Dynamiken i immunsvaret hos barn på det 23-valenta pneumokockkapselpolysackaridvaccinet (Pneumovax)

Detaljerna är som beskrivs nedan:

1. Studieplats Kilifi District Hospital.
2. Studiepopulation och provtagning Fall och kontroller från Kilifi Birth Cohort som är vid liv vid slutet av kohortobservationen (vid 24 månaders ålder) och som förblir bosatta i Kilifi District kommer att vaccineras med en 0,5 ml subkutan dos på 23 valent pneumokockpolysackaridvaccin (Pneumovax 23) för att jämföra dynamiken hos det antikapsulära antikroppssvaret mot 5 kapselantigener valda för att representera olika immunologiska profiler för pneumokockkapselpolysackariderna (1, 6B, 14, 19F, 23F).

3. Rekrytering Potentiella försökspersoner kommer att identifieras och deras mödrar kommer att kontaktas, informeras om studien, inklusive nödvändigheten av att genomgå HIV-testning, och bjudas in att delta. En fältarbetare kommer att förklara motiveringen och procedurerna för studien och kommer att ge mamman ett informationsblad/samtyckesformulär att ta bort. Mamman kommer också att få en mötessedel och en biljett för att återvända till sjukhuset på mötesdatumet. Möten kommer att ske på avdelning 1. När mamman kommer tillbaka kommer fältarbetaren att gå igenom samtyckesformuläret igen och be mamman att skriva under. Mamman kommer att rådfrågas och hennes barn kommer att hiv-testas. Om deltagaren är positiv kommer barnet att remitteras till Kilifi Family Clinic. Om deltagaren är negativ kommer barnet att få engångsdosen Pneumovax (23 valent polysackaridvaccin). Mamman kommer att få ett schema med ytterligare 2 tider för blodprov och vid varje besök kommer biljetten till och från sjukhuset att tillhandahållas av KEMRI. Försökspersoner som har vaccinerats och som därefter inte kommer kommer att få besök av FW på motorcykel för att bjuda in dem att hålla sina tider redan nästa dag. Information kommer att samlas in om ålder, kön och miljöexponering såsom: antal äldre och yngre syskon i huset, exponering för matlagningsrök, passiv cigarettrökning, nyligen inlagd sjukhus.

   Definition av fall:

   Fall av IPD, ARI eller radiografisk lunginflammation och hjärnhinneinflammation kommer att definieras som episoder av sjukdom, som kräver inläggning på sjukhus, som inträffar hos kohortmedlemmar mellan födseln och 23 månaders ålder som också uppfyller minst en av följande syndromdefinitioner: INVASIVA PNEUMOCOCCAL SJUKDOM definieras av ett positivt resultat på NÅGOT av följande kriterier: (i) odling av S. pneumoniae från vilket som helst normalt sterilt ställe inklusive blod, CSF, lungor, ledvätska men exklusive mellanörat och externa ögonpinnar. ELLER (ii) Tvåfaldig ökning av anti-PsaA-antikroppskoncentrationen mätt med ELISA i två serumprover erhållna med minst 5 dagars mellanrum 21 OCH närvaro i urinen av pneumokockkapselpolysackarid detekterad med latexagglutinationsanalys 46. ARI definieras av en akut (<2 veckor) historia av hosta eller andningssvårigheter åtföljd av en förhöjd andningsfrekvens (≥50/min hos ett barn <12 månader, ≥40/min hos ett barn 12-23 månader). ARI är allvarlig om det dessutom finns en indragning i bröstet och mycket allvarlig om det dessutom finns central cyanos och utmattning eller oförmåga att dricka 47.

   RADIOGRAFISK PNEUMONI definieras som ARI åtföljd av radiografisk konsolidering. Alla röntgenbilder kommer att bedömas både av studieläkare och av en konsulterande röntgenläkare. "Radiografisk konsolidering" kommer endast att anses vara närvarande om den dokumenteras av båda observatörerna.

   MENINGIT: Meningit definieras för att rikta in sig på användningen av ytterligare diagnostiska tester för IPD. Det krävs en definition som är känslig men inte nödvändigtvis särskilt specifik för pneumokock meningit. Alla barn som överförs till KEMRI högberoendeenhet med en klinisk diagnos av "meningit", alla barn som påbörjats med standardmeningitantibiotikaregimen, eller alla barn med ett förhöjt CSF-leukocytantal eller CSF/plasmaglukosförhållande på <0,5 kommer att vara anses vara ett fall av hjärnhinneinflammation i denna studie.

