Dynamikken af ​​immunresponsen hos børn på den 23-valente pneumokokkapselpolysaccharidvaccine (Pneumovax)

Detaljerne er som beskrevet nedenfor:

1. Studiested Kilifi District Hospital.
2. Undersøgelsespopulation og prøveudtagning Tilfælde og kontroller fra Kilifi-fødselskohorten, som er i live ved slutningen af ​​kohorteobservationen (i en alder af 24 måneder) og forbliver bosiddende i Kilifi-distriktet, vil blive vaccineret med en enkelt 0,5 ml subkutan dosis på 23 valent pneumokokpolysaccharidvaccine (Pneumovax 23) for at sammenligne dynamikken i det antikapselformede antistofrespons på 5 kapselantigener valgt til at repræsentere forskellige immunologiske profiler af pneumokokkapselpolysacchariderne (1, 6B, 14, 19F, 23F).

3. Rekruttering Potentielle forsøgspersoner vil blive identificeret, og deres mødre vil blive kontaktet, informeret om undersøgelsen, herunder nødvendigheden af ​​at gennemgå hiv-testning, og inviteret til at deltage. En feltarbejder vil forklare begrundelsen og procedurerne for undersøgelsen og vil give moderen et informationsark/samtykkeformular til at tage med. Moderen vil også få udleveret en aftaleseddel og en billetpris for at vende tilbage til hospitalet på aftaledatoen. Aftaler vil være på afdeling 1. Når moderen vender tilbage, vil feltarbejderen gennemgå samtykkeerklæringen igen og bede moderen om at underskrive. Moderen vil blive rådgivet, og hendes barn vil blive HIV-testet. Hvis deltageren er positiv, vil barnet blive henvist til Kilifi Familieklinik. Hvis deltageren er negativ, vil barnet modtage en enkelt dosis Pneumovax (23 valent polysaccharidvaccine). Moderen vil få en tidsplan med 2 yderligere tider til blodprøver, og ved hvert besøg vil billetprisen til og fra hospitalet blive leveret af KEMRI. Forsøgspersoner, der er vaccineret og efterfølgende ikke deltager, får besøg af FW på motorcykel for at invitere dem til at holde deres aftaler allerede dagen efter. Der vil blive indsamlet oplysninger om alder, køn og miljøeksponeringer såsom: antal ældre og yngre søskende i huset, eksponering for madlavning, passiv cigaretrygning, nylig indlæggelse på hospitalet.

   Definition af tilfælde:

   Tilfælde af IPD, ARI eller radiografisk lungebetændelse og meningitis vil blive defineret som sygdomsepisoder, der kræver hospitalsindlæggelse, som forekommer hos kohortemedlemmer mellem fødslen og alderen på 23 måneder, som også opfylder mindst én af følgende syndromdefinitioner: INVASIV PNEUMOKOKKAL SYGDOM defineres ved et positivt resultat på ENHVER af følgende kriterier: (i) dyrkning af S. pneumoniae fra et hvilket som helst normalt sterilt sted, herunder blod, CSF, lunge, ledvæske, men med undtagelse af mellemørevæske og ydre øjenpodninger. ELLER (ii) To gange stigning i anti-PsaA-antistofkoncentration målt ved ELISA i to serumprøver opnået med mindst 5 dages mellemrum 21 OG tilstedeværelse i urinen af ​​pneumokokkapselpolysaccharid påvist ved latexagglutinationsassay 46. ARI er defineret ved en akut (<2 uger) historie med hoste eller åndedrætsbesvær ledsaget af en forhøjet respirationsfrekvens (≥50/min hos et barn <12 måneder, ≥40/min hos et barn 12-23 måneder). ARI er alvorlig, hvis der desuden er indtrængning af brystet, og meget alvorlig, hvis der desuden er central cyanose og udmattelse eller manglende evne til at drikke 47.

   RADIOGRAFISK PNEUMONI er defineret som ARI ledsaget af radiografisk konsolidering. Alle røntgenbilleder vil blive bedømt både af undersøgelsens læger og af en rådgivende radiolog. "Radiografisk konsolidering" vil kun blive anset for at være til stede, hvis det er dokumenteret af begge observatører.

   MENINGITIS: Meningitis er ved at blive defineret for at målrette brugen af ​​yderligere diagnostiske tests for IPD. Der kræves en definition, som er følsom, men ikke nødvendigvis meget specifik for pneumokok-meningitis. Ethvert barn, der overføres til KEMRI-afdelingen for høj afhængighed med en klinisk diagnose "meningitis", ethvert barn, der er startet på standard-meningitis-antibiotikaregimet, eller ethvert barn med et forhøjet CSF-leukocyttal eller CSF/plasma-glucoseforhold på <0,5 vil være betragtes som et tilfælde af meningitis i forbindelse med denne undersøgelse.

