzati su ogni piastra in sette diluizioni triple. L'anticorpo legato viene marcato con anti-IgG umane di capra coniugate con fosfatasi alcalina in un'incubazione di 2 ore a temperatura ambiente. L'enzima legato viene visualizzato con p-nitrofenil fosfato in substrato di dietanolammina (Sigma) per 2 ore a temperatura ambiente e la reazione viene fermata con NaOH 3M. Le piastre vengono lette da un lettore ELISA a una lunghezza d'onda di 450 nm con un filtro di riferimento di 620 nm. I risultati vengono analizzati mediante un programma di adattamento della curva logaritmica a 4 parametri (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) ed espressi in relazione alle concentrazioni note del siero di riferimento.

   ELISA PER ANTI-PSAA: Il metodo di Tharpe et al. saranno utilizzati su coppie o triplicati di sieri. Le piastre per microtitolazione a fondo piatto (Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA) sono rivestite con 2,5 μg/ml di PsaA purificato in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) 0,01 M, pH 7,2, per 16 ore a 4°C. PsaA è prodotto dalla ricombinazione ed espressione in Escherichia coli del gene che codifica per PsaA. Le piastre vengono lavate quattro volte con PBS, pH 7,2, con Tween-20 allo 0,05% dopo ciascuna fase eccetto il blocco, quando le piastre vengono semplicemente svuotate. Le piastre vengono bloccate per 1 ora a 37°C con albumina di siero bovino all'1% (grado EIA, Sigma Chemical Co., St Louise, MO) 10 mg/L in PBS. I sieri del test vengono diluiti in albumina di siero bovino all'1%, Tween-20 allo 0,05% in PBS e incubati per 1 ora a 37°C. I sieri del test vengono analizzati in duplicato in 8 diluizioni doppie e tutti i sieri di un paziente vengono analizzati sulla stessa piastra. Un siero di riferimento ad alta concentrazione di anti-PsaA e un controllo (Sandoglobulin, Sandoz, Svizzera) vengono dosati su ogni piastra in sette diluizioni doppie. L'anticorpo legato è marcato con IgG-Fc monoclonale di topo coniugato con perossidasi di rafano (clone PH6043, laboratori Hybridoma Reagent, Baltimora, MD) in un'incubazione di 2 ore a 37°C. L'enzima legato viene visualizzato con tetrametilbenzidina (substrato di perossidasi micropozzetto TMB a 1 componente, Kirkegaard e Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD) per 30 minuti a temperatura ambiente e la reazione viene fermata con acido solforico 0,18 M. Le piastre vengono lette da un lettore ELISA a una lunghezza d'onda di 450 nm con un filtro di riferimento di 620 nm. I risultati vengono analizzati mediante un programma di adattamento della curva logaritmica a 4 parametri (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) ed espressi in unità ELISA come percentuale della concentrazione del siero di riferimento.

5. Conservazione dei dati I moduli di reclutamento e di follow-up saranno conservati in un ufficio studio chiuso a chiave. Le informazioni dei moduli verranno inserite in un computer utilizzando Filemaker Pro 5.5 e saranno collegate al numero dello studio e alla visita con i dati del laboratorio.