   En enstaka episod av sjukdom kan uppfylla en, två, tre eller alla falldefinitioner. Definitionen av IPD är för användning i fall-kontrollstudien. De andra definitionerna är avsedda för studier av incidens och etiologi av svår ARI och radiografisk lunginflammation och för att styra flödet av utredningar av patienter med misstänkt IPD.

4. Laboratoriemetoder ANTIKAPSULAR IGG ELISA. Metoden enligt Quataert et al. kommer att användas med mindre modifieringar 13,14. Plattbottnade mikrotiterplattor (Nunc Maxisorb, Nunc, Finland) är belagda med 20 μg/ml renad kapselpolysackarid (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA) i 0,01 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS), pH 7,2, i 5 timmar vid 37oC och sedan förvaras vid 4oC. Plattorna tvättas fem gånger med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 efter varje steg. Testsera späds 1:50 i 1 % bovint serumalbumin, 0,05 % Tween-20 i PBS innehållande 10 μg/ml C-polysackarid (Statens Seruminstitut, Köpenhamn, Danmark) och 20 μg/ml polysackarid av serotyp 22F (amerikansk typ C) Samling) inkuberades i 30 minuter vid rumstemperatur. Testsera alikvoteras på plattan i duplikat i 8 trefaldiga spädningar och inkuberas vid rumstemperatur under 1 timme. Ett standardreferensserum (89SF, Dr Carl Frasch, FDA, USA) och en kontroll (post-vaccinationsserum från en individ med bra svar på alla vaccinserotyper) analyseras på varje platta i sju trefaldiga spädningar. Bunden antikropp märks med alkaliskt fosfataskonjugerat get-anti-humant IgG i en 2 timmars inkubation vid rumstemperatur. Bundet enzym visualiseras med p-nitrofenylfosfat i dietanolaminsubstrat (Sigma) under 2 timmar vid rumstemperatur och reaktionen stoppas med 3M NaOH. Plattorna läses av en ELISA-läsare vid en våglängd av 450 nm med ett referensfilter på 620 nm. Resultaten analyseras med ett 4-parameters logistic-log curve fit-program (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) och uttrycks i relation till de kända koncentrationerna av referensserumet.

   ELISA FÖR ANTI-PSAA: Metoden enligt Tharpe et al. kommer att användas på par eller triplikat av sera. Plattbottnade mikrotiterplattor (Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA) är belagda med 2,5 μg/ml renad PsaA i 0,01 M fosfatbuffrad saltlösning (PBS), pH 7,2, under 16 timmar vid 4oC. PsaA produceras genom rekombination och uttryck i Escherichia coli av genen som kodar för PsaA. Plattorna tvättas fyra gånger med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 efter varje steg förutom blockering, då plattorna helt enkelt töms. Plattorna blockeras under 1 timme vid 37°C med 1% bovint serumalbumin (EIA Grade, Sigma Chemical Co., St Louise, MO) 10 mg/L i PBS. Testsera späds i 1 % bovint serumalbumin, 0,05 % Tween-20 i PBS och inkuberas i 1 timme vid 37oC. Testsera analyseras i duplikat i 8 tvåfaldiga spädningar och alla sera från en patient analyseras på samma platta. Ett referensserum med hög anti-PsaA-koncentration och en kontroll (Sandoglobulin, Sandoz, Schweiz) analyseras på varje platta i sju 2-faldiga spädningar. Bunden antikropp är märkt med mus monoklonalt anti-humant IgG-Fc konjugerat till pepparrotsperoxidas (klon PH6043, Hybridoma Reagent laboratories, Baltimore, MD) i en 2 timmars inkubation vid 37oC. Bundet enzym visualiseras med tetrametylbensidin (TMB 1-komponent mikrobrunnsperoxidassubstrat, Kirkegaard and Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD) under 30 minuter vid rumstemperatur och reaktionen stoppas med 0,18 M svavelsyra. Plattorna läses av en ELISA-läsare vid en våglängd av 450 nm med ett referensfilter på 620 nm. Resultaten analyseras med ett 4-parameters logistic-log curve fit-program (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) och uttrycks i ELISA-enheter som en procentandel av koncentrationen av referensserumet.

5. Datalagring Rekryterings- och uppföljningsblanketter kommer att förvaras på ett låst studiekontor. Information från formulären kommer att matas in i en dator med Filemaker Pro 5.5 och kopplas på studienummer och besök med laboratoriedata.