   En enkelt sygdomsepisode kan opfylde en, to, tre eller alle tilfældesdefinitioner. Definitionen af ​​IPD er til brug i case-kontrolundersøgelsen. De andre definitioner er til brug i undersøgelsen af ​​forekomst og ætiologi af svær ARI og radiografisk lungebetændelse og til at guide flowet af undersøgelser af patienter med mistanke om IPD.

4. Laboratoriemetoder ANTIKAPSULAR IGG ELISA. Metoden ifølge Quataert et al. vil blive brugt med mindre ændringer 13,14. Fladbundede mikrotiterplader (Nunc Maxisorb, Nunc, Finland) er coatet med 20 μg/ml oprenset kapselpolysaccharid (American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA) i 0,01M fosfatbufret saltvand (PBS), pH 7,2, i 5 timer ved 37oC og derefter opbevaret ved 4oC. Pladerne vaskes fem gange med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 efter hvert trin. Testsera er fortyndet 1:50 i 1% bovint serumalbumin, 0,05% Tween-20 i PBS indeholdende 10 μg/ml C-polysaccharid (Statens Seruminstitut, København, Danmark) og 20 μg/ml polysaccharid af serotype 22F (amerikansk type C) Opsamling) inkuberet i 30 minutter ved stuetemperatur. Testsera fordeles på pladen i to eksemplarer i 8 tre-fold fortyndinger og inkuberes ved stuetemperatur i 1 time. Et standard referenceserum (89SF, Dr. Carl Frasch, FDA, USA) og en kontrol (post-vaccinationsserum fra et individ med gode responser på alle vaccineserotyper) analyseres på hver plade i syv 3-dobbelte fortyndinger. Bundet antistof mærkes med alkalisk phosphatasekonjugeret gede-anti-humant IgG i en 2 timers inkubation ved stuetemperatur. Bundet enzym visualiseres med p-nitrophenylphosphat i diethanolaminsubstrat (Sigma) i 2 timer ved stuetemperatur, og reaktionen standses med 3M NaOH. Plader aflæses af en ELISA-læser ved en bølgelængde på 450 nm med et referencefilter på 620 nm. Resultaterne analyseres ved hjælp af et 4-parameter logistisk-log kurvetilpasningsprogram (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) og udtrykt i forhold til de kendte koncentrationer af referenceserumet.

   ELISA FOR ANTI-PSAA: Fremgangsmåden ifølge Tharpe et al. vil blive brugt på par eller triplikater af sera. Fladbundede mikrotiterplader (Immunlon II HB, Dynatech Corp, Chantilly, VA) overtrækkes med 2,5 μg/ml oprenset PsaA i 0,01 M fosfatbufret saltvand (PBS), pH 7,2, i 16 timer ved 4oC. PsaA produceres ved rekombination og ekspression i Escherichia coli af genet, der koder for PsaA. Pladerne vaskes fire gange med PBS, pH 7,2, med 0,05 % Tween-20 efter hvert trin undtagen blokering, når pladerne blot tømmes. Pladerne blokeres i 1 time ved 37oC med 1 % bovint serumalbumin (EIA Grade, Sigma Chemical Co., St. Louise, MO) 10 mg/L i PBS. Testsera fortyndes i 1 % bovint serumalbumin, 0,05 % Tween-20 i PBS og inkuberes i 1 time ved 37oC. Testsera analyseres to gange i 8 dobbeltfortyndinger, og alle sera fra én patient analyseres på den samme plade. Et referenceserum med høj anti-PsaA-koncentration og en kontrol (Sandoglobulin, Sandoz, Schweiz) analyseres på hver plade i syv 2-folds fortyndinger. Bundet antistof er mærket med muse monoklonalt anti-humant IgG-Fc konjugeret til peberrodsperoxidase (klon PH6043, Hybridoma Reagent laboratories, Baltimore, MD) i en 2 timers inkubation ved 37oC. Bundet enzym visualiseres med tetramethlybenzidin (TMB 1-komponent mikrobrøndperoxidasesubstrat, Kirkegaard and Perry Laboratories Inc, Gaithersburg, MD) i 30 minutter ved stuetemperatur, og reaktionen standses med 0,18 M svovlsyre. Plader aflæses af en ELISA-læser ved en bølgelængde på 450 nm med et referencefilter på 620 nm. Resultaterne analyseres ved hjælp af et 4-parameter logistisk-log-kurvetilpasningsprogram (ELISA v1.11, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) og udtrykt i ELISA-enheder som en procentdel af koncentrationen af ​​referenceserumet.

5. Datalagring Rekruttering og opfølgningsskemaer vil blive opbevaret på et aflåst studiekontor. Oplysninger fra formularerne vil blive indtastet på en computer ved hjælp af Filemaker Pro 5.5 og vil blive forbundet på undersøgelsesnummer og besøg med laboratoriedata.